Réponses électrophysiologiques des neurones olfactifs sensoriels odorants peuvent être mesurés chez les insectes en utilisant des enregistrements sensillum unique. Dans cet article, vidéo, nous allons montrer comment réaliser des enregistrements sensillum seule dans les antennes de la mouche du vinaigre (<em> Drosophila melanogaster</em>) Et les palpes maxillaires de l'anophèle (<em> Anopheles gambiae</em>).
L'odorat est essentiel pour les insectes de trouver des aliments, les seconds, les prédateurs, et les sites de ponte 3. Insecte neurones sensoriels olfactifs (ARS) sont enfermés dans des poils sensoriels appelés sensilles, qui couvrent la surface des organes olfactifs. La surface de chaque sensillum est couverte de minuscules pores, à travers lequel passent odorants et de se dissoudre dans un liquide appelé lymphe sensillum, qui baigne les dendrites sensoriels de l'ARS logé dans un sensillum donné. Les dendrites OSN expresse odorant récepteur (ou) des protéines, qui en fonction des insectes comme les canaux ioniques odeur-dépendants 4, 5. L'interaction de molécules odorantes, les RC augmente ou diminue la cadence de tir basale de l'OSN. Cette activité neuronale dans la forme des potentiels d'action incarne la première représentation de la qualité, l'intensité et les caractéristiques temporelles de l'odorant 6, 7.
Étant donné l'accès facile à ces poils sensoriels, il est possible d'effectuer des enregistrements extracellulaires de ARS simple en introduisant une électrode d'enregistrement dans la lymphe sensillum, tandis que l'électrode de référence est placé dans la lymphe de l'œil ou le corps de l'insecte. Chez la drosophile, sensilles maison entre un et quatre ARS, mais chaque OSN affiche généralement une amplitude caractéristique de pointe. Techniques de tri de Spike permettent d'assigner des réponses dopage à l'ARS individuels. Cet enregistrement simple sensillum (SSR) surveille la technique la différence de potentiel entre la lymphe sensillum et l'électrode de référence comme des pointes électriques qui sont générés par l'activité des récepteurs sur les ARS 1, 2, 8. Les changements dans le nombre de pointes en réponse à l'odorant représentent la base cellulaire de l'odeur de codage dans les insectes. Ici, nous décrivons la méthode de préparation actuellement utilisée dans notre laboratoire pour effectuer SSR sur Drosophila melanogaster et Anopheles gambiae, et montrent des traces représentatives induite par les odorants de manière sensillum spécifiques.
Signaux olfactifs sont utilisés par les organismes d'identifier les sources de nourriture, des partenaires potentiels, et les prédateurs. Neurones sensoriels olfactifs (ARS) sont au centre du premier relais entre les stimuli externes et les centres supérieurs du cerveau où les informations sont traitées ultérieurement. Dans Drosophila melanogaster et Anopheles gambiae, ARS sont facilement accessibles et leur activité électrique peut être surveillée quand stimulée par bouffées d'odeu…
Material Name | タイプ | Company | Catalogue Number | Comment |
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Paraffin oil | Odors | Fluka | 76235 | |
High purity odors (>98%) | Odors | Sigma-Aldrich | Methyl acetate #296996 1-octen-3-ol #74950 |
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Filter paper strips | Odors | Fisherbrand | 05-714-1 | Chromatography paper |
Connectors | Odors | Cole-Parmer | EW-06365-40 | 1/16×1/8″ |
Glass vials | Odors | Agilent Technologies | 5182-0556 | |
Air line plastic tubing | Odor Delivery | Python Products | 500PAL | |
1 serological pipette | Odor Delivery | Corning | 4101 | 10 mL |
Plastic tubing | Odor Delivery | Cole-Parmer | EW-06418-0 | 0.050″x0.090″OD |
Disposable borosilicate glass Pasteur pipettes | Odor Delivery | FisherBrand | 13-678-20A | 5-3/4 inches |
Programmable stimulus controller | Odor Delivery | Syntech | CS-55 | |
Anti-vibration table | Electrophysiology Equipment | TMC | 63533 | 36”Wx30”Dx29”H |
Faraday cage | Electrophysiology Equipment | TMC | MI8133303 | |
Inverted microscope | Electrophysiology Equipment | Nikon | E600FN ECLIPSE | Recording microscope |
10x and 100x objectives | Electrophysiology Equipment | Nikon | 10x Plan Fluor 100x L Plan | |
Dissecting microscope | Electrophysiology Equipment | Nikon | EZ645 | electrode sharpening/insect prep microscope |
Magnetic stands | Electrophysiology Equipment | Newport | MODEL 150 | |
IDAC | Electrophysiology Equipment | Syntech | IDAC-4 | |
Acquisition software | Electrophysiology Equipment | Syntech | Autospike | |
1 macromanipulator | Electrophysiology Equipment | NARISHIGE | MN-151 | Joystick manipulator Used for positioning reference electrode |
1 micromanipulator | Electrophysiology Equipment | EXFO | PCS-6000 | Used for positioning recording electrode |
Crocodile clip | Electrophysiology Equipment | Pomona | AL-B-12-0 | |
Electric cable | Electrophysiology Equipment | Pomona | B-36-0 | Test Cable Assembly |
2 electrode holders | Electrophysiology Equipment | Syntech | N/A | Electrode holders (set of 2) for tungsten wire electrode |
AC probe | Electrophysiology Equipment | Syntech | N/A | Universal single ended probe (10xAC) |
Tungsten electrodes | Electrophysiology Equipment | Microprobes | M210 | straight tungsten rods, 0.005“x3“ |
Potassium hydroxide | Electrophysiology Equipment | Sigma-Aldrich | 221473 | |
Syringe | Electrophysiology Equipment | BD | 301625 | 20 mL |
Power supply | Electrophysiology Equipment | WILD HEERBRUGG 6V 40W | e.g MTR32 | |
Vertical puller | Insect prep | Narishige | PB-7 | |
Razor blade | Insect prep | VWR | 55411-050 | |
Dental wax | Insect prep | Patterson | 091-1503 | |
Microscope slide | Insect prep | FisherBrand | 12-550A | |
Cover glass | Insect prep | FisherBrand | 12-541A | 18X18 #1.5 |
Polypropylene mesh | Insect prep | Small Parts inc. | CMP-0500-B | |
Glass electrode | Insect prep | Frederick Haer & Co. | 27-32-0-075 | Capillary tubing borosilicate 1.5mm OD x 1.12mm ID x 75 mm |
Double-sided tape (3M) | Insect prep | 3M | MMM6652P3436 | Double-sided tape (3M) |
Forceps | Insect prep | Fine Science Tools | 021×0053 | Dumont #5 Mirror Finish Forceps |
Small plastic cup | Insect prep | VWR | 89009-662 | 7 x 5.7 (23/4 x 21/4) |
Electric aspirator | Insect prep | Gempler’s | RHM200 |