마우스에서 우울증과 같은 행동을 유도하기위한 만성 고정 스트레스 프로토콜
Summary
이 문서는 억제기를 사용하여 만성 적으로 고정 된 마우스에서 우울과 같은 행동의 유도에 대한 단순화 되고 표준화 된 프로토콜을 제공합니다. 또한, 우울증의 유도를 확인하는 행동과 생리 적 기술이 설명된다.
Abstract
우울증은 아직 완전히 이해되지 는 않지만 다양한 원인 요인이 보고되었습니다. 최근에는 우울증의 유병률이 증가하고 있습니다. 그러나, 우울증에 대 한 치료 치료 또는 우울증에 대 한 연구는 부족. 따라서, 본 논문에서, 우리는 운동 제한에 의해 유도된 우울증의 마우스 모델을 제안한다. 만성 가벼운 스트레스 (CMS) 우울증 같은 행동을 유도 하는 잘 알려진 기술. 그러나, 그것은 다양 한 가벼운 스트레스의 조합으로 구성 된 복잡 한 절차를 필요. 대조적으로, 만성 고정 응력(CIS)은 일정 기간 동안 구속기를 사용하여 움직임을 제한함으로써 우울한 행동을 유도하는 구속 모델에서 수정된 쉽게 접근할 수 있는 만성 스트레스 모델이다. 우울증유사 거동을 평가하기 위해, 자당 선호도 시험(SPT), 꼬리 현탁액 시험(TST), 및 ELISA 분석기는 마커 코르티코스테론 수준을 측정하는 본 실험에서 결합된다. 기재된 프로토콜은 CIS의 유도 및 우울증의 유효성 검사를 위한 행동 및 생리적 요인의 변화에 대한 평가를 설명한다.
Introduction
주요 우울 장애 (MDD)는 전 세계적으로 정신 장애의 주요 원인이며, 예상보다 빠르게 증가하고 있는 발병률을 가지고 있습니다. 2001년에, 세계 보건 기구는 MDD가 2020년까지 세계에서 두 번째로 일반적인 질병이 될 것이라고 예측했습니다. 그러나, 그것은 이미 2013 1에서두 번째로 가장 일반적인 이었다 . 또한, 현재 항우울제는 지연효과성, 약물내성, 재발, 및 각종 부작용2,3등 많은 한계를 가지고 있다. 따라서 연구원은 더 효과적인 항우울제를 개발 해야 합니다. 그러나, MDD의 모호한 병리생리학은 새로운 항우울제의 발달에 장애물을 제시합니다.
장기적인 스트레스는 MDD의 주요 위험 요소입니다. 그것은 또한 MDD 병인학4,5와관련이 있는 시상 하부 뇌하수체 부신 (HPA) 축에 있는 역기능을 유도할 수 있습니다. 앞서 설명한 바와 같이, HPA 축은 코르티코스테론 수준을 6, 7,8,증가시킴으로써 우울증 및 불안 장애를 포함한 스트레스 유발 정신병리생리학에 중요한 역할을 한다. 9. 많은 동물 모델은 MDD4환자에서 관찰되는 HPA 축의 지속적인 활성화를 기반으로합니다. 더욱이, 만성 스트레스에 의해 유도된 높은 글루코코르티코이드 및 피하 주사된 글루코코르티코이드는 신경 세포 사멸, 신경 과정의 위축 및 설치류의 뇌에서 성인 신경 발생 감소와 함께 우울한 행동을 일으킵니다10 , 11. 우울증과 관련된 또 다른 중요한 뇌 영역은 내측 전두엽 피질 (mPFC)입니다. mPFC는 시상 하부 및 편도체와 같은 뇌 소전체를 제어하는 데 중요한 역할을하며,정서적 행동과 스트레스 반응을 제어하는 8,9. 예를 들어, 등쪽 mPFC내의 병변은 구속스트레스12,13으로인한 HPA 축 기능 장애 및 향상된 코르티코스테론 분비를 유도한다. 최근 연구는 또한 반복 억제 스트레스 증가 코르티코스테론 수준을 보여 주었다, 이는 mPFC에서 뉴런과 성상 세포 사이의 글루타민글루타민 주기를 통해 글루타민 보충에 의해 감소 될 수있다 9.
MDD의 병인학을 연구하는 데 사용되는 최초의 만성 스트레스 패러다임은 Katz14에의해 제안되었습니다. Willner 등은 카츠의 연구 결과에 기초하여 만성 경미한 스트레스(CMS) 모델을 제안했습니다. 그(것)들은 항우울제가 CMS 유도된 anhedonic 같이 행동15,16를복구한다는 것을 관찰해서 모형이 예측 타당성이 있었다는 것을 확인했습니다. 일반적으로 CMS 모델은 온화한 소음, 케이지 틸팅, 젖은 침구, 변경된 밝은 어두운 주기, 케이지 흔들림, 강제 수영 및 사회적 패배와 같은 다양한 경미한 응력의 조합으로 구성됩니다. CMS 모델은 연구원에 의해 널리 이용됩니다; 그러나 이 모델은 복제성이 좋지 않으며 시간 및 에너지 가 비효율적입니다. 따라서 우울증을 평가하기 위한 우울과 같은 행동과 생리학적 분석의 유도를 위한 표준화되고 단순화된 프로토콜에 대한 수요가 증가하고 있다. CMS 모델에 비해 만성 고정 응력(CIS; 만성 구속 응력이라고도 함) 모델은 더 간단하고 효율적입니다. 따라서 CIS 모델은 만성 스트레스 연구17, 18,19,20,21,22,23에서널리 사용될 수 있습니다. 24. 또한, CIS는 우울한 행동을 개발하기 위해 남성과 여성 마우스 모두에서 사용할 수 있습니다25,26. CIS 동안, 동물은 2 주 또는 4 주동안하루에 1-8 시간 동안 몸에 맞는 크기의 실린더에 배치됩니다 9,27,28. 이들 중, 2주 동안 하루 2시간 동안 구속 스트레스 상태는 마우스9,28에서최소한의 통증으로 우울한 행동을 일으키기에 충분하다. 구속 조건하에서 혈액 코르티코스테론 수준은9,28,29로급속히 증가했습니다. 여러 연구는 CIS 모델이 예측 타당성을 가지고 있음을 보여 주었다, CIS 유도 우울증과 같은 증상이 항우울제에 의해 복원되는 것을 확인19,20,30,31. 본 명세서에서, 우리는 마우스에서 CIS 후 일부 행동 및 생리학적 결과뿐만 아니라 CIS의 상세한 절차를 보고한다.
Protocol
Representative Results
Discussion
MDD의 두뇌와 이질성의 복잡성은 조건을 완전히 재현하는 동물 모형을 만드는 것을 어렵게 만듭니다. 많은 연구자들은 안구토니아 (보람있는 자극에 대한 관심의 부족)와 절망이 동물 모델에서 진화적으로 보존되고 정량화 가능한 행동으로 간주되는 내시경 형 기반 접근법32를사용하여이 어려움을 극복했습니다. 이는 또한 우울증 환자에서 볼 수 있습니다33. 본…
Offenlegungen
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
이 연구는 교육부(NRF-2015R1A5A5A2008833 및 NRF-2016R1D1D1D1A33934279)의 지원을 받아 국립과학연구재단(NRF)을 통해 지원되었다. 경상대학교 GNU-2016-02)
Materials
| 1 ml disposable syringes | Sungshim Medical | P000CFDO | |
| Balance | A&D Company | FX-2000i | |
| Ball nozzle | Jeung Do B&P | JD-C-88 | |
| CCTV camera | KOCOM | KCB-381 | |
| Corticosterone ELISA kits | Cayman Chemical | ||
| Digital lux meter | TES | TES-1330A | |
| Ethovision XT 7.1 | Noldus Information Technology | ||
| Isoflurane | HANA PHARM CO., LTD. | Ifran solution | |
| Mice | Koatech | C57BL/6 strain | |
| Restrainer | Dae-jong Instrument Industry | DJ-428 | |
| Saccharose (sucrose) | DAEJUNG | 7501-4400 | |
| Small animal isoflurane anaesthetic system | Summit | ||
| Acrylic bar | The apparatus was made in the lab for TST test | ||
| Tail suspension box | The apparatus was made in the lab | ||
| Timer | Electronics Tomorrow | TL-2530 | |
| Water bottle | Jeung Do B&P | JD-C-79 |
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