Summary

小鼠浅表淋巴结手术

Published: May 21, 2012
doi:

Summary

遵循多时间内相同的鼠标免疫反应的进展,淋巴结可以依次通过手术切除。在这里,我们描述了这种技术可以如何执行。

Abstract

在免疫学领域,了解进展对疫苗,感染或肿瘤的免疫反应,反应之后往往随着时间的推移。同样,淋巴细胞稳态的研究需要时间课程实验。这些研究是在相同的鼠标理想,以减少实验的变异,以及使用的老鼠数量。抽血时间课程实验允许的性能,但它只能提供约外周血淋巴细胞的信息,并提供数量有限的细胞1-4。由于通过人体循环和居住在淋巴结中的淋巴细胞有不同的特性,重要的是要检查这两个地方。淋巴结顺序切除手术提供了一个独特的机会,后续的免疫反应或免疫细胞膨胀,随着时间的推移相同的鼠标。此外,这种技术的产生,这是足够的PE 1-2X10 6个淋巴结细胞之间rform表型特征和/或功能分析。顺序淋巴结手术或淋巴结清扫已成功地应用于我们和其他国家5-11。在这里,我们描述如何可以通过一个小切口,在皮肤一个anesthetised鼠标删除臂丛和腹股沟淋巴结肿大。由于手术是肤浅的,并迅速完​​成,鼠标恢复速度非常快,愈合好,不会遇到过多的疼痛。每隔一天,有可能收获一个或两个淋巴结允许时间课程实验。因此,该技术是适合学习节点居住淋巴细胞淋巴结的特点,随着时间的推移。这种方法适用于各种实验设计,我们相信,许多实验室将受益于执行顺序淋巴结手术。

Protocol

1。手术前的准备工作根据加拿大动物护理准则理事会处理小鼠。 anesthetise小鼠注射氯胺酮/甲苯​​噻嗪(150/300毫克/千克,IP)或异​​氟醚吸入(2%,1L氧气)。如果可以,异氟醚应该使用,因为它允许为更好地控制麻醉时间和深度。此外,氧管理的同时,支持动物的生理功能。此外,异氟醚直接消除肺部,因此并不需要肝,肾代谢。 注入丁丙诺啡(0.05 – …

Discussion

我们已经描述了LN的手术协议,它可以适用于许多实验系统。虽然非常有益的免疫反应或免疫细胞的平衡,这种技术具有一些限制。首先,只有四个LNS可以收获。二,免疫反应的研究必须是系统性的,或发生在腹股沟浅淋巴结或臂丛(皮肤排出)。最后,收获细胞数号法律公告搬迁的质量,技术的限制,这可能有助于实验变异时需要绝对细胞数的影响。然而,对靶细胞的百分比,对自己,可以提?…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

我们感谢西尔维·为该协议的的关键的读数的勒萨热和的所有劳顾会委员。这项工作被受支持的由一个从的作者:卫生研究所(CIHR)的的加拿大研究院的的授出日期(澳门币-77545)。纳萨莉拉布雷克被由一个FRSQ的高级奖学金的的支持,,和MELISSA的Mathieu收到1 NSERC亚历山大·格雷厄姆·加拿大贝尔公司研究生奖学金。

Materials

Reagent Name Company Catalog number Comments
Graefe Fine Pattern Premium Forceps Harvard Apparatus 52-2144 Strongly Curved, 10 cm (4 in), 0.8 mm tip
Michel Clip Applying and Removing Forceps Harvard Apparatus 52-3779 12.5 cm (5 in)
Michel Clip 100 Harvard Apparatus 52-3746 7.5-1.75 mm
Temgesic (Buprenorphine hydrochloride) Schering-Plough    
Vetalar (Ketamine hydrochloride) Boniche Animal Healthcare   DIN: 01989529
Rompun (Xylazine) Bayer   DIN: 02169592
Isoflurane ABBOTT   DIN: 02032384
Hypotears eye ointment Novartis Ophtalmics   DIN: 02133288
Baxedin (Clorhexidine gluconate 2% in isopropyl alcohol 70%) Omega L0000017 DIN: 02251477

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Cite This Article
Mathieu, M., Labrecque, N. Murine Superficial Lymph Node Surgery. J. Vis. Exp. (63), e3444, doi:10.3791/3444 (2012).

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