Encyclopedia of Experiments: Cancer Research
Se requiere una suscripción a JoVE para ver este contenido. Inicie sesión o comience su prueba gratuita.
Transcript
Please note that all translations are automatically generated.
Börja med att lägga trypsin i en petriskål som innehåller märkta bröstcancerceller för att lossa dem från ytan. Tillsätt mediuminnehållande serum för att stoppa trypsins verkan. Överför cellfjädringen till ett koniskt rör och centrifugera den till pelletscell.
Kassera supernatanten och återanvänd cellerna i fosfatbuffrad saltlösning. Placera röret på is för att bromsa cellmetabolismen. Ladda denna cellfjädring som innehåller den önskade mängden celler i en Luer låsspruta och fäst en nål på den.
Placera en mus i en gnagarehållare med svansen utanför. Doppa svansen i varmt vatten för att vidga venerna. Det finns två vener på sidosidorna och en artär på svansens ventrala sida. Torka svansen med alkohol, sätt in nålen och injicera cellupphängningen.
Väl i blodomloppet invaderar de injicerade cancercellerna i organ som lungorna och förökar sig. Ta långsamt bort nålen och använd en steril gasväv på injektionsstället för att utöva tryck för att stoppa blödningen. Sätt tillbaka musen i buren och säkerställ en fullständig återhämtning. I följande protokoll visar vi injektionen av märkta ögonbevarande cancerceller i en musmodell för att kvantifiera bröstcancer metastasering och kolonisering.
Aspirera på mediet och skölj cellplattorna med 1X PBS. Trypsinize cellerna med 5 milliliter trypsin per 15-centimetersplatta i två till fem minuter och överför alla celler till ett koniskt rör. Tvätta återstående celler från vävnadskulturrätten med tillräckligt med kompletta tillväxtmedier för att släcka trypsinet. Tillsätt tvätten i samma koniska rör. Räkna cellerna med hjälp av en automatiserad cellräknare för att bestämma det totala cellnumret.
Centrifugera sedan cellerna vid 122 gånger G i tre minuter och aspirera supernaten. Återanvänd cellerna i 1X PBS vid önskad koncentration. Här injiceras 25 000 celler i varje mus i 100 mikroliter PBS, så de återanvända cellerna är på 250 000 celler per milliliter. Håll cellfjädringarna på is tills injektionen.
Arbeta i en huva på djuranläggningen, försiktigt, men blanda noggrant cellerna genom att invertera röret eller använda en 1 milliliter spruta för att säkerställa att de är jämnt återanvända. Ladda nu en 1 milliliter Luer låsspruta med cellfjädring och utvisa överflödiga luftbubblor. Placera en 1/2-tums 30-gauge nål på sprutan med avfasningen upp och utvisa luftbubblor.
Placera försiktigt musen i en gnagarehållare. Den laterala svans venen ska vara synlig och dilaterad. Om inte, nyp försiktigt svansens botten och doppa svansen i varmt kranvatten för att vidga venerna. Använd en alkoholservett för att rengöra svansen. Sätt sedan in nålen i svans venen, avfasa sidan uppåt och injicera 100 mikroliter cellupphängning. Om nålen sätts in ordentligt i venen ska den lätt glida något framåt och bakåt, och det bör inte finnas motstånd när kolven trycks in.
Framgångsrika injektioner bör också resultera i en spolning, där venens blå färg blir vit i några sekunder efter injektionen. Ta långsamt bort nålen och tryck på injektionsstället med hjälp av en steril gasväv för att stoppa blödningen. Sätt tillbaka musen i buret och övervaka i 15 minuter för att säkerställa full återhämtning.
