Analyse van de pulmonale dendritische cel maturatie en migratie tijdens de allergische luchtwegontsteking
Summary
We beschrijven een strategie om de rijping en migratie van pulmonale dendritische cellen te volgen in reactie op ovalbumine in de setting van ovalbumine geïnduceerde allergische luchtwegontsteking. Deze strategie kan worden aangepast aan de migratie van pulmonale dendritische cellen te beoordelen in de instellingen van de infectie.
Abstract
Dendritische cellen (DC's) zijn de hoofdrolspelers die betrokken zijn bij aanvang van de adaptieve immuunrespons door het activeren van antigeen-specifieke T-cellen. DC's zijn aanwezig in de perifere weefsels in steady-state, maar in reactie op antigeen stimulatie, DC's nemen het antigeen en snel migreren naar de drainerende lymfeklieren, waar ze T-cel respons te leiden tegen het antigeen 1,2. Daarnaast DC's spelen ook een belangrijke rol in het initiëren van auto-immune en allergische immuunrespons 3.
DC's spelen een essentiële rol in zowel de aanvang van de immuunrespons en inductie van tolerantie in de setting van long-omgeving 4. Lung omgeving grotendeels tolerogeen wegens de blootstelling aan enorme hoeveelheid milieu antigenen 5. In sommige individuen is een breuk in tolerantie, die leidt tot de inductie van allergie en astma. In deze studie beschrijven we een strategie die kan worden luchtwegen DC rijping en mig controlerenverhouding in reactie op het antigeen voor sensibilisering. De meting van de luchtwegen DC rijping en migratie maakt voor beoordeling van de kinetica van immuunrespons in de luchtwegen allergische ontsteking en helpt het begrijpen van de grootte van de volgende immuunrespons met de mechanismen.
De strategie is gebaseerd op het gebruik van ovalbumine als sensibilisator. Ovalbumine geïnduceerde allergische astma is een veel gebruikt model om de luchtwegen eosinofilie, longontsteking en verhoogde IgE-gehaltes gevonden tijdens astma 6,7 reproduceren. Na sensibilisatie, worden muizen uitgedaagd door intranasale levering van FITC gelabeld ovalbumine, die het mogelijk maakt voor specifieke etikettering van luchtweg DCs die opname ovalbumine. Vervolgens met behulp van verschillende DC specifieke markers, kunnen we beoordelen de rijping van deze DC's en kunnen hun migratie ook te beoordelen naar de drainerende lymfeklieren door het gebruik van flowcytometrie.
Protocol
Discussion
De hier gepresenteerde methode biedt een flowcytometrie gebaseerde benadering voor het analyseren van pulmonale DC's, gebaseerd op levering van de OVA-FITC voor de luchtwegen uitdaging. Hierdoor selectieve controle van de pulmonale DCs, die nemen OVA-FITC en dus de DC populaties, die worden bewaakt effectief degenen die in de luchtweg immuunrespons deel tijdens OVA-geïnduceerde allergische luchtweg. In controlemuizen, in afwezigheid van allergische luchtweginflammatie, het aantal trekkende DCs (OVA-FITC + DC) die i…
Divulgaciones
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Dit werk werd gefinancierd door CIHR-en CF-Canada subsidies aan Dr Jim Hu en door een PhD studententijd toegekend aan Rahul Kushwah door CF Canada.
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number |
| Ovalbumin | Sigma-Aldrich | A5503 |
| Alum | Thermo Scientific | 77161 |
| OVA-FITC | Sigma-Aldrich | A9771 |
| Collagenase D | Roche | 11088858001 |
| Antibodies | e-Bioscience |
Referencias
- Kushwah, R., Hu, J. Role of dendritic cells in the induction of regulatory T cells. Cell Biosci. 20, (2011).
- Kushwah, R., Hu, J. Complexity of dendritic cell subsets and their function in the host immune system. Immunology. 133, 409-419 (2011).
- Lambrecht, B. N., Hammad, H. Taking our breath away: dendritic cells in the pathogenesis of asthma. Nat Rev Immunol. 3, 994-1003 (2003).
- Hammad, H., Lambrecht, B. N. Dendritic cells and epithelial cells: linking innate and adaptive immunity in asthma. Nat. Rev. Immunol. 8, 193-204 (2008).
- Lloyd, C. M., Murdoch, J. R. Tolerizing allergic responses in the lung. Mucosal. Immunol. 3, 334-344 (2010).
- Herz, U. The relevance of murine animal models to study the development of allergic bronchial asthma. Immunol. Cell Biol. 74, 209-217 (1038).
- Herz, U., Lumpp, U., Daser, A., Gelfand, E. W., Renz, H. Murine animal models to study the central role of T cells in immediate-type hypersensitivity responses. Adv. Exp. Med. Biol. 409, 25-32 (1996).
- Nakae, S. TNF can contribute to multiple features of ovalbumin-induced allergic inflammation of the airways in mice. J. Allergy Clin. Immunol. 119, 680-686 (2007).
- Guth, A. M. Lung environment determines unique phenotype of alveolar macrophages. Am. J. Physiol. Lung Cell Mol. Physiol. 296, L936-L946 (2009).
- Kushwah, R., Cao, H., Hu, J. Characterization of pulmonary T cell response to helper-dependent adenoviral vectors following intranasal delivery. J. Immunol. 180, 4098-4108 (2008).
- Kushwah, R., Oliver, J. R., Zhang, J., Siminovitch, K. A., Hu, J. Apoptotic dendritic cells induce tolerance in mice through suppression of dendritic cell maturation and induction of antigen-specific regulatory T cells. J. Immunol. 183, 7104-7118 (2009).
