В данной статье приводится описание того, как анализировать и записывать с изолированной сетчатки препарат в мышь. В частности, мы описываем, как записывать свет ответы от флуоресцентно меченных популяции клеток ганглия, а затем определить и проанализировать его морфологии.
Abstract
Первые шаги в позвоночных видения происходят, когда свет стимулирует палочек и колбочек, фоторецепторы сетчатки 1. Эта информация затем разделены на так называемые ВКЛ и ВЫКЛ путей. Фоторецепторов световой сигнал информацию биполярных клеток (БЦ), который деполяризовать в ответ на повышение (на БЦ) или уменьшается (Off БЦ) в интенсивности света. Это разделение света информация хранится на уровне ганглиозных клеток сетчатки (РГК), которые имеют дендриты стратификации в любом Off sublamina внутреннего слоя плексиформные (IPL), где они получают прямые возбуждающие вклад Off БЦ, или стратификации в На sublamina из IPL, где они получают прямые возбуждающие вклад На БЦ. Это разделение информации относительно увеличения или уменьшения освещения (включение и выключение пути) остается неизменной, а сигнал к мозгу параллельно.
РГК являются выход клетки сетчатки, и, таким образом, важные ячейки для изучения, чтобы понять, как свет информация сигналом для визуальной ядер в мозге. Прогресс в генетике мышей в течение последних десятилетий привели различные флуоресцентные репортер мыши линии, где конкретные РГК населения помечены флуоресцентным белком, чтобы для идентификации подтипов RGC 2 3 4 и таргетинга на электрофизиологические записи. Здесь мы представляем метод регистрации света ответы от флуоресцентно меченных ганглиозных клеток в неприкосновенности, изолированной сетчатки подготовки. Это изолировало сетчатки подготовка позволяет записей с РГК, где дендритных беседки не поврежден и входы на всей РГК беседка дендритных сохраняются. Этот метод применим в различных подтипов ганглиозных клеток и может принять самые разнообразные одноклеточные физиологических методов.
Protocol
Животное использования Соглашение о: Животные были уходом в соответствии с указаниями, приведенными в руководстве по уходу и использованию лабораторных животных, используя протоколы утверждаются Университетом Миннесоты Институциональные уходу и использованию животн?…
Discussion
Этот метод применим к любой ганглиозных клеток сетчатки записи с изолированной сетчатки. Хотя у мышей линии, используемой выше внутренне светочувствительная, меланопсин экспрессирующих РГК помечены 2 EGFP, 5, этот протокол можно легко перенести в другие флуоресцентно меченных РГК …
Acknowledgements
Эта работа была частично поддержана грантами NIH R01EY012949, R21EY018885, T32 EY0707133. Мы благодарим Дарвина повесить за его техническую помощь.
Schmidt, T. M., Kofuji, P. An Isolated Retinal Preparation to Record Light Response from Genetically Labeled Retinal Ganglion Cells. J. Vis. Exp. (47), e2367, doi:10.3791/2367 (2011).