尾静脉注射：在小鼠模型中管理转移研究的癌细胞的方法

首先在含有标记乳腺癌细胞的培养皿中加入肌氨酸，将其从表面分离。添加含有血清的介质，以阻止肌氨酸作用。将细胞悬架转移到圆锥管中，并将其离心机转移到颗粒细胞中。

丢弃超自然物，并补充磷酸盐缓冲盐水中的细胞。将管子放在冰上以减慢细胞新陈代谢。将含有所需细胞量的细胞加载到 Luer 锁注射器中，并将针头固定在上面。

将鼠标放在啮齿动物约束器中，其尾巴放在外面。将尾巴浸入温水中以扩张静脉。横向两侧有两条静脉，尾部腹侧有一条动脉。用酒精擦拭尾巴，插入针头，并注射细胞悬架。

一旦进入血液，注射的癌细胞侵入器官，如肺部，并增殖。慢慢取出针头，在注射部位使用无菌纱布施加压力以止血。将鼠标送回笼子，确保完全恢复。在下列协议中，我们演示将标记转移性癌细胞注射到小鼠模型中，以量化乳腺癌的转移和殖民化。

吸气介质，用 1X PBS 冲洗细胞板。尝试用每15厘米板5毫升的三氯辛对细胞进行2至5分钟的尝试，并将所有细胞转移到锥形管中。用足够的完整生长介质从组织培养盘中清洗剩余的细胞，以淬灭肌素。将洗涤剂添加到同一个圆锥形管中。使用自动细胞计数器计算单元格以确定总细胞数。

接下来，以122倍G对细胞进行离心3分钟，吸气超母。以所需的浓度以 1 倍 PBS 中补充细胞。在这里，在PBS的100微升中，每只小鼠有25，000个细胞被注入，因此恢复的细胞是每毫升250，000个细胞。将细胞悬浮在冰上直到注射。

在动物设施的引擎盖中工作，轻轻地，但通过倒置管子或使用1毫升注射器彻底混合细胞，以确保它们均匀地恢复。现在，加载一个1毫升的Luer锁注射器与细胞悬架和驱逐多余的气泡。将1~2英寸，30口径的针头放在注射器上，用斜面向上，排出气泡。

轻轻地将鼠标置于啮齿动物约束器中。横向尾静脉应可见并扩张。如果没有，轻轻捏住尾巴的底座，将尾巴浸入温暖的自来水中以扩张静脉。使用酒精擦拭清洁尾巴。然后将针头插入尾静脉，向上斜面，并注射100微升细胞悬浮剂。如果针头被正确插入静脉，它应该很容易向前和向后稍微滑动，当柱塞被推动时，不应有阻力。

成功的注射还应导致冲洗，其中静脉的蓝色在注射后几秒钟变白。慢慢取出针头，并使用无菌纱布，向注射部位施加压力，以阻止任何出血。将鼠标返回笼子并监视 15 分钟，以确保完全恢复。