Análisis por citometría de flujo de células inmunes dentro de aortas murino

La aterosclerosis es un proceso inflamatorio crónico de los barcos de tamaño medio y grande que se caracteriza por la formación de placas consiste en células espumosas, células del sistema inmune, las células vasculares endoteliales y de músculo liso, plaquetas, la matriz extracelular, y un núcleo rico en lípidos, con extensa necrosis y fibrosis de los tejidos circundantes. ¹ Los brazos innata y adaptativa de la respuesta inmune están implicados en la iniciación, desarrollo y la persistencia de la aterosclerosis. ^{2, 3} hay un importante cuerpo de evidencia de que los diferentes subconjuntos de las células inmunes, como los macrófagos, dendríticas las células, los linfocitos T y B, están presentes en las aortas de los ratones sanos y con tendencia ^{aterosclerosis-4.} Además, las células inmunes se encuentran en la adventicia aórtica rodea lo que sugiere un papel importante de este tejido en la aterogénesis. ²

Desde hace algún tiempo, la detección cuantitativa de los diferentes tipos de células del sistema inmune, su estado de activación, y la composición celular dentro de la pared de la aorta se vio limitada por RT-PCR y los métodos de inmunohistoquímica para el estudio de la aterosclerosis. Pocos intentos se hicieron para realizar citometría de flujo utilizando aortas humanos, y una serie de problemas, tales como una alta autofluorescencia, se han reportado ^5,6. Las placas ateroscleróticas humanas fueron digeridos con colagenasa 1, y se recogieron las células libres y se tiñeron de CD14 + / + CD11c para destacar derivada de macrófagos en células espumosas. En este estudio, un "simulacro" de canal se utiliza para evitar falsos positivos tinción. ⁶ material necrótico acumulado durante el proceso de digestión dar lugar a una gran cantidad de desechos que genera una alta autofluorescencia en las muestras de la aorta. Para resolver este problema, un panel de controles positivos y negativos se ha propuesto, pero sólo la doble tinción se podría aplicar en estas muestras. Hemos desarrollado un nuevo flujo de citometría basado en el método ⁷ para analizar la composición de las células inmunitarias y caracterizar la activación, proliferación, diferenciación de las células inmunes en aorta sana y propenso aterosclerosis. Este método permite la investigación de la composición de las células inmunes de la pared aórtica y abre la posibilidad de utilizar una amplia gama de métodos inmunológicos para la investigación de los aspectos inmunológicos de la enfermedad.