BC細胞の共培養:がん細胞増殖を研究するための骨片を用いた乳がん細胞の培養

1. 骨片に隣接する乳癌細胞を共培養し、BLIを用いて乳房細胞増殖を測定する

1. 実験に先立ち、2 x 10^5個の乳がん細胞/50μlを含む懸濁液を調製し、骨の切片を培養に固定するための骨ワックスのプラグを調製する。P200マイクロピペットチップを3個に切り、最大の部分の狭い端を「クッキーカッター」で使用して、小さな(35mg)の骨ワックスをカットします。最小の部分の広い端を使用して、骨ワックスプラグをペトリ皿に排出して保管します。
2. 各井戸の12時の位置に骨ワックスの一部を置き、滅菌手袋をした人差し指でそっと押し下げます。
3. 6ウェルプレートの各ウェルの中央に1 x 10^5乳癌細胞を含む細胞懸濁液のピペット50 μl DMEM-10% FBS + ペンストレップ。(または、必要に応じて分散パターンの細胞をシードする。プレートを37°Cの組織培養インキュベーターに45分間入れ、細胞の付着を促進します。
4. 実験井戸ごとに骨ワックス1個に1個の骨片を置き、それを固定するためにロンガと穏やかな圧力を加えます。特定のTHR標本から3つの骨片が上の3つの井戸に入れられ、下の3つの井戸には骨ワックスがコントロールとしてのみ含まれるように、三重化の実験を行います。
5. 5 ml ピペットを使用して、5 ml の DMEM-10% FBS を各ウェルの側面にゆっくりとゆっくりと送り出し、乳房細胞または骨片の取り除きを避けます。プレートを37°Cの組織培養インキュベーターに20〜24時間入れる。
6. インキュベーターからプレートを取り出し、各ウェルにルシフェリン基板(300 μg/mlの濃度を達成するため)を加えます。1のfストップ、小さなビン、1秒の露出時間、レベルDを使用して、IVISイメージングプラットフォーム上でプレートを直ちに画像化します。
7. イメージングソフトウェアを使用して、すべての実験および制御井戸の平均輝度を定量化するために、関心領域(ROI)を定義します。平均輝度値を Excel シートにエクスポートして、統計情報を実行し、グラフを生成します。