نموذج تجريبي لتقييم حل الالتهاب الرئوي
概要
تصف هذه المخطوطة إنشاء نموذج معدي للالتهاب الرئوي في الفئران وتوصيف حل الإصابة جنبا إلى جنب مع طرق نمو البكتيريا والتقطير داخل القصبة الهوائية. كما تم وصف نهج جديد باستخدام قياس التدفق الخلوي عالي الأبعاد لتقييم المشهد المناعي.
Abstract
تسبب متلازمة الضائقة التنفسية الحادة (ARDS) إصابة الرئة الحادة ، والتي تتميز بتلف سنخي سريع ونقص تأكسج الدم الشديد. وهذا بدوره يؤدي إلى ارتفاع معدلات المراضة والوفيات. حاليا ، لا توجد نماذج ما قبل السريرية تلخص تعقيد متلازمة الضائقة التنفسية الحادة البشرية. ومع ذلك ، يمكن للنماذج المعدية للالتهاب الرئوي (PNA) تكرار السمات الفيزيولوجية المرضية الرئيسية لمتلازمة الضائقة التنفسية الحادة. هنا ، نصف نموذجا ل PNA الناجم عن التقطير داخل القصبة الهوائية للمكورات العقدية الرئوية الحية و Klebsiella pneumoniae في الفئران C57BL6. من أجل تقييم وتوصيف النموذج ، بعد إحداث الإصابة ، أجرينا قياسات تسلسلية لوزن الجسم وغسل القصبات الهوائية (BAL) لقياس علامات إصابة الرئة. بالإضافة إلى ذلك ، قمنا بحصاد الرئتين من أجل عدد الخلايا والتفاضلات ، وقياس كمية بروتين BAL ، و cytospin ، وعدد وحدات تشكيل المستعمرات البكتيرية ، وعلم الأنسجة. أخيرا ، تم إجراء قياس التدفق الخلوي عالي الأبعاد. نقترح هذا النموذج كأداة لفهم المشهد المناعي خلال مراحل الحل المبكرة والمتأخرة لإصابة الرئة.
Introduction
لا تزال متلازمة الضائقة التنفسية الحادة (ARDS) متلازمة مميتة ومعطلة شائعة تصيب حوالي 10٪ من مرضى وحدة العناية المركزة (ICU) وما يصل إلى 23٪ من الأفراد الخاضعين للتهوية الميكانيكية ، مما يؤدي إلى معدل وفيات في المستشفى يتراوح بين 35٪ و 46٪ 1. علاوة على ذلك ، أعادت جائحة COVID-19 الأخيرة التأكيد على أهمية دراسة متلازمة الضائقة التنفسية الحادة. شكلت الحالات الإيجابية ل COVID-19 زيادة في وفيات متلازمة الضائقة التنفسية الحادة ، مما يسلط الضوء على محدودية العلاجات الدوائية2.
في البشر ، تتميز متلازمة الضائقة التنفسية الحادة بالظهور السريع لنقص الأكسجة في الدم (PaO2 / FiO2 < 300) ودليل على الوذمة الرئوية الثنائية غير الهيدروستاتيكية بسبب النفاذية السنخية الشعرية المفرطة والتهاب الأسناخ3. على الرغم من أن متلازمة الضائقة التنفسية الحادة توصف تقليديا بأنها نمط من إصابات الرئة الحادة (ALI) الثانوية لمجموعة متنوعة من الإهانات ، إلا أن الالتهاب الرئوي الجرثومي والفيروسي (PNA) لا يزال من بين الأسباب الأكثر شيوعا. تم وصف ثلاث مراحل فيزيولوجية مرضية رئيسية ، وهي المراحل النضحية والتكاثرية والتليفية ، في حين أن السمتين الأساسيتين الرئيسيتين لمتلازمة الضائقة التنفسية الحادة هما الالتهاب غير المنظم والاضطراب السنخيالشعري 4. خلال هذه العمليات ، يتم إنتاج الإصابة السنخية عن طريق إطلاق السيتوكينات الالتهابية (على سبيل المثال ، عامل نخر الورم [TNF-α] ، إنترلوكين [IL-1β ، IL-6 ، IL-8 ، إلخ]) ، تدفق العدلات والبلاعم الالتهابية ، وفيضان السوائل الغنية بالبروتين. في النهاية ، تؤدي هذه الأحداث إلى تلف سنخي غير مكتمل وثنائي5،6،7،8.
على الرغم من إحراز تقدم كبير في فهم إصابات الرئة المبكرة والتهابها ، إلا أن الآليات الكامنة وراء حل PNA أقل شهرة ويجب أن تكون محور التحقيقات الآلية المستقبلية. الهدف الرئيسي من ورقة الطريقة هذه هو تزويد الباحثين بنموذج لحل الإصابات للالتهاب الرئوي المعدي يمكنه تكرار السمات الفيزيولوجية المرضية الرئيسية لمتلازمة الضائقة التنفسية الحادة. نقترح أن يساعد هذا النموذج على فهم أفضل للآليات البيولوجية الكامنة وراء حل التهاب الرئة وإصلاحه ، وبالتالي يكون بمثابة منصة لعلاجات الإنقاذ.
يمكن تكرار مراحل علم الأمراض الفسيولوجية الرئيسية التي تحدث خلال متلازمة الضائقة التنفسية الحادة في النماذج الحيوانية قبل السريرية ل ALI ، والتي يجب أن تتضمن دليلا نسيجيا على الاستجابة الالتهابية ، وإصابة الأنسجة ، والخلل الفسيولوجي ، والتهاب الأسناخ ، وتغيير الحاجز السنخيالشعري 9. يعد نموذج الفأر الذي يحفز PNA و ALI مفيدا نظرا لقابليته العالية للتكاثر ، والتكاثر السريع ، وتوافر أدوات متعددة لإجراء الدراسات الميكانيكية والجزيئية. لا يوجد نموذج واحد يلخص بالكامل جميع ميزات متلازمة الضائقة التنفسية الحادة9 البشرية.
تسمح نماذج PNA في الفئران بتكرار الآليات الفيزيولوجية المرضية الرئيسية التي تنتجها متلازمة الضائقة التنفسية الحادة في البشر ، مثل البداية السريعة ، ودليل إصابة الأنسجة في الأنسجة ، وضعف الحاجز السنخي الشعري ، ودليل على الاستجابة الالتهابية ، والخلل الفسيولوجي مع إنتاج وفيات متواضعة10. يمكن إحداث النماذج المعدية عن طريق التوصيل الموضعي أو الجهازي للممرض ، مع كون الإعطاء داخل الأنف والقصبة الهوائية والوريد أكثر طرق الإعطاء شيوعا. يسمح الطريق داخل القصبة الهوائية بالتلقيح المباشر للعامل المعدي في الرئتين ، مما يقلل من الهباء الجوي ويحسن التسليم11,12.
يتم وصف منهجية نموذج الفئران قبل السريرية ل PNA عن طريق التقطير داخل القصبة الهوائية إما للمكورات العقدية الرئوية الحية (Spn) أو الكلبسيلة الرئوية (Kp). تمثل هذه النماذج بديلا جيدا لمتلازمة الضائقة التنفسية الحادة التي تنتجها بكتيريا PNA ، وتمتلك العديد من المزايا ، بما في ذلك: الأسباب السائدة ل PNA-ARDS البشرية (المكتسبة من المجتمع والمستشفيات) ؛ استنساخ عالية يمكن معايرة الوفيات والإصابات بسهولة (نمذجة درجات مختلفة من الالتهاب الرئوي) لإظهار استجابة التهابية قوية ، مما يؤدي إلى التهاب الأسناخ واختلال وظيفي في الشعيرات الدموية السنخية. تقييم المراحل المبكرة والمتأخرة من إصابة الرئة وحلها ؛ وتقييم الاستراتيجيات العلاجية في مراحل مختلفة من متلازمة الضائقة التنفسية الحادة.
Protocol
Representative Results
Discussion
توفر نماذج الفئران التجريبية ل PNA منصة لتقييم الآليات الخلوية والجزيئية الكامنة وراء الإصابة وحل متلازمة الضائقة التنفسية الحادة. تشمل المكونات الفيزيولوجية المرضية التي يمكن تقييمها المسارات الالتهابية المبكرة ، والإزالة البكتيرية ، وتغيرات المشهد المناعي الديناميكي ، وحل الالتهاب ، والانتشار الليفي ، وإصلاح الظهارة والأوعية الدموية16. ومع ذلك ، يجب مراعاة العديد من الجوانب عند التخطيط لتكرار هذا النموذج من إصابة الرئة الناجمة عن الالتهاب الرئوي ، بما في ذلك العمر والجنس وسلالة الفئران وعوامل المضيف الجوهرية (على سبيل المثال ، حالة نقص المناعة) ، والعامل الممرض المحدد والحمل البكتيري المستخدم ، وخبرة الموظفين الذين يقومون بالإجراء.
السلطة الوطنية الفلسطينية هي من بين الأسباب الرئيسية لمتلازمة الضائقة التنفسية الحادة. اخترنا استخدام Spn و Kpn الحية ، وهما السببان السائدان ل PNA المكتسب من المجتمع والمستشفى في البشر ،على التوالي 17. نقترح تحسين النماذج البكتيرية ل PNA عن طريق معايرة جرعات البكتيريا الحية لتحقيق ملف الوفيات والإصابات المطلوب الذي يناسب فرضية الباحث على أفضل وجه. لقد قمنا بتحسين تلقيح البكتيريا داخل القصبة الهوائية من 3 × 106 CFU ل Spn و 200 CFU ل Kpn في الفئران ، مما تسبب في التهاب السنخية ، وتعطيل الحاجز السنخي الشعري ، واختلال وظيفي في الأعضاء (الشكل 2). ومع ذلك ، يمكن أن تظهر الدفعات البكتيرية من مصادر مختلفة أو حتى داخل حلقات مكررة درجات مختلفة من الالتهاب والإصابة ، حتى عند استخدام نفس السلالة و CFU.
لذلك ، لتكرار النتائج المقدمة في هذه المخطوطة ، يجب على الباحثين البدء بتركيز البكتيريا الموصوف هنا. ومع ذلك ، قد يحتاجون إلى زيادة أو تقليل الجرعة للحصول على ملف تعريف نموذج مماثل. وبالتالي ، يجب تحسين كل دفعة جديدة من البكتيريا المستخدمة لتأثيرها المحتمل على حل الإصابة. نقدم نموذجا قويا ل PNA مع نتيجتين مختلفتين للقرار ، واحدة ذاتية الحل (Spn) والأخرى بطيئة / غير قابلة للحل (Kpn) والتي يمكن أن تكون بمثابة منصات للمحققين لتقييم الآليات المناعية واختبار التدخلات العلاجية ، خاصة في أو بعد ذروة العدوى (على سبيل المثال ، 2 أيام بعد الإصابة).
يؤثر العمر والجنس والإجهاد والعوامل الوراثية على حركية أنماط حل الإصابة16. على سبيل المثال ، يجعل الجنس الحل المعجل في الإناث مقارنة بالذكور18 ؛ لذلك ، تؤدي الزيادة في الحمل البكتيري إلى زيادة معدل الوفيات وتأخر الحل لدى الذكور مقارنة بالإناث. الشيخوخة هي عامل آخر يجب مراعاته عند معايرة CFU للبكتيريا المستخدمة. أظهرت الفئران المسنة معدل وفيات بنسبة 100٪ عندما استخدمنا جرعة Spn المحددة (غير الموضحة هنا). تستخدم الفئران الشابة بشكل متكرر في نماذج PNA للمكورات الرئوية (تتراوح من 6 إلى 14 أسبوعا) ، بينما تظهر الفئران المسنة (19-26 شهرا) استجابة مناعية متغيرة وتستخدم للتحقيق في دور الشيخوخة في PNA11. كان علينا تقليل CFU إلى 300٪ لتحقيق البقاء على قيد الحياة في المسنة (غير موضح هنا). تم استخدام ذكور الفئران C57BL / 6 (8-12 أسبوعا) في هذه الدراسة وتمت متابعتها خلال 6 إلى 10 أيام بعد الإصابة. يمكن أيضا العثور على اختلافات كبيرة في الحساسية بين السلالات. السلالات الفطرية مثل BALB / C و C57BL6 / J لها استجابات مختلفة للعدوى11,19.
يسمح التلقيح المباشر للبكتيريا داخل القصبة الهوائية بتوصيل أكثر دقة لللقاح (حتى 99٪) إلى الرئتين12 ، مما يمثل بديلا للأنماط المصلية الأقل ضراوة ويقلل من رذاذ البكتيريا11. ومع ذلك ، يمكن القول أنه إجراء جراحي. يمكن أن يكون التنبيب صعبا ، ويتطلب تخديرا جهازيا ، ويمكن أن يؤدي إلى صدمة القصبة الهوائية مع وذمة مجرى الهواء اللاحقة والصرير. يمكن للفئران تطوير منعكس وعائي مبهمي يؤدي إلى انقطاع النفس ، والذي يلزم أن يكون لديه جهاز تهوية صغير للفأر لتوفير دعم إضافي لجهاز التنفس الصناعي عند الحاجة. تعد خبرة الجراح الذي يقوم بإجراء العملية مكونا حاسما لضمان نجاح التنبيب11. في دراستنا ، لم تكن هناك حاجة إلى القتل الرحيم للفئران بسبب إدارة الألم المناسبة وعدم فقدان وزن الجسم بنسبة تزيد عن 20٪. لم تظهر أي علامات على الألم والضيق مثل الخمول أو عدم القدرة على الوصول إلى الماء أو الطعام أو صعوبة التنفس أو انخفاض اليقظة العقلية. الطرق البديلة للتوصيل البكتيري المباشر إلى الرئتين هي الشفط الفموي البلعومي ، على الرغم من أن حل إصابة الرئة يبدو أنه يحدث بشكل أسرع ، ويمكن أن تنتهي بعض البكتيريا في المعدة والجهاز الهضمي20.
تمكن النماذج قبل السريرية ل PNA الباحثين من تقييم المشهد المناعي. يمكن تقييم المقصورات القصبية والخلالية للتغيرات الديناميكية في الخلايا المناعية16. علاوة على ذلك ، يمكن زراعة الخلايا وتحفيزها خارج الجسم الحي لتحديد إنتاجها المحدد من السيتوكينات والكيموكينات. هنا ، نركز على استكشاف مشهد الخلايا المناعية في الرئة و BAL باستخدام قياس التدفق الخلوي متعدد الألوان. يمكن أيضا إجراء تسلسل الحمض النووي الريبي أحادي الخلية لفهم التوقيعات النسخية الخاصة بالخلية في مراحل مختلفة من حل الإصابة.
تولد نماذج PNA-ARDS تأثيرات نظامية يمكن اكتشافها مبكرا عن طريق قياس وزن الجسم أثناء المرض10. على الرغم من أننا لا نقيس بشكل مباشر التأثيرات الجهازية لمتلازمة الضائقة التنفسية الحادة ، إلا أنه يمكن أيضا تقييم خلل الأعضاء عن طريق قياس الدم لملفات الكيمياء ، وعن طريق حصاد الأنسجة المختلفة مثل الطحال والكلى والكبد من أجل الأنسجة. تم وصف التأثيرات الجهازية للمكورات الرئوية PNA-ARDS سابقا من قبل مجموعات أخرى باستخدام نفس سلالة البكتيريا21.
هنا ، يتم وصف نموذج ل PNA التجريبي يشبه بعض النتائج الفيزيولوجية المرضية الرئيسية الكامنة وراء متلازمة الضائقة التنفسية الحادة البشرية. على الرغم من عدم وجود نماذج مثالية تلخص تماما تعقيد وعدم تجانس متلازمة الضائقة التنفسية الحادةالبشرية 9 ، إلا أن هذه النماذج ذات صلة وقابلة للتكرار لدراسة آليات إصابة الرئة وإصلاحها ، كما أنها تعمل كمنصة لتحديد الأهداف الدوائية المحتملة الجديدة التي تركز على تسريع حل التهاب الرئة وتعزيز إصلاح الرئة.
開示
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
تم دعم هذه الدراسة من خلال منحة المعاهد الوطنية للصحة R01 HL131812 و R01HL163881.
Materials
| 1-200 µL Round 0.5 mm Thick Gel-Loading Pipet Tips | Corning | 4853 | |
| 2 mL Cryogenic vials | Corning Incorporated | 431420 | 2 mL self standing, round bottom, red cap, polypropylene |
| 2 mL Eppendorf Snap-Cap Microcentrifuge Biopur Safe-Lock Tubes | Fisherscientific | 05-402-24C | Shape: Round, Length (Metric): 38mm, Diameter (Metric) Outer: 10mm, Capacity (Metric): 2mL |
| 70 µm Cell Strainer | Falcon | 352350 | White, Sterile, Individually Packaged |
| 96-well Clear Round Bottom | Falcon | 353077 | TC-treated Cell Culture Microplate, with Lid, Individually Wrapped, Sterile |
| Acepromizine Maleate Injection, USP 500 mg/50 mL (10mg/mL) | Phoenix | NDC 57319-604-04 | EACH mL CONTAINS: acepromazine maleate 10 mg, sodium citrate 0.36%, Citric acid 0.075%, benzyl alcohol 1% and water for injection. |
| Ammonium-Chloride-Potassium (ACK) Lysing Buffer | Quality Biological | 118-156-721 | 4 x 100mL |
| Anti-mouse I-A/I-E | Biolegend | 107628 | APC/Cyanine7 anti-mouse I-A/I-E [M5/114.15.2]; Isotype: Rat IgG2b |
| BCA Protein Assay Kit | Thermo Scientific | 23225 | |
| BD Trypticase Soy Agar | BD-Biosciences | 90001-276 | 5% Sheep Blood Prepared Media Stacker Plates, BD Diagnostics |
| Biotix Disposable Reagent Reservoirs | Biotix | 89511-194 | |
| Bovine Serum Albumin | Sigma-Aldrih | A4503 | |
| CD103 | Invitrogen | 509723 | Integrin alpha E) Armenian Hamster anti-Mouse, FITC, Clone: 2E7 |
| CD11b | Invitrogen | RM2817 | PE-Texas Red, Clone: M1/70.15, Invitrogen |
| CD11c | BD Biosciences | 565872 | Hamster anti-Mouse, APC-R700, Clone: N418, BD Horizon |
| CD19 | Biolegend | 152410 | APC anti-mouse CD19 [1D3/CD19]; Isotype: Rat IgG2a, κ |
| CD24 | BD Biosciences | 563450 | Rat anti-Mouse, Brilliant Violet 711, Clone: M1/69 |
| CD4 | BD Biosciences | 563790 | BUV395; Clone: GK1.5 |
| CD45 | Biolegend | 103157 | Brilliant Violet 750 anti-mouse CD45 [30-F11]; Isotype: Rat IgG2b, κ; |
| CD8a | BD Biosciences | 612759 | Rat anti-Murine, Brilliant Ultraviolet 737, Clone: 53-6.7 |
| Cell Counting Slides | Bio-rad | 1450017 | For TC20 Cell Counter |
| Cell strainer 70 µL Nylon | Falcon | 198718 | REF 352350 |
| Collagenase Type1 | Worthington Biochemical Corporation | LS004197 | |
| Culti-Loop Streptococcus pneumoniae | Thermo Scientific | R4609015 | ATCC 4961 |
| Deoxyribonuclease I from bovine pancreas | Sigma-Aldrih | DN25 | |
| Disposable inoculation loops/needles | Fisherbrand | 22-363-603 | Color blue; Volume 1 µL |
| DMEM (Dulbecco’s Modified Eagle’s Medium) | Corning | 10-014-CV | |
| Fc Block | BD Biosciences | 553142 | CD16/CD32 Rat anti-Mouse, Unlabeled, Clone: 2.4G2 |
| Formalin solution | Sigma-Aldrih | HT501640 | Formalin solution, neutral buffered, 10% |
| Gauze Sponges, Covidien | Curity | 2146- | |
| gentleMACS C Tubes | MACS Miltenyi Biotec | 130-093-237 | |
| gentleMACS Dissociator | MACS Miltenyi Biotec | 130-093-235 | SN: 4715 |
| Hema 3 Manual Staining System and Stat Pack | Thermo Scientific | 23123869 | |
| Isoflurane Liquid Inhalation | Henry Schein | 1182097 | |
| IV CATHETER JELCO 20GX1.25" | Hanna Pharmaceutical Supply Co., Inc | 405611 | |
| Ketamine HCl Injection | Henry Schein | 1049007 | Ketamine HCl Injection MDV 100mg/mL 10mL 10/Box |
| Klebsiella pneumoniae | ATCC | 43816 | subsp. pneumoniae (Schroeter) Trevisan |
| Loctite 409 | Electron Microscopy Sciences | 7257009 | |
| Ly-6C | Biolegend | 128036 | Brilliant Violet 605 anti-mouse Ly-6C [HK1.4]; Isotype: Rat IgG2c |
| Ly-6G | BD Biosciences | 740157 | Rat anti-Mouse, Brilliant Violet 510, Clone: 1A8, BD Optibuild |
| MiniVent Type 845 | Hugo Sachs Elektronik- Harvard Apparatus | 4694 | D-79232 March (Germany) |
| NK-1.1 | BD Biosciences | 553165 | Mouse anti-Mouse, PE, Clone: PK136, BD |
| Phase Hemacytometer | Hausser Scientific | 1475 | |
| Phosphate-Buffered Saline | Corning | 21-040-CV | 1X without calcium and magnesium, |
| Round Bottom | Sarstedt | 55.476.305 | |
| Round-Bottom Polystyrene Test Tubes | Falcon | 352235 | With Cell Strainer Snap Cap, 5mL |
| SealRite 1.5 mL Natural Microcentrifuge Tube | USA Scientific | 1615-5500 | Free of detectable Rnase, DNase, DNA and pyrogens. |
| Shandon EZ Single Cytofunnel | Epredia | A78710003 | |
| Siglec-F | BD Biosciences | 562681 | Anti-Mouse, Brilliant Violet 421, Clone: E50-2440 |
| Silk Black Braided 30"(75 cm) Sterile, nonabsorbable surgical suture U.S.P. | Ethicon | K-834 | 0 (3.5 metric) |
| Stainless-Steel Slide Clip | Epredia | 59910052 | |
| Sterile Single Use Vacuum Filter Units | Thermo Scientific | 1660045 | |
| Syringe sterile, single use, 1 mL | BD-Biosciences | 309628 | |
| TC20 Automatic Cell Counter | Bio-Rad | 508BR05740 | |
| TipOne 200 ul yellow pipet tip refill | USA Scientific | 1111-0706 | |
| TODD HEWITT BROTH | RPI | T47500 | |
| TPX Sample Chamber | Epredia | A78710018 | |
| TPX Single Sample Chamber, Caps and Filter Cards | Epredia | 5991022 | |
| Trypan Blue | Bio-rad | 1450022 | |
| U-100 Insulin Syringes | BD-Biosciences | 329461 | |
| Wet-Proof Multi-Heat Electric Heat Pad | Cullus | Model PR7791AB | 120 volst AC; 45 watts; Listed 562B/E26869 |
参考文献
- Bellani, G., et al. Epidemiology, patterns of care, and mortality for patients with acute respiratory distress syndrome in intensive care units in 50 countries. JAMA. 315 (8), 788-800 (2016).
- Hariri, L., Hardin, C. C. Covid-19, angiogenesis, and ARDS endotypes. The New England Journal of Medicine. 383 (2), 182-183 (2020).
- Ferguson, N. D., et al. The Berlin definition of ARDS: an expanded rationale, justification, and supplementary material. Intensive Care Medicine. 38 (10), 1573-1582 (2012).
- Tomashefski Jr, J. F. Pulmonary pathology of the adult respiratory distress syndrome. Clinics in Chest Medicine. 11 (4), 593-619 (1990).
- Martin, T. R. Lung cytokines and ARDS: Roger S. Mitchell lecture. Chest. 116 (1 Suppl), 2S-8S (1999).
- Colletti, L. M., et al. Role of tumor necrosis factor-alpha in the pathophysiologic alterations after hepatic ischemia/reperfusion injury in the rat. The Journal of Clinical Investigation. 85 (6), 1936-1943 (1990).
- Donnelly, S. C., et al. The association between mortality rates and decreased concentrations of interleukin-10 and interleukin-1 receptor antagonist in the lung fluids of patients with the adult respiratory distress syndrome. Annals of Internal Medicine. 125 (3), 191-196 (1996).
- Miller, E. J., Cohen, A. B., Matthay, M. A. Increased interleukin-8 concentrations in the pulmonary edema fluid of patients with acute respiratory distress syndrome from sepsis. Critical Care Medicine. 24 (9), 1448-1454 (1996).
- Matute-Bello, G., et al. An official American Thoracic Society workshop report: features and measurements of experimental acute lung injury in animals. American Journal of Respiratory Cell and Molecular Biology. 44 (5), 725-738 (2011).
- Kulkarni, H. S., et al. Update on the features and measurements of experimental acute lung injury in animals: an official American Thoracic Society Workshop report. American Journal of Respiratory Cell and Molecular Biology. 66 (2), e1-e14 (2022).
- Borsa, N., Pasquale, M. D., Restrepo, M. I. Animal models of pneumococcal pneumonia. International Journal of Molecular Sciences. 20 (17), 4220 (2019).
- Rubins, J. B., et al. Dual function of pneumolysin in the early pathogenesis of murine pneumococcal pneumonia. The Journal of Clinical Investigation. 95 (1), 142-150 (1995).
- Thermo Scientific, . Pierce BCA Protein Assay Kit. , .
- Jungblut, M., Oeltze, K., Zehnter, I., Hasselmann, D., Bosio, A. Standardized preparation of single-cell suspensions from mouse lung tissue using the gentleMACS Dissociator. Journal of Visualized Experiments. (29), e1266 (2009).
- Tighe, R. M., et al. Improving the quality and reproducibility of flow cytometry in the lung. an official American Thoracic Society Workshop report. American Journal of Respiratory Cell and Molecular Biology. 61 (2), 150-161 (2019).
- Aeffner, F., Bolon, B., Davis, I. C. Mouse models of acute respiratory distress syndrome: a review of analytical approaches, pathologic features, and common measurements. Toxicologic Pathology. 43 (8), 1074-1092 (2015).
- Torres, A., et al. Pneumonia. Nature Reviews Disease Primers. 7 (1), 25 (2021).
- Xiong, Y., et al. Estradiol resolves pneumonia via ERβ in regulatory T cells. JCI Insight. 6 (3), e133251 (2021).
- D’Alessio, F. R., et al. Enhanced resolution of experimental ARDS through IL-4-mediated lung macrophage reprogramming. American Journal of Physiology. Lung Cellular and Molecular Physiology. 310 (8), L733-L746 (2016).
- D’Alessio, F. R. Mouse models of acute lung injury and ARDS. Methods in Molecular Biology. 1809, 341-350 (2018).
- Gotts, J. E., et al. Clinically relevant model of pneumococcal pneumonia, ARDS, and nonpulmonary organ dysfunction in mice. American Journal of Physiology. Lung Cellular and Molecular Physiology. 317 (5), L717-L736 (2019).
