Nós descrevemos uma estratégia para monitorar a maturação e migração de células dendríticas pulmonares em resposta à ovalbumina na configuração de ovalbumina inflamação das vias aéreas induzida alérgica. Esta estratégia pode ser modificado para avaliar a migração de células dendríticas pulmonares nas configurações de infecção.
As células dendríticas (DCs) são os principais agentes envolvidos na iniciação da resposta imune adaptativa por ativação de células T antígeno-específicas. DCs estão presentes nos tecidos periféricos em estado estacionário, no entanto, em resposta à estimulação de antigénio, DCs assumir o antigénio e rapidamente migram para os nódulos linfáticos drenantes onde eles iniciam resposta de células T contra o antigénio 1,2. Além disso, DCs também desempenham um papel-chave na iniciação auto-imune, bem como alérgica resposta imunitária 3.
DCs desempenham um papel essencial em ambos iniciação da resposta imune e indução de tolerância na configuração do ambiente de pulmão 4. Ambiente de pulmão é em grande parte tolerogénico, devido à exposição a vasta gama de antigénios ambientais 5. No entanto, em alguns indivíduos, há um intervalo de tolerância, o que leva a indução de alergia e asma. Neste estudo, descrevemos uma estratégia, o que pode ser utilizado para monitorizar das vias aéreas maturação DC e MIGração em resposta ao antigénio utilizado para a sensibilização. A medição da via aérea maturação DC e migração permite a avaliação da cinética da resposta imune durante inflamação das vias aéreas alérgica e também auxilia na compreensão da magnitude da resposta imune subsequente, juntamente com os mecanismos subjacentes.
A nossa estratégia é baseada no uso de ovalbumina como um agente sensibilizante. Ovalbumina induzida asma alérgica é um modelo largamente utilizado para reproduzir a eosinofilia das vias aéreas, inflamação pulmonar e níveis elevados de IgE encontrados durante a asma 6,7. Após a sensibilização, os ratos são desafiados por administração intranasal de FITC ovalbumina rotulado, que permite a marcação específica de DCs das vias aéreas que ovalbumina absorção. Em seguida, usando vários marcadores específicos DC, podemos avaliar a maturação desses DCs e também pode avaliar a sua migração para os linfonodos de drenagem através do emprego de citometria de fluxo.
O método aqui apresentado oferece uma abordagem baseada em citometria de fluxo para análise de DCs pulmonares, com base na entrega de OVA-FITC para o desafio da via aérea. Isto permite a monitorização selectiva de DCs pulmonares, que ocupam OVA-FITC e, portanto, as populações de CC, que são acompanhados são efectivamente as que participam na resposta das vias aéreas imune durante o curso de OVA induzida por inflamação das vias aéreas alérgica. Em ratinhos de controlo, na ausência de inflamação das vias …
The authors have nothing to disclose.
Este trabalho foi financiado por doações CIHR e CF Canadá ao Dr. Jim Hu e por uma bolsa de estudo de doutorado concedida para Rahul Kushwah pela CF Canadá.
Name of the reagent | Company | Catalogue number |
Ovalbumin | Sigma-Aldrich | A5503 |
Alum | Thermo Scientific | 77161 |
OVA-FITC | Sigma-Aldrich | A9771 |
Collagenase D | Roche | 11088858001 |
Antibodies | e-Bioscience |