Summary

Experimentelle Metastasierung und CTL adoptiven Transfer Immuntherapie Maus-Modell

Published: November 26, 2010
doi:

Summary

Eine experimentelle Lungenmetastasen und CTL Immuntherapie Mausmodell für die Analyse von Tumorzellen-T-Zell-Interaktion<em> In vivo</em>.

Abstract

Experimentelle Metastasen Mausmodell ist eine einfache und dennoch physiologisch relevanten Metastasen-Modell. Die Tumorzellen werden intravenös (iv) in Maus-tail Venen gespritzt und besiedeln in der Lunge und damit, ähnlich wie die letzten Schritte der Metastasierung von Tumorzellen spontan: Überleben in der Zirkulation, Extravasation und Kolonialisierung in den distalen Organen. Aus therapeutischer Sicht ist die experimentelle Metastasierung Modell die einfachste und ideale Modell, da das Ziel der Therapien ist oft der Endpunkt der Metastasierung: etablierte metastasierten Tumor in der distalen Orgel. In diesem Modell werden Tumorzellen iv injiziert Maus Schwanzvenen und erlaubt zu kolonisieren und in der Lunge wachsen. Tumor-spezifische CTLs werden dann iv in den Metastasen tragenden Maus injiziert. Die Anzahl und Größe der Lungenmetastasen kann durch die Anzahl der Tumorzellen injiziert werden und die Zeit des Tumorwachstums gesteuert werden. Deshalb verschiedenen Stadien der Metastasierung, von minimal Metastasen zu ausgedehnter Metastasierung, werden modelliert. Lungenmetastasen werden durch die Inflation mit Tinte analysiert, so dass einfacher visueller Beobachtung und Quantifizierung.

Protocol

1. Experimentelle Metastasen Maus-Modell Am Tag vor der Tumorzelle Injektionen, Saatgut ein T75 Kolben mit bis zu 1 x 10 7 CMS4-Met-Zellen in 10 ml RPMI-Medium mit 10% Serum zu den schnell wachsenden Tumorzellen zu erhalten. Inkubieren über Nacht bei 37 ° C. Am Tag der Injektion, entfernen Sie das Medium und spülen Sie die Zellen einmal mit PBS, dann ernten die Tumorzellen mit 0,05% Trypsin-EDTA bei 37 ° C für 5 Minuten. Stoppen der Reaktion mit 10 ml RPMI-Medium mit 10% Serum. Trans…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Unterstützt durch Mittel der National Institutes of Health (CA133085 zu KL) und der American Cancer Society (RSG-09-209 bis 01-TBG zu KL).

Materials

Solutions:

India Ink Solution (17):

  1. Pour 150 ml of distilled water into a 250 ml flask.
  2. Add 4 drops ammonium hydroxide to the distilled water.
  3. Add 30 ml India Ink stock (i.e. Sanford Black Magic Waterproof Drawing Ink 4465 Item 44011) to the ammonia and water mixture.
  4. Top off with distilled water to a volume of 200 ml. Solution is ready for injection.

Fekete’s Solution (17):

Fekete’s solution is used to bleach India ink-inflated tumor-bearing lungs to distinguish white tumor nodules from the black background of normal tissues.

  1. Add 350ml 95% EtOH to 1L glass bottle.
  2. Add 150ml distilled water
  3. Add 50ml formaldehyde
  4. Add 25ml glacial acidic acid

References

  1. Ryan, M. H., Bristol, J. A., McDuffie, E., Abrams, S. I. Regression of extensive pulmonary metastases in mice by adoptive transfer of antigen-specific CD8(+) CTL reactive against tumor cells expressing a naturally occurring rejection epitope. J Immunol. 167 (8), 4286-4292 (2001).
  2. Caldwell, S. A., Ryan, M. H., McDuffie, E., Abrams, S. I. The Fas/Fas ligand pathway is important for optimal tumor regression in a mouse model of CTL adoptive immunotherapy of experimental CMS4 lung metastases. J Immunol. 171 (5), 2402-2412 (2003).
  3. Liu, K., Caldwell, S. A., Greeneltch, K. M., Yang, D., Abrams, S. I. CTL Adoptive Immunotherapy Concurrently Mediates Tumor Regression and Tumor Escape. J Immunol. 176 (6), 3374-3382 (2006).
  4. Yang, D., Stewart, T. J., Smith, K. K., Georgi, D., Abrams, S. I., Liu, K. Downregulation of IFN-gammaR in association with loss of Fas function is linked to tumor progression. International journal of cancer. 122 (2), 350-362 (2008).
  5. Pages, F., Berger, A., Camus, M. Effector memory T cells, early metastasis, and survival in colorectal cancer. N Engl J Med. 353 (25), 2654-2666 (2005).
  6. Galon, J., Costes, A., Sanchez-Cabo, F. Type, density, and location of immune cells within human colorectal tumors predict clinical outcome. Science. 313 (5795), 1960-194 (2006).
  7. Strater, J., Hinz, U., Hasel, C. Impaired CD95 expression predisposes for recurrence in curatively resected colon carcinoma: clinical evidence for immunoselection and CD95L mediated control of minimal residual disease. Gut. 54 (5), 661-665 (2005).
  8. Camus, M., Tosolini, M., Mlecnik, B. Coordination of intratumoral immune reaction and human colorectal cancer recurrence. Cancer research. 69 (6), 2685-2693 (2009).
  9. Dudley, M. E., Wunderlich, J. R., Yang, J. C. Adoptive cell transfer therapy following non-myeloablative but lymphodepleting chemotherapy for the treatment of patients with refractory metastatic melanoma. J Clin Oncol. 23 (10), 2346-2357 (2005).
  10. Srivastava, M. K., Sinha, P., Clements, V. K., Rodriguez, P., Ostrand-Rosenberg, S. Myeloid-derived suppressor cells inhibit T-cell activation by depleting cystine and cysteine. Cancer research. 70 (1), 68-77 (2010).
  11. Nagaraj, S., Gabrilovich, D. I. Tumor escape mechanism governed by myeloid-derived suppressor cells. Cancer research. 68 (8), 2561-2563 (2008).
  12. Nguyen, D. X., Bos, P. D., Massague, J. Metastasis: from dissemination to organ-specific colonization. Nature reviews. 9 (4), 274-284 (2009).
  13. Heijstek, M. W., Kranenburg, O., Rinkes, B. o. r. e. l., H, I. Mouse models of colorectal cancer and liver metastases. Digestive surgery. 22 (1-2), 1-2 (2005).
  14. Yang, D., Ud Din, N., Browning, D. D., Abrams, S. I., Liu, K. Targeting lymphotoxin beta receptor with tumor-specific T lymphocytes for tumor regression. Clin Cancer Res. 13 (17), 5202-5210 (2007).
  15. Yang, D., Thangaraju, M., Browning, D. D. IFN Regulatory Factor 8 Mediates Apoptosis in Nonhemopoietic Tumor Cells via Regulation of Fas Expression. J Immunol. 179 (7), 4775-4782 (2007).
  16. Yang, D., Thangaraju, M., Greeneltch, K. Repression of IFN regulatory factor 8 by DNA methylation is a molecular determinant of apoptotic resistance and metastatic phenotype in metastatic tumor cells. Cancer research. 67 (7), 3301-3309 (2007).
  17. Wexler, H. Accurate identification of experimental pulmonary metastases. Journal of the National Cancer Institute. 36 (4), 641-645 (1966).

Play Video

Cite This Article
Zimmerman, M., Hu, X., Liu, K. Experimental Metastasis and CTL Adoptive Transfer Immunotherapy Mouse Model. J. Vis. Exp. (45), e2077, doi:10.3791/2077 (2010).

View Video