Summary

Du-Moxibustión en un modelo de ratón de espondilitis anquilosante

Published: October 27, 2023
doi:

Summary

En este trabajo se describen en detalle los procedimientos de operación y las precauciones que deben tomarse durante la Du-moxibustión en el tratamiento de la espondilitis anquilosante en ratones experimentales.

Abstract

La espondilitis anquilosante (EA) es una forma de artritis que empeora progresivamente y es incapacitante y afecta principalmente al esqueleto axial. Esta enfermedad afecta principalmente a la columna vertebral y a la articulación sacroilíaca. La fusión de la columna vertebral y la articulación sacroilíaca puede ocurrir en la etapa posterior de la enfermedad, lo que resulta en rigidez y cifosis de la columna, así como dificultad para caminar, lo que afecta gravemente la calidad del trabajo y las actividades de la vida diaria e impone una pesada carga al paciente, la familia y la sociedad. Se ha prestado cada vez más atención a la no farmacoterapia como terapia alternativa para la EA. La moxibustión es una técnica terapéutica milenaria utilizada en la Medicina Tradicional China (MTC). La terapia de du-moxibustión, un tratamiento externo único e innovador desarrollado sobre la base de la moxibustión ordinaria, tiene un efecto terapéutico definitivo sobre la EA. La du-moxibustión combina hábilmente las técnicas compatibles de la medicina tradicional china para integrar los meridianos, los puntos de acupuntura, la medicina herbal china y la moxibustión. En este trabajo se describen en detalle los procedimientos de operación y las precauciones que se deben tomar durante la Du-moxibustión en ratones experimentales para proporcionar una base experimental para el estudio del mecanismo de la Du-moxibustión en el tratamiento de la EA.

Introduction

La espondilitis anquilosante (EA) es una forma de artritis que empeora progresivamente y es incapacitante y afecta principalmente al esqueleto axial. Según la última encuesta epidemiológica, ~0,01%-1,8% de las personas en el mundo padecen esta afección1, la mayoría de los cuales son hombres jóvenes (la proporción hombre-mujer es de ~2-3:1)2. La incidencia de EA en la población china es del 0,2% al 0,4%. Esta enfermedad afecta principalmente a la columna vertebral y a la articulación sacroilíaca. La fusión de la columna vertebral y la articulación sacroilíaca puede ocurrir en las últimas etapas de la enfermedad, lo que resulta en rigidez y cifosis de la columna, así como dificultad para caminar, lo que afecta seriamente la calidad del trabajo y las actividades de la vida diaria e impone una pesada carga para el paciente, la familia y la sociedad1. En la actualidad, no existe una solución definitiva para la EA, y los tratamientos proporcionados, tanto farmacológicos como no farmacológicos, se centran principalmente en aliviar el dolor, ralentizar la progresión de la enfermedad y mejorar la calidad de vida. En los últimos años, debido a que las opciones farmacoterapéuticas han sido muy limitadas3, se ha prestado cada vez más atención a la no farmacoterapia, que se ha convertido en una terapia alternativa para la EA. En China, los pacientes suelen preferir un tratamiento externo que consiste en la Medicina Tradicional China (MTC), que tiene efectos secundarios menores y una gran comodidad durante el tratamiento.

La moxibustión es una técnica terapéutica antigua utilizada en la medicina tradicional china. La du-moxibustión es una técnica de tratamiento externo que consiste en “moxibustión medicada con espuma” en el segmento de la columna vertebral del meridiano de Du. Se utiliza principalmente en el tratamiento de la EA y ha demostrado su seguridad y eficacia. En comparación con la moxibustión ordinaria, la Du-moxibustión tiene las características de una amplia área de moxibustión, un gran cono de moxa, una gran potencia de fuego y una alta temperatura4. Una revisión sistemática y un metanálisis sugieren que la moxibustión es un tratamiento complementario eficaz para la EA5. Un estudio reciente confirmó que los síntomas clínicos y algunos factores inflamatorios de los pacientes con EA mejoraron con la moxibustión6. Los estudios han revelado que la Du-moxibustión puede aumentar el contenido cerebral de β-endorfina y ejercer un efecto analgésico central7, regular a la baja la expresión del gen HLA-B27 8 y retrasar la tasa de recurrencia de la EA. La du-moxibustión también tiene un efecto mejorador en la progresión de la EA al disminuir el índice inflamatorio VSG (VSG) y los niveles de proteína C reactiva (PCR), péptido C-terminal de colágeno tipo I (CTX-I) y proteína Dickkopf1 (DKK1)9,10.

Otro estudio clínico mostró que la Du-moxibustión puede ajustar aún más los subconjuntos de células T desordenadas, Ig y complemento C3 para equilibrar el mecanismo inmunológico11. En términos de metabolismo óseo, la moxibustión puede inhibir el aumento de la fosfatasa alcalina sérica (ALP) y el fósforo sérico (S-P), aumentar el calcio sérico (S-Ca), la densidad mineral ósea (DMO) y la fuerza ósea12. Además, la Du-moxibustión puede reparar la función de la columna vertebral en múltiples puntos para aliviar los síntomas de fatiga en pacientes con EA13. Algunos estudios en animales han revelado el mecanismo potencial de la moxibustión en el tratamiento de la EA. Un estudio indicó que la moxibustión mejoró significativamente el estado de salud general, redujo los niveles de grosor de las patas y disminuyó los niveles de IL-1β, PGE2, IL-6 y TNF-α en las muestras de tejido ligamentoso de la columna vertebral. El análisis de la vía metabólica vinculó los metabolitos identificados con el ciclo del TCA, así como con el metabolismo de lípidos, aminoácidos, flora intestinal y purinas14. Otro estudio mostró que la moxibustión suprimió la expresión de citocinas proinflamatorias, IL-1β, TNF-α, IL-17 e IL-6; redujeron los niveles de ARNm de RANKL, RANK, ALP y OCN; y mejoró las características histopatológicas en ratones AS15.

Si bien estos estudios sugieren que la moxibustión puede ser eficaz en el tratamiento de la EA, se necesita más investigación para confirmar estos hallazgos y determinar el protocolo de tratamiento óptimo para la moxibustión en pacientes con EA. Nuestro equipo creó y modificó la terapia de moxibustión basada en la teoría básica y el funcionamiento práctico de la moxibustión tradicional china, que se ha llevado a cabo y aplicado ampliamente en la práctica clínica china durante más de 35 años. Aunque hay pocos estudios de alta calidad sobre el tratamiento de la EA mediante Du-moxibustión, su indicación en el tratamiento de la EA ha sido respaldada por la evidencia. Sin embargo, el mecanismo de tratamiento de la EA con Du-moxibustión es digno de un estudio más profundo. El estudio en animales es un método importante para explorar el mecanismo de la Du-moxibustión en el tratamiento de la EA. El funcionamiento clínico de la Du-moxibustión está relativamente maduro, pero rara vez se utiliza en el estudio del mecanismo en experimentos con animales. En este trabajo se describe en detalle el funcionamiento y las precauciones que deben tomarse durante la Du-moxibustión en el tratamiento de ratones experimentales con EA.

Protocol

Todos los experimentos con animales fueron aprobados por el Comité de Revisión de Ética del Bienestar de los Animales Experimentales de la Universidad de Medicina Tradicional China de Shandong (No. SDUTCM20230831301). 1. Preparación animal Determinar de antemano los grupos experimentales y el número de animales por grupo. Elija ratones machos BALb/c, alójelos a una temperatura constante de 22 ± 1 °C, humedad constante de 60 ± 5% y ambiente de luz d…

Representative Results

Los ratones modelo inducidos por PG desarrollaron síntomas de artritis periférica, caracterizada por enrojecimiento e hinchazón de las extremidades y los dedos de los pies, y desarrollaron gradualmente artritis axial ya en la semana 14, que es muy similar a la manifestación de la EA. Por lo tanto, el modelo de ratón AS se consideró exitoso si el índice de artritis (IA) era superior a 3 puntos a las 14 semanas después de la última inyección22. Cuando las patas de los ratones parecían hin…

Discussion

La EA se manifiesta clínicamente como dolor de espalda, lumbar e hinchazón articular, y en casos graves puede producirse deformidad de la columna vertebral y rigidez articular26. El diagnóstico y el tratamiento tempranos pueden mejorar la calidad de vida, reducir las tasas de discapacidad y mejorar el pronóstico de los pacientes con EA. Según la medicina tradicional china (MTC), se cree que el síndrome de Asperger es causado por una deficiencia de Yang en el riñón y el meridiano Du, así c…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Este trabajo fue apoyado por el Programa General de la Fundación Nacional de Ciencias Naturales de China (No.82174491) y el Proyecto de Herencia de la Escuela Académica de Medicina Tradicional China Qilu (No. Lu Weihan [2020]132). Gracias al Centro de Animales de Laboratorio de la Universidad de Medicina Tradicional China de Shandong por proporcionarnos condiciones experimentales.

Materials

10% EDTA Shanghai Macklin Biochemical Co., Ltd.,Shanghai, China
alcohol pads HYNAUT, Qingdao Hainuo Biological Engineering Co., LTD, Qingdao, China
anesthesia machine Medical Supplies & Services INT. LTD, Keighley, UK
centrifuge tubes Axygen, Corning, NewYork, UAS
complete Frech's adjuvant (CFA) aladdin,Shanghai, China F393378
cotton ball Henan RUIKE MEDICAL Equipment Co., Ltd.,Xinxiang, China
cotton gauze Henan RUIKE MEDICAL Equipment Co., Ltd.,Xinxiang, China
cutting board self-preparation
decorin from bovine articular cartilage Sigma-Aldrich, MO, USA D8428
depilatory cream Veet, Reckitt Benckiser (China) Investment Co. LTD, Shanghai, China
electronic scale Shanghai Yajin Electronic Technology Co., Ltd.,Shanghai, China
Eppendorf tube Axygen, Corning, NewYork, UAS
eye lubricant Beijing Shuangji Pharmaceutical Co., LTD., Beijing, China
ginger self-preparation
GraphPad Prism 7 software GraphPad Software,Boston, USA
hair clipper Super human Group CO LTD, Jinhua, China
heating pads Shenzhen Leshuo Tech Co., Ltd.,Shenzhen, China
incomplete Freund’s adjuvant (IFA) aladdin,Shanghai, China F393371
injection syringe Shandong Xinhua Ande Medical Supplies Co., LTD, Zibo, China
isoflurane Shenzhen Rayward Life Technology Co., LTD, Shenzhen, China R510-22-10
joss stick Shijiazhuang Lidu Fragrant Industry Co., LTD.,Shijiazhuang, China
juicer Braun (Shanghai) Co., Ltd.,Shanghai, China
knife self-preparation
lighter Zhejiang tiger-lighter Co. LTD
mortar Luoyang Yinai Ceramic Technology Co., LTD.,Luoyang, China
Mouse IL-17 ELISA Kit absin, Shanghai, China abs520009-96T
Mouse TNF-α ELISA Kit Wuhan Sanying, Wuhan, China KE10002
mulberry paper Yishui County Mulinsang paper Co., LTD, Linyi, China
OFT Xinruan,Shanghai, China XR-XZ301
paper cup self-preparation
pipettes OXFORD BIO INSTRUMENTS INC.,Oxford, UK
refined moxa velvet self-preparation
rotarod Xinruan,Shanghai, China XR-6C
scientz-48L cryogenic high throughput tissue grinder Ningbo Xinzhi Biotechnology Co., LTD
scissors Shandong Jiaren Medical Supplies Co., Ltd., Zibo, China
semi-automatic paraffin sectioning machine Leica Camera AG, Watznach, Germany
SPSS 25.0 software International Business Machines Corporation, NewYork, UAS
TCM powder self-preparation
tips Biosharp, Labgic, Beijing, China
writing brush Yishui County Mulinsang paper Co., LTD, Linyi, China

References

  1. Sieper, J., Poddubnyy, D. Axial spondyloarthritis. Lancet. 390 (10089), 73-84 (2017).
  2. Lee, W., Reveille, J. D., Weisman, M. H. Women with ankylosing spondylitis: a review. Arthritis Rheum. 59 (3), 449-454 (2008).
  3. Sari, &. #. 3. 0. 4. ;., Öztürk, M. A., Akkoç, N. N. of ankylosing spondylitis. Turk J Med Sci. 45 (2), 416-430 (2015).
  4. Zhang, L., et al. Governor vessel moxibustion: Ancient Chinese medical technology with new vitality. Chin J Integr Med. 23 (5), 396-400 (2017).
  5. Hu, J., et al. Moxibustion for the treatment of ankylosing spondylitis: a systematic review and meta-analysis. Ann Palliat Med. 9 (3), 709-720 (2020).
  6. Liu, Y., Wang, P., Sun, Y. Y., Qu, J., Li, M. Efficacy of thunder-fire moxibustion in treating ankylosing spondylitis of kidney deficiency and governor meridian cold and its influence on TNF-α and RANKL: study protocol for a prospective, nonblinded, single-center, randomized controlled trial. Trials. 23 (1), 344 (2022).
  7. Chong, G. Q., Ma, Y., Sun, H. S., Zhang, T., Peng, W. Study on clinical and analgesic mechanism of moxibustion in the treatment of ankylosing spondylitis. J Clin Acupunct Moxib. (06), 48-49 (1999).
  8. Liu, W. Q., Lu, X. H. Clinical observation of Melilotus extract tablets combined with Dujiu for treating ankylosing spondylitis. Pharm Res. 35 (03), 182-184 (2016).
  9. Zhang, Y. L., Lin, J. H., Zhou, Y. Y., Zhao, G. Q., He, Y. T. Clinical observation of Bushen Qiangdu Zhilou decoction combined Du-moxibustion in treating ankylosing spondylitis. Chin J Exp Tradit Med Formulae. 21 (10), 190-194 (2015).
  10. Guo, L. J., et al. Clinical effect of moxibustion at governor vessel combined with Bushen Quhan Huashi prescription for ankylosing spondylitis and its effect on levels of CTX-I and DKK1 in serum. New Chin Med. 53 (10), 117-121 (2021).
  11. Deng, Y. X. Governor moxibustion treatment of ankylosing spondylitis the adjustment of the T-cell subsets observed. J Practical Tradi Chin Inter Med. 26 (18), 77-78 (2012).
  12. Wang, Y. Q. Mechanism of exercise combined with moxibustion in the treatment of osteoporosis in castrated rats. Chin J Gerontol. 37 (04), 839-840 (2017).
  13. Ren, J. Y., Li, F., Yan, J., Wan, C., Cai, L. Clinical study of Du-moxibustion combined with needling Huatuo Jiaji acupoint in the treatment of AS of kidney-Yang deficiency. J Clin Acupunct Moxib. 35 (06), 41-44 (2019).
  14. Xu, X., et al. Metabolomic analysis of biochemical changes in the tissue and urine of proteoglycan-induced spondylitis in mice after treatment with moxibustion. Integr Med Res. 10 (1), 100428 (2021).
  15. Xu, X., et al. Moxibustion attenuates inflammation and alleviates axial spondyloarthritis in mice: Possible role of APOE in the inhibition of the Wnt pathway. J Tradit Complement Med. 12 (5), 518-528 (2022).
  16. Li, X., et al. Inflammation intensity-dependent expression of osteoinductive wnt proteins is critical for ectopic new bone formation in ankylosing spondylitis. Arthritis Rheum. 70, 1056-1070 (2018).
  17. Cui, H., et al. CXCL12/CXCR4-Rac1-mediated migration of osteogenic precursor cells contributes to pathological new bone formation in ankylosing spondylitis. Sci Adv. 8 (14), eabl8054 (2022).
  18. Braem, K., Lories, R. J. Insights into the pathophysiology of ankylosing spondylitis: contributions from animal models. Joint Bone Spine. 79 (3), 243-248 (2012).
  19. Mikecz, K., Glant, T. T., Poole, A. R. Immunity to cartilage proteoglycans in BALB/c mice with progressive polyarthritis and ankylosing spondylitis induced by injection of human cartilage proteoglycan. Arthritis Rheum. 30, 306-318 (1987).
  20. Li, Z., et al. Tenascin-C-mediated suppression of extracellular matrix adhesion force promotes entheseal new bone formation through activation of Hippo signalling in ankylosing spondylitis. Ann Rheum Dis. 80 (7), 891-902 (2021).
  21. Glant, T. T., Cs-Szabo´, G., Nagase, H., Jacobs, J. J., Mikecz, K. Progressive polyarthritis induced in BALB/c mice by aggrecan from human osteoarthritis cartilage. Arthritis Rheum. 41, 1007-1018 (1998).
  22. Hu, B., Li, Y., Tan, J. Research progress of moxibustion in the treatment of ankylosing spondylitis. Rheum & Arthritis. 11 (05), 77-80 (2022).
  23. Yang, Y., Dong, Q., Li, R. Matrine induces the apoptosis of fibroblast-like synoviocytes derived from rats with collagen-induced arthritis by suppressing the activation of the JAK/STAT signaling pathway. Int J Mol Med. 39 (2), 307-316 (2017).
  24. Shiotsuki, H., et al. A rotarod test for evaluation of motor skill learning. J Neurosci Methods. 189 (2), 180-185 (2010).
  25. Liu, P., et al. A mouse model of ankle-subtalar joint complex instability induced post-traumatic osteoarthritis. J Orthop Surg Res. 16 (1), 541 (2021).
  26. Taurog, J. D., Chhabra, A., Colbert, R. A. Ankylosing spondylitis and axial spondyloarthritis. N. Engl. J. Med. 374, 2563-2574 (2016).
  27. Schett, G., et al. Enthesitis: From pathophysiology to treatment. Nat. Rev. Rheumatol. 13, 731-741 (2017).
  28. Duan, W. X., et al. Effect of different concentrations of Moxa-smoke on lung function and TNF-α and IL-1 β levels in serum and lung tissues in normal rats. Zhen Ci Yan Jiu [Acupuncture Research]. 43 (2), 98-103 (2018).
  29. Callhoff, J., Sieper, J., Weiß, A., Zink, A., Listing, J. Efficacy of TNFα blockers in patients with ankylosing spondylitis and non-radiographic axial spondyloarthritis: a meta-analysis. Ann Rheum Dis. 74 (6), 1241-1248 (2015).
  30. Schinocca, C., et al. Role of the IL-23/IL-17 pathway in rheumatic diseases: an overview. Front Immunol. 12, 637829 (2021).
  31. Gravallese, E. M., Schett, G. Effects of the IL-23-IL-17 pathway on bone in spondyloarthritis. Nat Rev Rheumatol. 14 (11), 631-640 (2018).
  32. Kenna, T. J., et al. Enrichment of circulating interleukin-17-secreting interleukin-23 receptor-positive γ/δ T cells in patients with active ankylosing spondylitis. Arthritis Rheum. 64 (5), 1420-1429 (2012).
  33. Poddubnyy, D., Sieper, J. Treatment of axial spondyloarthritis: what does the future hold. Curr Rheumatol Rep. 22 (9), 47 (2020).
  34. van der, H. D., et al. Ixekizumab, an interleukin-17A antagonist in the treatment of ankylosing spondylitis or radiographic axial spondyloarthritis in patients previously untreated with biological disease-modifying anti-rheumatic drugs (COAST-V): 16 week results of a phase 3 randomised, double-blind, active-controlled and placebo-controlled. Lancet. 392 (10163), 2441-2451 (2018).
  35. Fu, Y. S., et al. Pharmacological properties and underlying mechanisms of curcumin and prospects in medicinal potential. Biomed Pharmacother. 141, 111888 (2021).
  36. Hassan, A. S., Hofni, A., Abourehab, M. A. S., Abdel-Rahman, I. A. M. Ginger extract-loaded transethosomes for effective transdermal permeation and anti-inflammation in rat model. Int J Nanomedicine. 18, 1259-1280 (2023).

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Yu, W., Li, X., Jia, Z., Hou, Y., Dong, T., Wang, X., Liu, Y., Yang, J. Du-Moxibustion in a Mouse Model of Ankylosing Spondylitis. J. Vis. Exp. (200), e65586, doi:10.3791/65586 (2023).

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