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JoVE 杂志 免疫与感染
Visualization of Inflammatory Caspases Induced Proximity in Human Monocyte-Derived Macrophages
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Visualizzazione della prossimità indotta da caspasi infiammatorie nei macrofagi derivati da monociti umani

DOI:
10.3791/63162-v

•

08:41 min

•

April 06, 2022

•

,
1Department of Pediatrics, Division of Hematology-Oncology, Department of Molecular and Cellular Biology, Texas Children’s Hospital William T. Shearer Center for Human Immunobiology,Baylor College of Medicine

Chapters

  • 00:04Introduction
  • 00:51Preparation of Cells for Electroporation
  • 02:11Nucleofection of Caspase BiFC Components into Human Monocyte-Derived Macrophages
  • 04:41Treatment of Transfected MDM and Caspase BiFC Data Acquisition
  • 06:37Results: Differentiation of CD14-Monocytes and Transfection of Human Monocyte-Derived Macrophages
  • 08:12Conclusion

Summary

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Questo protocollo descrive il flusso di lavoro per ottenere macrofagi derivati da monociti (MDM) da campioni di sangue umano, un metodo semplice per introdurre in modo efficiente i reporter della complementazione di fluorescenza bimolecolare della caspasi infiammatoria (BiFC) nell'MDM umano senza compromettere la vitalità e il comportamento cellulare e un approccio basato sull'imaging per misurare l'attivazione della caspasi infiammatoria nelle cellule viventi.

Tags

Inflammatory CaspasesProximityHuman Monocyte-derived MacrophagesVisualizationMolecular-levelPrimary Immune CellsOligomerizationMicroscopic MethodologiesTrypsin-EDTAPBSCell NumberHemocytometerReporter PlasmidCaspase BiFC PlasmidsNucleofectionElectroporation

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