Murine Aortas 이내에 면역 세포의 흐름 Cytometry 분석
Summary
본 논문은 aortas의 면역 성분을 조사하기 위해 흐름 cytometry 기반 방법을 제공합니다. 신문은 또한 별도로 주변 adventitia 및 혈관 벽을 검사 수 있습니다 추가 기법을 보여줍니다. 이 방법은 대동맥 leukocytes의 phenotypical 분석을 수행하고 죽상 경화증 연구에 대한 몇 가지 면역 assays을 적용하는 가능성을 엽니다.
Abstract
죽상 경화증은 거품 세포, 면역 세포, 혈관 내피 및 평활근 세포, 혈소판, 세포외 기질, 그리고 광범위한 괴사와 지질이 풍부한 코어로 구성된 plaques의 형성에 의해 특징 있으며 중간 및 대형 선박의 만성 염증성 과정 주변 조직의 섬유증. 면역 반응 1 타고난과 적응 무기가 죽상 경화증의 개시, 개발 및 지속성에 참여합니다. 2, 3이 증거의 중요한 기관이다 같은 macrophages로 면역 세포의 서로 다른 하위 집합, 돌기 그 세포, T 및 B lymphocytes은 건강하고 죽상 경화증 발생하기 쉬운 생쥐 4 aortas 내에 존재한다. 또한 면역 세포는 atherogenesis이 조직의 중요한 역할을 제안 주변 대동맥 adventitia에서 찾을 수 있습니다. 2
얼마 동안, 면역 세포들이 활성화 상태 및 대동맥 벽 내의 세포 성분의 다른 유형의 양적 감지 죽상 경화증의 연구에 대한 RT – PCR과 immunohistochemical 방법으로 제한되었다. 몇 가지 시도는 인간의 aortas를 사용하여 유동세포계측법을 수행하기 위해 만들어진, 그리고 높은 autofluorescence 같은 문제의 숫자가 5,6를보고되었습니다. 인간 atherosclerotic plaques는 collagenase 1 소화했고, 무료로 세포는 CD14에 대한 수집 및 스테인드되었습니다 + / CD11c + 대식 세포 – 파생 거품 세포를 강조합니다. 본 연구에서는, "모의"채널은 거짓 – 긍정적인 얼룩을 방지하는 데 사용되었다. 소화 과정에서 축적 6 괴사성 물질 대동맥 표본에서 높은 autofluorescence를 생성 파편 많은 양의 상승을 제공합니다. 이 문제를 해결하려면, 부정과 긍정적인 컨트롤 패널이 제안되어 있으나, 이중 염색법는이 샘플에 적용 될 수 있습니다. 우리는 면역 세포 성분을 분석하고 활성화, 증식, 건강하고 죽상 경화증 발생하기 쉬운 대동맥에서 면역 세포의 분화를 특징하는 새로운 흐름 cytometry 기반의 방법 7을 개발했습니다. 이 방법은 대동맥 벽의 면역 세포 조성의 조사를 허용하고이 질병의 면역 측면의 조사에 대한 면역 방법의 광범위한 스펙트럼을 사용하는 가능성을 엽니다.
Protocol
Discussion
여기, 우리는 murine aortas의 면역 세포 조성의 조사를위한 흐름 cytometry 기반의 방법을 제시한다. 이 방법의 가장 큰 장점은 단일 세포 수준에서 대동맥 면역 세포를 분석하고 대동맥 leukocytes의 정품 인증 상태를 특징하는 능력입니다. 이 방법은 murine aortas로 제한하고 (발표되지 않은 데이터) 등 10 등 내유 동맥, 대동맥 밸브 및 관상 동맥과 같은 인간의 표본을 분석하기 위해이 접근법을 사?…
Offenlegungen
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
PO1 HL55798 (KL)를 미국 심장 협회 과학 발전 부여 0525532U (예)을 :이 작품은 보건 부여의 국립 연구소에 의해 지원되었다.
Materials
| Material | Catalog Number | Company |
| Collagenase XI | C7657 | Sigma-Aldrich |
| Hyaluronidase | H3506 | Sigma-Aldrich |
| DNase I, type 2 | D4527 | Sigma-Aldrich |
| Collagenase I | C0130 | Sigma-Aldrich |
| Collagenase II | LS004174 | Worthington Biochemical Corporation |
| Elastase | LS002292 | Worthington Biochemical Corporation |
Referenzen
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