بين زرع الأعضاء الصلبة البطن، الطعوم البنكرياس هم عرضه لتطوير الأضرار الفساد المرتبطة بالإصابة ضخه الاسكيمية شديدة، مما يؤدي في نهاية المطاف إلى فقدان الفساد المبكر. ويصف هذا البروتوكول نموذج لزرع بنكرياس موريني باستخدام تقنية غير خياطة الكفة، مناسبة بشكل مثالي لتحليل هذه الأضرار المبكرة، والضارة بالصحة.
نماذج الماوس له مزايا عديدة في بحوث زرع الأعضاء، بما في ذلك سهولة التعامل، ومجموعة متنوعة من السلالات وراثيا محددة تحديداً جيدا، وتوافر نطاق أوسع من المسابر الجزيئية والمواد الكاشفة لأداء في فيفو ، فضلا عن في المختبر الدراسات. استناداً إلى تجربتنا مع نماذج مختلفة من زرع مورين، قمنا بتطوير نموذج زرع بنكرياس هيتيروتوبيك في الفئران بقصد تحليل الآليات الكامنة المرتبطة بالإصابة أضرار الفساد المبكر الاسكيمية شديدة ضخه. خلافا للسابق وصف تقنيات استخدام تقنيات خياطة، وهنا يصف لنا إجراء جديد باستخدام تقنية غير خياطة الكفة.
في السنوات الأخيرة، وقد أجرينا أكثر من 300 عمليات زرع البنكرياس في الفئران مع معدل نجاح العام > 90%، نسبة نجاح وصف ابدأ قبل في زرع بنكرياس الماوس. العمود الفقري لهذا الأسلوب غير خياطة الكفة لعودة التوعي الفساد يتكون من خطوتين رئيسيتين: (ط) سحب السفينة المتلقية أكثر البولي إيثيلين/بولي أميد الكفة وتحديد ذلك مع حرف مزدوج كفافى، و (ثانيا) وضع السفينة الجهات المانحة على افيرتيد السفينة المتلقية وتحديد ذلك مع حرف مزدوج كفافى ثانية. الناتجة عن ذلك استمرارية النتائج الطبقة غشائي في الآفات ثرومبوجينيك أقل بمعدلات عالية من سالكيه، وأخيراً معدلات نجاح عالية.
في هذا النموذج، وملامسة الشرياني يتحقق عن طريق سحب الشريان الاورطي البطني من الاختلاس المانحة عبر الشريان السباتي المشترك افيرتيد للحيوان المتلقي. التصريف الوريدي للفساد يتحقق عن طريق سحب الوريد البابي للاختلاس على حبل الوريد الخارجي افيرتيد للمتلقي. ويقدم هذه المخطوطة تفاصيل وخطوات حاسمة لاستعادة الجهاز والجهاز غرس الإجراءات التي سوف تسمح للباحثين ذوي المهارات ميكروسورجيكال للقيام الزرع بنجاح في مختبراتها.
زرع البنكرياس الكلي المتزامنة (SPK) يمثل المعيار الحالي للرعاية للمرضى الذين يعانون من مرض البول السكري ونهاية مرحلة المرض الكلوي. نتائج زرع ناجحة في استقلال الأنسولين طويلة الأجل المرتبطة بتحقيق الاستقرار أو التراجع حتى ميكروانجيوباثي السكري و نوعية حياة أفضل1. ومع ذلك، خلافا لزرع الجهاز الصلبة المشتركة الأخرى، مثل الكلي وزرع الكبد، البنكرياس الطعوم أكثر عرضه للإصابة ضخه الاسكيمية (IRI). الحوادث المبلغ عنها ليصل إلى 35% الخطر الاختلاس، بل حتى المريض، البقاء على قيد الحياة2،3.
الأكسدة، اضطرابات ميكروسيركولاتوري، وزيادة التعبير السيتوكينات الموالية التحريضية، وجزيئات الالتصاق الناتج أخيرا في تفعيل بطانية وفقدان سلامتها، كل نسبت إلى هذه الإصابة غير متمكنة من الفساد 4-الآليات الجزيئية الدقيقة من IRI معروفة إلى حد كبير وحتى الآن، قد تختلف من جهاز لجهاز.
وعلى الرغم من التقدم الكبير في استخدام نماذج في المختبر ، تطوير نماذج حيوانية أمر حاسم لتعميق المعرفة بالآليات الجزيئية التي تشارك في الفساد المرتبطة بأي آر أي تعديلات بعد زرع البنكرياس. وقد وضعت عدة نماذج زرع بنكرياس في القوارض5،6، ولكن يقال واحد فقط في الفئران7. كعب أخيل لهذه الغاية مطالبين microsurgical الداخلي هو معدل بقاء انخفاض نسبة 46 في المائة. ومع ذلك، تمثل نماذج الماوس أفضل نموذج للبحوث المتعلقة بزرع الأعضاء، نظراً لأكبر مجموعة من أدوات التحليل الجزيئي يمكن أن تطبق عليهم. استناداً إلى خبرة واسعة ميكروسورجيكال في الفئران مع الجهاز مختلف عمليات الزرع8،،من910، قمنا بتطوير تقنية جديدة، واستنساخه بدرجة عالية للبنكرياس هيتيروتوبيك، وسرطان عنق الرحم زرع في الفئران مع > نسبة النجاح 90% باستخدام تقنية غير خياطة الكفة. مع هذا الأسلوب، يتم تقليل التعقيدات المتصلة أناستوموسيس إلى الحد أدنى، ويمكن تحقيق نسبة نجاح عالية بالمقارنة مع نموذج خياطة11. وحتى الآن، قد وصف نموذج الماوس واحد فقط مع معدلات نجاح مماثل ليو وآخرونفي12. ومع ذلك، لا توجد دراسات نشرت حتى الآن باستخدام هذا النموذج.
أضرار الفساد المرتبطة بفرجينيا الملازمة لزرع الأعضاء الصلبة، ويتميز باضطراب في دوران الأوعية الدقيقة. تراكم نواتج الأيض عدة خلال المرحلة الدماغية، والشروع في شلالات التحريضية وساطة أساسا من الأنواع الأكسجين والنيتروجين التفاعلي، النتائج في تلف الأنسجة خلال الابتزاز ضخه4. تتالي هذا قد يعرض للخطر نجاح ليس فقط على المدى القصير، ولكن أيضا على المدى الطويل، ومن ثم كثيرا التأثيرات و بقاء المرضى14. وحتى الآن، يمثل زرع البنكرياس الكلي مجتمعة، والعلاج المفضل للمرضى الذين يعانون من نوع السكري 1 مع نهاية مرحلة المرض الكلوي15. وقد أظهرت دراسات عديدة أن زرع بنكرياس الكلي مشتركة ناجحة لم يكن سوى استعادة وحماية وظائف الكلي الاختلاس في المستلمين السكري، لكن أيضا استقرار أو حتى عكس مضاعفات ثانوية، بما في ذلك الأعصاب، وكذلك المشاريع المتناهية الصغر وماكروانجيوباثي16،،من1718.
وعلى الرغم من الجهود المستمرة في الحد، والاستبدال، وصقل (3 R) في أبحاث الحيوانات، استنساخ عمليات الفيزيولوجية المرضية المعقدة مثل فرجينيا مستحيل مجرد في الإعدادات في المختبر . ولذلك، تزال تعتبر نماذج حيوانية لتكون أداة مثالية للبحوث متعدية19،20. نماذج الماوس مثل الموضحة هنا له مزايا عديدة مقارنة بالفئران أو الحيوانات الأخرى نماذج. وهذه تشمل توافر كميات هائلة من سلالات الماوس فطري وراثيا المحددة جيدا (مثل سلالات معدلة وراثيا والمغلوب) وعدد كبير من أدوات التحليل الجزيئي، فضلا عن وسيلة سهلة ورخيصة التعامل مع21. وميزة رئيسية لنموذج وصف يكمن في الأسلوب غير خياطة الكفة. باستخدام هذه التقنية المعروضة هنا، معدلات نجاح > 90% قابلة للتحقيق، وهو كبير أفضل النماذج الموصوفة سابقا بالمقارنة مع22. باستخدام هذا الأسلوب غير خياطة، خفضنا إلى حد كبير المضاعفات الشائعة مثل صدمة غائر، وتجلط الدم، وتضيق أناستوموسيس12. وثمة ميزة أخرى لهذا الأسلوب يتكون من موقف خارج البطن للفساد، الذي يرتبط بالانتعاش السريع بعد العملية الجراحية للمتلقي. بالإضافة إلى ذلك، يجعل موقع عنق الرحم مناسبة تماما في فيفو التحليلات، مثل التصوير الحي للابتزاز من اكستيريوريشن دون أي توتر22.
ويعتبر العيب الرئيسي لهذا النموذج هو انسداد مجرى البنكرياس، التي لا تشبه واقع السريرية. في هذا النموذج، يتولى تصريف إفرازات ربط القناة تشوليدوتشو-البنكرياس. على المدى الطويل، وهذا النتائج في التليف ملحوظ وضمور الغدة دون أن يؤدي إلى التهاب البنكرياس22graft. بسبب هذا التدهور في إفرازات الأنسجة، الذي لاحظ أننا أقرب كما في يوم 30 بعد زرع الأعضاء، ونحن نعتقد أن هذا النموذج غير مناسبة لفترة طويلة الأجل المراقبة. وفي المقابل، يجعل وظيفة الغدد الصماء فوائضه ضوابط gylcemic المستلم كأداة سهلة لتقييم يومي للدالة من الاختلاس13،،من2324.
وهذه الخصائص تجعل هذا نموذجا مثاليا لتحليل مبكر الاختلاس الإصابات المرتبطة بالحفاظ على فترات طويلة أو مع الحفاظ على مختلف الحلول والتقنيات. ولتحقيق النجاح الأمثل مع هذا النموذج، يجب النظر في عدة خطوات حاسمة. البنكرياس نفسها عرضه للتلاعب. ولذلك، يقلل لطيف التعامل مع استخدام العصي القطن أثناء استرداد الجهاز وغرس الصدمات الميكانيكية. وينبغي تجنب استيعاب مباشرة الغدة مع الملقط، أنه سيفضي حتما إلى أضرار شديدة الفساد. ولنفس السبب، يتم استرداد جنبا إلى جنب مع البنكرياس الطحال، ويستخدم كمؤشر. وهذا هو أيضا أنشئت في الممارسة السريرية. شرك آخر ينطوي على التروية الباردة، الذي يتحقق من نضح عبر الجذع الابهري باستخدام حل نضح الحامض الأميني-تريبتوفان-كيتوجلوتاراتي 4 درجات مئوية. بموجب هذا، يمكن تجنبها تورم الغدة مفرطة التي بيرفوسينج برفق الاختلاس. يجب استخدام الحل نضح المتبقية يبلل الاختلاس، بغية الحفاظ على درجة الحرارة المنخفضة أثناء استرداد الجهاز.
فيما يتعلق بإعداد المستلم مجموعات تشريح دقيق من حبل الوريد الخارجي فضلا عن الشريان السباتي المشترك القاعدة لنجاح ريفاسكولاريسيشن. في التعرض الكامل وخاصة الوريد عن طريق إزالة جميع روافد، ليس فقط، بل أيضا في الأنسجة الدهنية المحيطة بها، هي ضرورية من أجل تفادي الضغط الخارجي وتضيق بالانسجة الدهنية المتبقية. اختيار أقطار الكفة المناسبة أمر حاسم. استناداً إلى التجربة المشتركة، للفئران وزنها بين 25 إلى 28 ز، قطر داخلي ملم 0.57 للرباط الشرياني، وبين 0.75 و 0.8 ملم للرباط الوريدي، من المناسب. تنظيف قطع حواف الأصفاد دقيقة، إلزامية لتجنب تمزيق السيجارة السفينة. ويتحقق توسع الأوعية، لا سيما من الشريان، أفضل باستخدام سفينة ديلاتاتورس مع نصائح الجميلة. وكقاعدة عامة، ينبغي أن تكون السفينة قادرة على الاتساع التجويف مرتين من الرباط. أثناء عملية افيرتينج السفينة أكثر وتحديد ذلك في الرباط، نوصي بتثبيت المشابك الأوعية الدموية بوضعها تحت رفرف جلد، كما هذا يخفف من هذه الخطوة الحاسمة.
وكما سبق ذكره، غير خياطة الكفة-التقنية يمثل طريقة سهلة لملامسة الأوعية الدموية ويمكن تنفيذها ضمن 5 دقائق. الموضع الصحيح للفساد في منطقة الرقبة للمستلم غير ذات أهمية قصوى لعودة التوعي الصحيح. بموجب هذا، الموضع الصحيح النهائي من الفساد في منطقة الرقبة قد المتوقعة بغية السماح ملامسة آمنة ومستقيمة وخالية من التوتر في الوريد والشريان. وقد السفن التي تكون طويلة جداً تجنبها، إذ قد يؤدي ذلك إلى إعاقة التدفق إلى الخارج بسبب مجعد. ولنفس السبب، الرباط-المقبض في ملامسة وريدي كما ينبغي إزالة بعد ضخه. في حالات النزف مترجمة من الاختلاس البنكرياس، يمكن تحقيق الأرقاء ناجحة عن طريق ضغط على الجانب النزيف لمدة 5 دقائق باستخدام العصي القطن بلطف. وهذا هو الطريق الوحيد الناجح لإدارة هذا النوع من المضاعفات.الكي، حتى ولو انتقائية للغاية، أدى إلى فقدان الفساد في جميع الحالات تقريبا، بسبب التهاب البنكرياس نخرية.
وباختصار، قمنا بتطوير طريقة لزرع البنكرياس في الفئران استخدام تقنية غير خياطة الكفة، ممكناً من الناحية التقنية وميكروسورجيكالي ومعدلات نجاح ممتازة. نظراً لتليف بروجريدينت البنكرياس بسبب انسداد مجرى الهواء، هذا النموذج هي مناسبة أفضل للمجالات البحثية التي تركز على بداية الفساد الأضرار. ويهدف هذا المخطوط للسماح للباحثين بأمان إنشاء هذا النموذج في مختبراتها.
The authors have nothing to disclose.
هذا العمل أيده المنح #2008-1-596 و # يوني-0404/1956 “Tiroler ويسينشافتسفوندس (توف)” (https://www.tirol.gv.at/en/)، وعن طريق منحة #2013-042018 من “Förderungsprogramm بدء تشغيل واجهة المستخدم المتعددة اللغات” في “إنسبروك الجامعة الطبية”.
Adventitia Scissors | S&T | S-00102 | Straight |
Dumont # 7 Forceps | FST | 11271- 30 | Curved Tip 0.17 x 0.1 mm |
Yasargil Clip Mini Permanent 7mm | Aesculap | FE720K | |
Micro vessel clip | S&T | B1 00396 V | |
Vessel dilatator | S&T | D-5a.2, 00125 | |
Clip applier | S & T | CAF-4 00072 | for venous cuff |
Clip applier | Aesculap | FE572K | for the arterial cuff |
Polyethylene tube | Portex Ltd | Inner diameter 0.75 mm for venous cuff | |
Polymide tubing | Vention Medical | 141-0051 | Inner diameter 0.8 mm (Alternative for polyethylene tube from Portex Ltd) |
Polymide tubing | Vention Medical | 141-0033 | Inner diameter 0.57 mm for arteriail cuff |
Bipolar forceps | Micromed | 140-100-015 | |
8/0 silk ligatures | Catgut GmbH, Merkuramed | 17209008 | |
Custodiol HTK solution | Dr. Franz Köhler Chemie | 59997 | |
Ketamin Graeub | aniMedica GmbH | 32554 | |
Xylasol Graeub | aniMedica GmbH | 50855 |