सह-संस्कृति बीसी कोशिकाओं: कैंसर सेल प्रसार का अध्ययन करने के लिए हड्डी के टुकड़े के साथ स्तन कैंसर कोशिकाओं culturing

1. ब्ली का उपयोग कर स्तन कोशिका प्रसार को मापने के लिए हड्डी के टुकड़ों से सटे स्तन कैंसर कोशिकाओं को सह-संस्कृति

1. प्रयोग से पहले, 2 x 10⁵ स्तन कैंसर कोशिकाओं/50 माइक्रोन युक्त निलंबन तैयार करें, और संस्कृति में हड्डी के टुकड़ों को स्थिर करने के लिए हड्डी मोम के प्लग तैयार करें। एक P200 माइक्रोपिपेट टिप को 3 टुकड़ों में काटें और हड्डी मोम के छोटे (~ 35 मिलीग्राम) टुकड़ों को काटने के लिए "कुकी कटर" तरीके से सबसे बड़े टुकड़े के संकीर्ण अंत का उपयोग करें। भंडारण के लिए पेट्री डिश में हड्डी मोम प्लग बाहर निकालने के लिए सबसे छोटे टुकड़े के व्यापक अंत का उपयोग करें।
2. प्रत्येक कुएं के 12 बजे की स्थिति में हड्डी मोम का एक टुकड़ा रखें और धीरे-धीरे बाँझ-दस्ताने तर्जनी के साथ दबाएं।
3. एक 6-अच्छी प्लेट के प्रत्येक कुएं के केंद्र में डीएमईएम-10% एफबीएस + पेन-स्ट्रेप में 1 x 10 5 स्तन कैंसर कोशिकाओं वाले सेल निलंबन के पिपेट⁵⁰ माइक्रोन। (वैकल्पिक रूप से, यदि वांछित हो तो एक बिखरे हुए पैटर्न में बीज कोशिकाएं। सेल अटैचमेंट को बढ़ावा देने के लिए प्लेट को 45 मिनट के लिए 37 डिग्री सेल्सियस टिश्यू कल्चर इनक्यूबेटर में रखें।
4. प्रत्येक प्रयोगात्मक के लिए हड्डी मोम के 1 टुकड़े पर 1 हड्डी टुकड़ा रखें और इसे सुरक्षित करने के लिए रोंगर के साथ कोमल दबाव लागू करें। ट्रिपलीकेट में प्रयोग करें ताकि किसी दिए गए टीएचआर नमूने से 3 हड्डी के टुकड़े शीर्ष तीन कुओं में रखे जाएं, जबकि नीचे के तीन कुओं में केवल नियंत्रण के रूप में हड्डी मोम होते हैं।
5. स्तन कोशिकाओं या हड्डी के टुकड़ों को उखाड़ फेंकने से बचने के लिए 5 मिलीलीटर पिपेट का उपयोग करके, धीरे-धीरे और धीरे-धीरे प्रत्येक कुएं के किनारे 5 मिलीलीटर डीएमईएम-10% एफबीएस वितरित करें। प्लेट को 20-24 घंटे के लिए 37 डिग्री सेल्सियस टिश्यू कल्चर इनक्यूबेटर में रखें।
6. बायोल्यूमिनेसेंस इमेजिंग (ब्ली) करने के लिए इनक्यूबेटर से प्लेट को हटा दें और प्रत्येक कुएं में लूसिफ़ेरिन सब्सट्रेट (300 माइक्रोग्राम/एमएल की एकाग्रता प्राप्त करने के लिए) जोड़ें। निम्नलिखित मापदंडों का उपयोग करके एक आईवीआईएस इमेजिंग प्लेटफॉर्म पर तुरंत प्लेट इमेज करें: एफ-स्टॉप ऑफ 1, छोटे बिनिंग, 1 सेकंड का एक्सपोजर समय, स्तर डी प्रत्येक के संकेत तीव्रता के साथ-साथ औसत चमक (फोटॉन/सेकंड/स्क्वायर सेंटीमीटर/स्टेरैडियन) को मापें।
7. सभी प्रयोगात्मक और नियंत्रण कुओं के लिए औसत चमक की मात्रा निर्धारित करने के लिए ब्याज के क्षेत्रों (आरओआई) को परिभाषित करने के लिए इमेजिंग सॉफ्टवेयर का उपयोग करें। आंकड़े करने और रेखांकन उत्पन्न करने के लिए एक्सेल शीट में औसत चमक मूल्यों का निर्यात करें।