Мы описываем стратегии для контроля созревания и миграции легких дендритные клетки в ответ на овальбумина в условиях овальбумина индуцированного аллергического воспаления дыхательных путей. Эта стратегия может быть изменена для оценки миграции легких дендритных клеток в условиях заражения.
Дендритные клетки (ДК) являются ключевыми игроками участвуют в инициации иммунного ответа, активируя антиген-специфических Т-клеток. ДК присутствуют в периферических тканях, в установившемся режиме, однако в связи с антигенной стимуляции, ДК занимает антиген и быстро перейти на дренаж лимфатических узлов, где они инициируют Т-клеточного ответа против антигенов 1,2. Кроме того, контроллеры домена также играют ключевую роль в инициации аутоиммунных и аллергических иммунных реакций 3.
ДК играет важную роль как в начале иммунного ответа и индукции толерантности в условиях легкого среды 4. Легкие среды в значительной степени вызывающий иммунологическую толерантность, в связи с воздействием широкого спектра экологических антигенов 5. Тем не менее, у некоторых людей есть перерыв в терпимости, что приводит к индукции аллергии и астмы. В этом исследовании мы опишем стратегию, которая может быть использована для контроля дыхательных путей постоянного созревания и миграцион в ответ на антиген для сенсибилизации. Измерение постоянного тока дыхательных путей созревания и миграции позволяет для оценки кинетики иммунного ответа в течение аллергического воспаления дыхательных путей, а также помогает в понимании масштабов последующего иммунного ответа, а также основные механизмы.
Наша стратегия основана на использовании в качестве овальбумина сенсибилизирующего агента. Ovalbumin вызванного аллергической астмы является широко используемой модели, чтобы воспроизвести дыхательных путях эозинофилов, воспаления легких и повышенный уровень IgE, найденные во время астмы 6,7. После сенсибилизации мышей оспорено интраназального доставки FITC помечены овальбумина, который позволяет для конкретных маркировки дыхательных путей домена который поглощение овальбумина. Далее, используя несколько DC специфических маркеров, мы можем оценить созревания этих контроллеров домена, а также может оценить их миграции в дренаж лимфатических узлов, используя проточной цитометрии.
Метод, представленные здесь предлагается проточной цитометрии подход, основанный на анализе легочной РС, основанные на поставку OVA-FITC для отвода дыхательных путей. Это позволяет выборочный мониторинг легких домена, которые занимают OVA-FITC и, следовательно, постоянного населения, которы…
The authors have nothing to disclose.
Эта работа финансировалась CIHR и CF грантов Канады д-р Джим Ху и студенческие кандидат награжден Rahul Kushwah на CF Канаде.
Name of the reagent | Company | Catalogue number |
Ovalbumin | Sigma-Aldrich | A5503 |
Alum | Thermo Scientific | 77161 |
OVA-FITC | Sigma-Aldrich | A9771 |
Collagenase D | Roche | 11088858001 |
Antibodies | e-Bioscience |