Электрофизиологические ответов обонятельной сенсорных нейронов отдушки могут быть измерены в насекомых с помощью одного записей сенсиллы. В этом видео статье мы покажем, как для выполнения разовых записей в сенсиллы антенны уксуса летать (<em> Дрозофилы</em>) И верхнечелюстной щупальца малярийного комара (<em> Anopheles gambiae</em>).
Обоняние имеет важное значение для насекомых, чтобы найти пищу, братцы, хищников и яйцекладки сайтов 3. Насекомые обонятельной сенсорных нейронов (OSNs) заключаются в чувствительных волосков называется сенсиллы, которые покрывают поверхность обонятельных органов. Поверхности каждой сенсиллы покрыта крошечные поры, через которые проходят отдушки и растворяются в жидкости называется сенсиллы лимфы, которая омывает сенсорных дендритов OSNs размещены в данном сенсиллы. OSN дендритов выразить рецепторов одоранта (ИЛИ) белков, что у насекомых функции, как запах закрытого ионных каналов, 4, 5. Взаимодействие пахучих веществ с помощью ОРС либо увеличивает или уменьшает базальную скорость стрельбы из OSN. Это нейронной активности в виде потенциалов действия воплощает в себе первое представление качества, интенсивности и временных характеристик одоранта 6, 7.
Учитывая легкий доступ к этим чувствительными волосками, можно выполнять внеклеточной записи с одного OSNs путем введения электрода в записи сенсиллы лимфы, в то время как электрод помещается в лимфатических глаза или тело насекомого. У дрозофилы, сенсиллы дома от одного до четырех OSNs, но каждый OSN обычно отображает характерные амплитуды пика. Спайк методы сортировки позволяют назначить пики ответы на отдельные OSNs. Этот сингл сенсиллы записи (ССР) техника мониторы Разность потенциалов между сенсиллы лимфы и электрода сравнения, как электрические шипы, которые создаются активности рецепторов на 1 OSNs, 2, 8. Изменения в число шипов в ответ на одоранта представляют сотовые основе кодирования запахов у насекомых. Здесь мы опишем метод подготовки в настоящее время используется в нашей лаборатории для выполнения ССР дрозофилы и Anopheles gambiae, и показать представителю следы индуцированных одорантов в сенсиллы конкретным образом.
Обонятельные сигналы используются организмами для определения источников пищи, потенциальных партнеров, а также хищников. Обонятельные сенсорные нейроны (OSNs) являются первым центром реле между внешними стимулами и высшие центры мозга, где информация дальнейшей обработке. В дрозоф?…
Material Name | タイプ | Company | Catalogue Number | Comment |
---|---|---|---|---|
Paraffin oil | Odors | Fluka | 76235 | |
High purity odors (>98%) | Odors | Sigma-Aldrich | Methyl acetate #296996 1-octen-3-ol #74950 |
|
Filter paper strips | Odors | Fisherbrand | 05-714-1 | Chromatography paper |
Connectors | Odors | Cole-Parmer | EW-06365-40 | 1/16×1/8″ |
Glass vials | Odors | Agilent Technologies | 5182-0556 | |
Air line plastic tubing | Odor Delivery | Python Products | 500PAL | |
1 serological pipette | Odor Delivery | Corning | 4101 | 10 mL |
Plastic tubing | Odor Delivery | Cole-Parmer | EW-06418-0 | 0.050″x0.090″OD |
Disposable borosilicate glass Pasteur pipettes | Odor Delivery | FisherBrand | 13-678-20A | 5-3/4 inches |
Programmable stimulus controller | Odor Delivery | Syntech | CS-55 | |
Anti-vibration table | Electrophysiology Equipment | TMC | 63533 | 36”Wx30”Dx29”H |
Faraday cage | Electrophysiology Equipment | TMC | MI8133303 | |
Inverted microscope | Electrophysiology Equipment | Nikon | E600FN ECLIPSE | Recording microscope |
10x and 100x objectives | Electrophysiology Equipment | Nikon | 10x Plan Fluor 100x L Plan | |
Dissecting microscope | Electrophysiology Equipment | Nikon | EZ645 | electrode sharpening/insect prep microscope |
Magnetic stands | Electrophysiology Equipment | Newport | MODEL 150 | |
IDAC | Electrophysiology Equipment | Syntech | IDAC-4 | |
Acquisition software | Electrophysiology Equipment | Syntech | Autospike | |
1 macromanipulator | Electrophysiology Equipment | NARISHIGE | MN-151 | Joystick manipulator Used for positioning reference electrode |
1 micromanipulator | Electrophysiology Equipment | EXFO | PCS-6000 | Used for positioning recording electrode |
Crocodile clip | Electrophysiology Equipment | Pomona | AL-B-12-0 | |
Electric cable | Electrophysiology Equipment | Pomona | B-36-0 | Test Cable Assembly |
2 electrode holders | Electrophysiology Equipment | Syntech | N/A | Electrode holders (set of 2) for tungsten wire electrode |
AC probe | Electrophysiology Equipment | Syntech | N/A | Universal single ended probe (10xAC) |
Tungsten electrodes | Electrophysiology Equipment | Microprobes | M210 | straight tungsten rods, 0.005“x3“ |
Potassium hydroxide | Electrophysiology Equipment | Sigma-Aldrich | 221473 | |
Syringe | Electrophysiology Equipment | BD | 301625 | 20 mL |
Power supply | Electrophysiology Equipment | WILD HEERBRUGG 6V 40W | e.g MTR32 | |
Vertical puller | Insect prep | Narishige | PB-7 | |
Razor blade | Insect prep | VWR | 55411-050 | |
Dental wax | Insect prep | Patterson | 091-1503 | |
Microscope slide | Insect prep | FisherBrand | 12-550A | |
Cover glass | Insect prep | FisherBrand | 12-541A | 18X18 #1.5 |
Polypropylene mesh | Insect prep | Small Parts inc. | CMP-0500-B | |
Glass electrode | Insect prep | Frederick Haer & Co. | 27-32-0-075 | Capillary tubing borosilicate 1.5mm OD x 1.12mm ID x 75 mm |
Double-sided tape (3M) | Insect prep | 3M | MMM6652P3436 | Double-sided tape (3M) |
Forceps | Insect prep | Fine Science Tools | 021×0053 | Dumont #5 Mirror Finish Forceps |
Small plastic cup | Insect prep | VWR | 89009-662 | 7 x 5.7 (23/4 x 21/4) |
Electric aspirator | Insect prep | Gempler’s | RHM200 |