התגובות של אלקטרו עצב סנסורי חוש הריח כדי odorants ניתן למדוד חרקים באמצעות הקלטות sensillum יחיד. במאמר זה הווידאו נדגים כיצד לבצע הקלטות sensillum אחת האנטנות של זבוב החומץ (<em> תסיסנית melanogaster</em>) ואת palps לסתי של יתוש המלריה (<em> אנופלס gambiae</em>).
חוש הריח הוא חיוני חרקים כדי למצוא מזון, בני זוג, טורפים, אתרי ההטלה 3. חרקים עצב סנסורי חוש הריח (OSNs) מוקפים שערות חושית בשם sensilla, אשר מכסים את פני השטח של אברי חוש הריח. פני השטח של כל sensillum מכוסה נקבוביות זעירות, שדרכו odorants לעבור להתמוסס בתוך נוזל הנקרא לימפה sensillum, אשר מתרחץ הדנדריטים חושית של OSNs שוכנו sensillum נתון. דנדריטים OSN לבטא קולטן odorant (OR) חלבונים, אשר בתפקוד חרקים כמו ריח מגודרת תעלות יונים 4, 5. האינטראקציה של odorants עם מחדרי גדל או פוחת שיעור ירי הבסיס של OSN. זו הפעילות העצבית בצורה של פעולה פוטנציאלים מגלם את הייצוג הראשון של איכות, עוצמה, מאפיינים הזמני של odorant 6, 7.
לאור גישה קלה אלה שערות חושית, ניתן לבצע הקלטות תאיים מ OSNs אחד על ידי החדרת אלקטרודה לתוך ההקלטה הלימפה sensillum, בעוד אלקטרודה השוואתית ממוקם הלימפה של העין או הגוף של החרק. ב תסיסנית, sensilla הבית בין אחת לארבע OSNs, אבל בדרך כלל כל OSN מציג משרעת מאפיין ספייק. טכניקות ספייק מיון מאפשרים להקצות התגובות spiking OSNs אל הפרט. זה sensillum יחיד הקלטה (SSR) טכניקה מפקחת ההבדל בין פוטנציאל הלימפה sensillum לבין אלקטרודה השוואתית כמו קוצים חשמליים שנוצרים על ידי פעילות הקולטן על OSNs 1, 2, 8. שינויים במספר קוצים בתגובה odorant מייצגים את הבסיס התאי של ריח קידוד חרקים. כאן, אנו מתארים את שיטת ההכנה המשמש כיום במעבדה שלנו לבצע SSR על תסיסנית melanogaster ו gambiae אנופלס, ולהראות עקבות נציג המושרה על ידי odorants sensillum באופן ספציפי.
רמזים חוש הריח נמצאים בשימוש על ידי אורגניזמים לזהות מקורות מזון, בני זוג פוטנציאליים, טורפים. עצב סנסורי חוש הריח (OSNs) הם מרכז ממסר הראשון בין גירויים חיצוניים ומרכזי יותר של המוח שבו מידע מעובד נוסף. ב תסיסנית melanogaster ו gambiae אנופלס, OSNs נגישים בקלות ואת הפעילו…
Material Name | タイプ | Company | Catalogue Number | Comment |
---|---|---|---|---|
Paraffin oil | Odors | Fluka | 76235 | |
High purity odors (>98%) | Odors | Sigma-Aldrich | Methyl acetate #296996 1-octen-3-ol #74950 |
|
Filter paper strips | Odors | Fisherbrand | 05-714-1 | Chromatography paper |
Connectors | Odors | Cole-Parmer | EW-06365-40 | 1/16×1/8″ |
Glass vials | Odors | Agilent Technologies | 5182-0556 | |
Air line plastic tubing | Odor Delivery | Python Products | 500PAL | |
1 serological pipette | Odor Delivery | Corning | 4101 | 10 mL |
Plastic tubing | Odor Delivery | Cole-Parmer | EW-06418-0 | 0.050″x0.090″OD |
Disposable borosilicate glass Pasteur pipettes | Odor Delivery | FisherBrand | 13-678-20A | 5-3/4 inches |
Programmable stimulus controller | Odor Delivery | Syntech | CS-55 | |
Anti-vibration table | Electrophysiology Equipment | TMC | 63533 | 36”Wx30”Dx29”H |
Faraday cage | Electrophysiology Equipment | TMC | MI8133303 | |
Inverted microscope | Electrophysiology Equipment | Nikon | E600FN ECLIPSE | Recording microscope |
10x and 100x objectives | Electrophysiology Equipment | Nikon | 10x Plan Fluor 100x L Plan | |
Dissecting microscope | Electrophysiology Equipment | Nikon | EZ645 | electrode sharpening/insect prep microscope |
Magnetic stands | Electrophysiology Equipment | Newport | MODEL 150 | |
IDAC | Electrophysiology Equipment | Syntech | IDAC-4 | |
Acquisition software | Electrophysiology Equipment | Syntech | Autospike | |
1 macromanipulator | Electrophysiology Equipment | NARISHIGE | MN-151 | Joystick manipulator Used for positioning reference electrode |
1 micromanipulator | Electrophysiology Equipment | EXFO | PCS-6000 | Used for positioning recording electrode |
Crocodile clip | Electrophysiology Equipment | Pomona | AL-B-12-0 | |
Electric cable | Electrophysiology Equipment | Pomona | B-36-0 | Test Cable Assembly |
2 electrode holders | Electrophysiology Equipment | Syntech | N/A | Electrode holders (set of 2) for tungsten wire electrode |
AC probe | Electrophysiology Equipment | Syntech | N/A | Universal single ended probe (10xAC) |
Tungsten electrodes | Electrophysiology Equipment | Microprobes | M210 | straight tungsten rods, 0.005“x3“ |
Potassium hydroxide | Electrophysiology Equipment | Sigma-Aldrich | 221473 | |
Syringe | Electrophysiology Equipment | BD | 301625 | 20 mL |
Power supply | Electrophysiology Equipment | WILD HEERBRUGG 6V 40W | e.g MTR32 | |
Vertical puller | Insect prep | Narishige | PB-7 | |
Razor blade | Insect prep | VWR | 55411-050 | |
Dental wax | Insect prep | Patterson | 091-1503 | |
Microscope slide | Insect prep | FisherBrand | 12-550A | |
Cover glass | Insect prep | FisherBrand | 12-541A | 18X18 #1.5 |
Polypropylene mesh | Insect prep | Small Parts inc. | CMP-0500-B | |
Glass electrode | Insect prep | Frederick Haer & Co. | 27-32-0-075 | Capillary tubing borosilicate 1.5mm OD x 1.12mm ID x 75 mm |
Double-sided tape (3M) | Insect prep | 3M | MMM6652P3436 | Double-sided tape (3M) |
Forceps | Insect prep | Fine Science Tools | 021×0053 | Dumont #5 Mirror Finish Forceps |
Small plastic cup | Insect prep | VWR | 89009-662 | 7 x 5.7 (23/4 x 21/4) |
Electric aspirator | Insect prep | Gempler’s | RHM200 |