Summary

Metastasi sperimentale e CTL adottivi Immunoterapia modello di trasferimento del mouse

Published: November 26, 2010
doi:

Summary

Una metastasi al polmone sperimentale e CTL modello murino immunoterapia per l'analisi delle cellule tumorali interazione cellule-T<em> In vivo</em>.

Abstract

Sperimentale modello murino metastasi è un modello metastasi semplice ma fisiologicamente rilevanti. Le cellule tumorali vengono iniettate per via endovenosa (iv) nelle vene coda di topo e colonizzare nei polmoni, quindi, che assomiglia le ultime fasi della metastasi delle cellule tumorali spontanea: la sopravvivenza nel stravaso circolazione, e la colonizzazione negli organi distali. Da un punto di vista terapeutico, il modello sperimentale metastasi è il modello più semplice e ideale, poiché l'obiettivo delle terapie è spesso il punto finale di metastasi: stabilito tumore metastatico nell'organo distale. In questo modello, le cellule tumorali vengono iniettate nelle vene iv coda di topo e ha permesso di colonizzare e crescere nei polmoni. CTL tumore-specifici sono poi iniettate iv in metastasi portante del mouse. Il numero e le dimensioni delle metastasi polmonari possono essere controllati in base al numero delle cellule tumorali da iniettare e il momento della crescita tumorale. Pertanto, le varie fasi di metastasi, da metastasi minimo metastasi estese, possono essere modellati. Metastasi polmonari vengono analizzati con l'inflazione con l'inchiostro, permettendo così più facile l'osservazione visuale e la quantificazione.

Protocol

1. Modello sperimentale Metastasi mouse Il giorno prima della iniezioni di cellule tumorali, semi di uno T75 fiasco con un massimo di 1 x 10 7 CMS4-Met cellule in 10 ml di terreno RPMI contenente il 10% del siero per ottenere cellule tumorali in rapida crescita. Incubare per una notte a 37 ° C. Il giorno di iniezione, rimuovere il terreno e lavare le cellule una volta con PBS e poi raccogliere le cellule tumorali con il 0,05% tripsina-EDTA a 37 ° C per 5 minuti. Arrestare la reazione co…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Supportato anche da finanziamenti del National Institutes of Health (CA133085 a KL) e l'American Cancer Society (RSG-09-209-01-TBG a KL).

Materials

Solutions:

India Ink Solution (17):

  1. Pour 150 ml of distilled water into a 250 ml flask.
  2. Add 4 drops ammonium hydroxide to the distilled water.
  3. Add 30 ml India Ink stock (i.e. Sanford Black Magic Waterproof Drawing Ink 4465 Item 44011) to the ammonia and water mixture.
  4. Top off with distilled water to a volume of 200 ml. Solution is ready for injection.

Fekete’s Solution (17):

Fekete’s solution is used to bleach India ink-inflated tumor-bearing lungs to distinguish white tumor nodules from the black background of normal tissues.

  1. Add 350ml 95% EtOH to 1L glass bottle.
  2. Add 150ml distilled water
  3. Add 50ml formaldehyde
  4. Add 25ml glacial acidic acid

References

  1. Ryan, M. H., Bristol, J. A., McDuffie, E., Abrams, S. I. Regression of extensive pulmonary metastases in mice by adoptive transfer of antigen-specific CD8(+) CTL reactive against tumor cells expressing a naturally occurring rejection epitope. J Immunol. 167 (8), 4286-4292 (2001).
  2. Caldwell, S. A., Ryan, M. H., McDuffie, E., Abrams, S. I. The Fas/Fas ligand pathway is important for optimal tumor regression in a mouse model of CTL adoptive immunotherapy of experimental CMS4 lung metastases. J Immunol. 171 (5), 2402-2412 (2003).
  3. Liu, K., Caldwell, S. A., Greeneltch, K. M., Yang, D., Abrams, S. I. CTL Adoptive Immunotherapy Concurrently Mediates Tumor Regression and Tumor Escape. J Immunol. 176 (6), 3374-3382 (2006).
  4. Yang, D., Stewart, T. J., Smith, K. K., Georgi, D., Abrams, S. I., Liu, K. Downregulation of IFN-gammaR in association with loss of Fas function is linked to tumor progression. International journal of cancer. 122 (2), 350-362 (2008).
  5. Pages, F., Berger, A., Camus, M. Effector memory T cells, early metastasis, and survival in colorectal cancer. N Engl J Med. 353 (25), 2654-2666 (2005).
  6. Galon, J., Costes, A., Sanchez-Cabo, F. Type, density, and location of immune cells within human colorectal tumors predict clinical outcome. Science. 313 (5795), 1960-194 (2006).
  7. Strater, J., Hinz, U., Hasel, C. Impaired CD95 expression predisposes for recurrence in curatively resected colon carcinoma: clinical evidence for immunoselection and CD95L mediated control of minimal residual disease. Gut. 54 (5), 661-665 (2005).
  8. Camus, M., Tosolini, M., Mlecnik, B. Coordination of intratumoral immune reaction and human colorectal cancer recurrence. Cancer research. 69 (6), 2685-2693 (2009).
  9. Dudley, M. E., Wunderlich, J. R., Yang, J. C. Adoptive cell transfer therapy following non-myeloablative but lymphodepleting chemotherapy for the treatment of patients with refractory metastatic melanoma. J Clin Oncol. 23 (10), 2346-2357 (2005).
  10. Srivastava, M. K., Sinha, P., Clements, V. K., Rodriguez, P., Ostrand-Rosenberg, S. Myeloid-derived suppressor cells inhibit T-cell activation by depleting cystine and cysteine. Cancer research. 70 (1), 68-77 (2010).
  11. Nagaraj, S., Gabrilovich, D. I. Tumor escape mechanism governed by myeloid-derived suppressor cells. Cancer research. 68 (8), 2561-2563 (2008).
  12. Nguyen, D. X., Bos, P. D., Massague, J. Metastasis: from dissemination to organ-specific colonization. Nature reviews. 9 (4), 274-284 (2009).
  13. Heijstek, M. W., Kranenburg, O., Rinkes, B. o. r. e. l., H, I. Mouse models of colorectal cancer and liver metastases. Digestive surgery. 22 (1-2), 1-2 (2005).
  14. Yang, D., Ud Din, N., Browning, D. D., Abrams, S. I., Liu, K. Targeting lymphotoxin beta receptor with tumor-specific T lymphocytes for tumor regression. Clin Cancer Res. 13 (17), 5202-5210 (2007).
  15. Yang, D., Thangaraju, M., Browning, D. D. IFN Regulatory Factor 8 Mediates Apoptosis in Nonhemopoietic Tumor Cells via Regulation of Fas Expression. J Immunol. 179 (7), 4775-4782 (2007).
  16. Yang, D., Thangaraju, M., Greeneltch, K. Repression of IFN regulatory factor 8 by DNA methylation is a molecular determinant of apoptotic resistance and metastatic phenotype in metastatic tumor cells. Cancer research. 67 (7), 3301-3309 (2007).
  17. Wexler, H. Accurate identification of experimental pulmonary metastases. Journal of the National Cancer Institute. 36 (4), 641-645 (1966).

Play Video

Cite This Article
Zimmerman, M., Hu, X., Liu, K. Experimental Metastasis and CTL Adoptive Transfer Immunotherapy Mouse Model. J. Vis. Exp. (45), e2077, doi:10.3791/2077 (2010).

View Video