Bir HMBA reçineden Yarılma Prosedürü: "emniyet yakalamak" kullanılarak, bir fonksiyonlandırılmış bis-peptit trimerininkinden verimli bir katı-faz peptid sentezi açıklanmaktadır.
1962 yılında, RB Merrifield verimli bir peptid sentezi için yeni bir yol olarak katı-faz peptid sentezi ile ilk yayınlanmış prosedürü. Bu teknik, hızlı zaman ve emek hem de çözüm fazlı önceki üzerinden avantajlı olduğunu kanıtladı. Sağlam bir destek niteliği ile ilgili Gelişmeler, koruyucu gruplar istihdam ve son beş yılda istihdam kaplin yöntemleri yalnızca Merrifield orijinal sistemin yararlılığı artmaktadır. Günümüzde, bir Boc-bazlı koruyucu ve baz / nükleofil yarılabilir reçine strateji veya Fmoc-bazlı koruma ve asidik reçine yarılabilir stratejisinin kullanımı, en yaygın olarak 1 peptit sentezi için kullanılır, RC Sheppard öncülük.
Merrifield en katı destek stratejisi esinlenerek, biz burada açıklanan fonksiyonlandırılmış bis-peptidler 2, montaj için bir Boc / tert-bütil katı-faz sentezi bir strateji geliştirdik. T karşılaştırıldığında, katı-faz sentezi ile kullanılmako çözelti faz yöntemleri Merrifield 1 tarafından tarif edildiği gibi zaman ve hem de çalışma avantajlı olarak, yalnızca değil ama aynı zamanda bis-peptid kütüphaneleri sentezinde daha kolay bir şekilde sağlar. Burada göstermektedir ki sentezi iki adımlı bir diketopiperazine oluşumu ile reçineden bis-peptit fonksiyonlandırılmış serbest bırakmak için mekanizması "emniyet yakalamak" kullanan bir son bölünme aşaması içerir.
Bis-peptidler tipi ve stereokimyasal monomer birimlerinden ve her bir monomer arasındaki bağlantı ile kontrol edilen bir tahmin edilebilir ve designable şekilde, işlevselliği konumlandırmak için mümkün olan bis-amino asit, katı, spiro-merdiven oligomerler vardır. Her bir bis-amino asit, iki amino asit (bir α-amin ile bir karboksilik asit) 3,4 içeren bir stereokimyasal olarak saf, siklik iskelesi olup. Laboratuvarımız şu kataliz, protein-protein etkileşimleri ve n de dahil olmak üzere, geniş bir alan üzerinde çeşitli işlevsel bir bis-peptidlerin potansiyeli soruşturmaanomaterials.
Burada sunulan sentetik bir yaklaşım sık katı-faz peptid sentezi yöntemleri kullanılarak bis-amino asit inşa edici bloklar fonksiyonlandırılmış bis-peptid sentezi için bir yöntem sağlar. Trans-4-hidroksiprolin 3 bu "Pro4" yapı taşlarından monomer sentezi yüksek ölçeklenebilir ve başarılı bir 600 mg (234 gr) ölçeği (yayımlanmamış) de hidantoin aşaması tamamlanmıştır. Monomerler yandan yerleştirildikten sonra, katı-faz tekniklerin kullanımı reaksiyon work-up ve ara saflaştırılması için ihtiyacı ortadan kaldırarak, mevcut çözelti faz yöntemleri 4 den bis-peptid sentezi daha hızlı bir yöntem sağlar.
Katı faz sentezinde primer zorluğun, ara izole edilir yana çözme sentetik ilerleme ve problem teşhis edilir. Bu tanımlamak için de dahil olmak üzere pek çok kolorimetrik testlerin gelişmesine yol açmıştır halinde serbest aminlerin (Kaiser Testi 10) ya da serbest hydroxYLS (Metil Red Testi 7) reçine maruz kalmaktadır. Ne yazık ki, yaygın olarak kullanılan Kaiser Testi 10, bir kuaterner karbona bağlı sekonder aminler ya aminlerin hemen özel kullanımına bağlı olarak bizim katı-faz sentezi genel olarak uygulanabilir değildir. HMBA reçine değerlendirmesi için diğer seçenekler gibi hidrazin 11, UV / Vis 1,11 ile takip kantitatif Fmoc bölünme gibi bir nükleofil kullanarak ve yakalama ve gelen aktif bileşikler analiz testi bölünmelere içerir.
Katı-faz sentezi dahilinde bir başka sorun, göz ardı operatör tarafından istenen sentetik adımlardan tekrarlanan olmasıdır. Bu zihin ile herhangi bir manuel katı-faz peptid sentezi gerçekleştirirken, yazarlar güçlü bir elektronik tablo veya kontrol listesi kullanmanızı öneririz.
Ortak bir α-amino asit ile karşılaştırıldığında bir katı-faz sentezi için bis-peptidler kullanarak zor sterik hin nedeniyle daha zor kavramaları için potansiyel içerirdrance, on-reçine diketopiperazine kapatma ihtiyacı ve aynı anda deprotections (Boc / tBu; Cbz / tBu). Başka daha zor geleneksel yöntemlerle karşılaştırıldığında, bu "emniyet mandalı" yöntemi ile reçineden sayısal yayın elde yatmaktadır. Akılda bu faktörler ile, bu yöntemin daha optimizasyonu sağlanır ve mevcut çabaları burada sunulan yöntemi geliştirmek için grubumuzda sürmektedir edilebilir olması çok mümkündür.
The authors have nothing to disclose.
Yazarlar, yararlı tartışmalar için bu katı faz sentezi tekniği ve Matthew FL Parker ilk geliştirme Dr Zachary Z. Brown ve Jennifer Alleva teşekkür etmek istiyorum. Bu çalışma Cephalon, Inc tarafından desteklenen Savunma Tehdit Azaltma Dairesi (DOD-DTRA) (HDTRA1-09-1-0009) ve Horst Witzel Burs Ödülü tarafından desteklenmektedir
Name | Company | Catalogue Number | Comments |
HMBA-Am Resin | NovaBiochem | 855018 | |
MSNT | NovaBiochem | 851011 | |
NMI | Sigma-Aldrich | 336092 | Toxic, Corrosive |
DCM | Sigma-Aldrich | D65100 | Carcinogenic |
Anhydrous DCM | Acros | 34846 | Carcinogenic |
33% Hydrogen Bromide in Acetic Acid | Sigma-Aldrich | 248630 | Toxic, Corrosive, Fumes when open |
DIPEA | Sigma-Aldrich | 387649 | Flammable, Toxic, Corrosive |
DMF | Fisher Scientific | AC27960 | Flammable, Toxic |
Anhydrous DMF | Acros | 34843 | Flammable, Toxic |
HOAt | GenScript | C01568 | |
DIC | Acros | BP590 | Flammable, Toxic, Corrosive |
TFA | Sigma-Aldrich | T6508 | Toxic, Corrosive |
TIPS | Acros | 21492 | Flammable, Toxic |
Piperidine | Sigma-Aldrich | 104094 | Flammable, Toxic, Corrosive |
HATU | GenScript | C01566 | Toxic |
NMP | Acros | 36438 | Toxic |
DMAP | NovaBiochem | 851055 | Toxic |
Methyl Red | Sigma-Aldrich | 250198 | |
THF | Sigma-Aldrich | 401757 | Flammable, Toxic, Peroxide Forming |
Pyrrolidine | Sigma-Aldrich | P73803 | Flammable, Toxic, Corrosive |
Dimethyl Sulfoxide | Fisher | D1281 | |
SPPS Reaction Vessels | Grace | 211108 | |
LCMS | Agilent | 1200 Series | |
Semi-Prep LC | Hewlett Packard | 1100 Series | |
Lyophilizer | Labconco | 7934027 | |
Rotovapor | Buchi | R-210 Series | |
Argon | Airgas | AR PP300CT |