Summary

Тромбоз глубоких вен, индуцированных застой в мышей, под контролем УЗИ высокой частоты

Published: April 13, 2018
doi:

Summary

Настоящий Протокол описывает шаги для получения венозного тромбоза с использованием модели застой. Кроме того мы используем неинвазивный метод измерения тромбообразованию и резолюции с течением времени.

Abstract

Тромбоз является общим условием, влияющих на 1-2% населения, Ежегодная заболеваемость 1 в 500. Тромбоз вен может привести к смерти через легочную эмболию или результаты в постсоветском тромботических синдром, характеризуется хроническим ногу боль, отек и изъязвления, или хронической легочной гипертензии, что приводит к значительным хронических респираторных компромисс. Это наиболее распространенных сердечно-сосудистых заболеваний после инфаркта миокарда и ишемического инсульта и клинической проблемой для всех медицинских дисциплин, как это может осложнить ход других расстройств, таких как рак, системные заболевания, хирургии и основные травмы.

Экспериментальные модели необходимы для изучения этих механизмов. Стасис модель индуцирует последовательной тромб размер и количественной количество тромбов. Однако необходимо систематически перевязать боковые ветви нижней полой вены, чтобы избежать изменчивость тромб размеров и любой интерпретации ошибочных данных. Мы разработали неинвазивный способ измерить размер тромба, с помощью УЗИ. Используя эту технику, мы можем оценить развитие тромба и резолюции со временем в то же самое животное. Данный подход ограничивает количество мышей, необходимых для количественной оценки венозного тромбоза в соответствии с принципом замещения, сокращение и уточнение животных в научных исследованиях. Мы продемонстрировали, что вес тромбов и гистологический анализ тромб размер коррелируют с измерением полученных с УЗИ. Таким образом нынешнее исследование описывает способы побудить тромбоз глубоких вен у мышей с использованием модели нижней полой вены стаза и контролировать его с помощью высокой частоты ультразвука.

Introduction

Венозной тромбоэмболии (ВТЭ), который состоит из тромбоз глубоких вен (ТГВ) и эмболии легочной артерии, является третьей по значимости причиной сердечно-сосудистой смертности после инфаркта миокарда и инсульта. Это является общим условием, влияющих на 1-2% населения, Ежегодная заболеваемость 1 в 5001. ВТЭ может привести к: 1) смерть через легочную эмболию; 2) после тромботических синдром, характеризуется хронической нога боли, отек и язв; или 3) хронической легочной гипертензии, что приводит к значительным хронических респираторных компромисса. ВТЭ является многофакторных заболеваний и может быть результатом застоя кровотока, повреждения сосудистой стенки, и/или гиперкоагуляции государств из-за нарушения баланса между коагуляции и фибринолитической системы, как это было описано более ста лет назад по Вирхов и известен как Вирхов триады.

Потому что в большинстве случаев это невозможно получить образцы человеческого ТГВ, исследователи разработали экспериментальных животных моделей ТГВ. Были использованы несколько животных, включая2крысы, мыши3, кролик4, свинья5, собака6и нечеловеческих приматов7 . Мышь может быть генетически модифицированные и являются наиболее часто используемых животных для изучения ТГВ. Однако как и все животные, спонтанное тромбоза глубоких вен не наблюдается у мышей. Таким образом физические или химические изменения стенки вен используются для создания тромбоза у мышей. Ранее мы использовали модель хлорного побудить тромбоза в нижней полой вены (IVC) мышах8,9,10. Эта модель имеет преимущество надежно производить окклюзионной тромбов в течение нескольких минут и может использоваться для изучения роли анти коагулянта и анти-тромбоцитарный лекарств во время острого тромбоза глубоких вен. Однако это процедура, терминал. Таким образом изучение острых и хронических ТГВ, застой модель является более подходящим. В этой модели образование тромбов индуцируется полного прерывания потока крови в МКВ, одним из факторов в триады Вирхов для развития тромбоза глубоких вен. Эта модель может использоваться для изучения формирования ТГВ и резолюции, что является преимуществом по сравнению с FeCl3 модель11.

Мы разработали неинвазивный метод следовать образование тромбов и резолюции течением времени с помощью системы микро изображений высокой частоты ультразвука12. Ранее мы показали, что измерение венозного тромбоза ультразвуковым положительно коррелирует с тромбов, полученные патологически. В двух последующих исследованиях мы подтвердили, что измерения, полученные с УЗИ коррелируют с весом тромбов и тромбов области количественной гистохимии9,10. Что еще более важно мы показали, что ультразвук высокой частоты может использоваться для мониторинга формирования тромбоз глубоких вен в мышей12. Он также может использоваться для количественного определения тромб резолюции неинвазивным способом.

Здесь мы будем описывать протокол, позволяющий тромбообразованию, используя модель мыши стазис индуцированной тромбоза и как образование тромбов могут контролироваться неинвазивно со временем с помощью высокой частоты ультразвука.

Protocol

Все процедуры были одобрены институциональные животное уход Комитета МакГилл Университет Монреаля, QC, Канада. Все оборудование, необходимое, перечисленных в таблице I. 1. мышиным (C57BL/6J) IVC Stasis протокол Подготовка хирургииПримечание: Это выживание хирургии…

Representative Results

Стасис венозного тромбоза модель В стазис модели мышей находятся под наркозом, и надрез производится подвергать нижней полой вены (IVC). Разрез делается на левой или правой стороне мыши вместо срединная лапаротомия таким образ?…

Discussion

Есть несколько важнейших шагах для его успешной венозной тромбообразованию, с использованием модели застой. Индукции тромбоза вен является более сложным, в старых мышей за счет накопления жира вокруг аорты и нижней полой вены. В идеале мышей, переживает эта процедура должна быть 8 – 10-не…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Эта работа была поддерживает грант от сердца и инсульта Фонд Канады и Моррис и Фонда семьи Fainman Белла. Авторы хотели бы поблагодарить Veronique Мишо за ее техническую помощь VEVO770 ультразвуковой визуализации системы.

Materials

6-0 perma-hand silk suture Ethicon 706G
Surgical Scissors Fine Science Tools 20830-00
Suture tying forceps Fine Science Tools 20830-00
blunt forceps (straight and curved) Fine Science Tools 20830-00
Needle Driver Fine Science Tools 13002-10
Moria Spring Scissors Fine Science Tools 15396-00
1ml syringes BD Biosciences
26G needles Becton Dickinson & Co.
VEVO 770 High Resolution Imaging System Visualsonics No longer sold
SR Buprenorphine ZooPharm Given to LDI by Vet
Surgery Microscope Leica Leica M651
Systan eye oinment Alcon 288/28062-0
2×2 sterile Gauze CDMV #104148
Cotton Tip Applicators from JGH
Transpore hypoallergenic surgical tape CDMV #7411
Ultrasound gel (Aquasonic-100) Dufort & Lavigne #AKEN4061
Incubator From JGH
Isoflurane Dispomed
Anesthetic chamber,hoses, and adminstration equipment Dispomed
Hair remover Nair
Water heated hard pad Braintree Scientific, Inc. #HHP-2
Gaymar heater water pump TP500 MATVET Inc. #R-500305
Infra-red heating lamp electrimat inc. #1R175R-PAR
Mouse rectal temperature prope emkaTECHNOLOGIES
Sterile water From JGH

References

  1. Fowkes, F. J., Price, J. F., Fowkes, F. G. Incidence of diagnosed deep vein thrombosis in the general population: systematic review. Eur J Vasc Endovasc Surg. 25 (1), 1-5 (2003).
  2. McGuinness, C. L., et al. Recruitment of labelled monocytes by experimental venous thrombi. Thromb Haemost. 85 (6), 1018-1024 (2001).
  3. Singh, I., et al. Failure of thrombus to resolve in urokinase-type plasminogen activator gene-knockout mice: rescue by normal bone marrow-derived cells. Circulation. 107 (6), 869-875 (2003).
  4. Itoh, K., Ieko, M., Hiraguchi, E., Kitayama, H., Tsukamoto, E. In vivo kinetics of 99mTc labeled recombinant tissue plasminogen activator in rabbits. Ann Nucl Med. 8 (3), 193-199 (1994).
  5. Kang, C., Bonneau, M., Brouland, J. P., Bal dit Sollier, C., Drouet, L. In vivo pig models of venous thrombosis mimicking human disease. Thromb Haemost. 89 (2), 256-263 (2003).
  6. Knight, L. C., Baidoo, K. E., Romano, J. E., Gabriel, J. L., Maurer, A. H. Imaging pulmonary emboli and deep venous thrombi with 99mTc-bitistatin, a platelet-binding polypeptide from viper venom. J Nucl Med. 41 (6), 1056-1064 (2000).
  7. Wakefield, T. W., et al. Venous thrombosis prophylaxis by inflammatory inhibition without anticoagulation therapy. J Vasc Surg. 31 (2), 309-324 (2000).
  8. Robins, R. S., et al. Vascular Gas6 contributes to thrombogenesis and promotes tissue factor up-regulation after vessel injury in mice. Blood. 121 (4), 692-699 (2013).
  9. Aghourian, M. N., Lemarie, C. A., Bertin, F. R., Blostein, M. D. Prostaglandin E synthase is upregulated by Gas6 during cancer-induced venous thrombosis. Blood. 127 (6), 769-777 (2016).
  10. Laurance, S., et al. Gas6 (Growth Arrest-Specific 6) Promotes Inflammatory (CCR2hiCX3CR1lo) Monocyte Recruitment in Venous Thrombosis. Arterioscler Thromb Vasc Biol. , (2017).
  11. Diaz, J. A., et al. Critical review of mouse models of venous thrombosis. Arterioscler Thromb Vasc Biol. 32 (3), 556-562 (2012).
  12. Aghourian, M. N., Lemarie, C. A., Blostein, M. D. In vivo monitoring of venous thrombosis in mice. J Thromb Haemost. 10 (3), 447-452 (2012).
  13. Brandt, M., et al. Deep vein thrombus formation induced by flow reduction in mice is determined by venous side branches. Clin Hemorheol Microcirc. 56 (2), 145-152 (2014).
  14. Diaz, J. A., Farris, D. M., Wrobleski, S. K., Myers, D. D., Wakefield, T. W. Inferior vena cava branch variations in C57BL/6 mice have an impact on thrombus size in an IVC ligation (stasis) model. J Thromb Haemost. 13 (4), 660-664 (2015).
  15. Luther, N., et al. Innate Effector-Memory T Cell Activation Regulates Post-Thrombotic Vein Wall Inflammation and Thrombus Resolution. Circ Res. , (2016).
  16. Subramaniam, S., et al. Distinct contributions of complement factors to platelet activation and fibrin formation in venous thrombus development. Blood. 129 (16), 2291-2302 (2017).
  17. Diaz, J. A., et al. Thrombogenesis with continuous blood flow in the inferior vena cava. A novel mouse model. Thromb Haemost. 104 (2), 366-375 (2010).

Play Video

Cite This Article
Rys, R. N., Blostein, M. D., Lemarié, C. A. Deep Vein Thrombosis Induced by Stasis in Mice Monitored by High Frequency Ultrasonography. J. Vis. Exp. (134), e57392, doi:10.3791/57392 (2018).

View Video