스테이 시스 고주파 초음파에 의해 모니터링 하는 쥐에 의해 유도 된 깊은 정 맥 혈전 증
Summary
현재 프로토콜 스테이 시스 모델을 사용 하 여 정 맥 혈전 증을 얻기에 단계를 설명 합니다. 또한, 우리는 시간이 지남에 혈전 형성 및 해상도 측정 하는 비-침략 적 방법을 사용 하는.
Abstract
정 맥 혈전 증 1에서 500의 연례 부각 인구의 1-2%에 영향을 미치는 일반적인 상태 이다. 정 맥 혈전 증 폐 색 전 증 또는 결과 만성적인 다리 통증, 붓기, 및 궤, 특징 후 thrombotic 증후군 또는 만성 폐 고혈압 인 중요 한 만성 통해 죽음으로 이어질 수 있습니다 호흡기 타협. 가장 일반적인 심혈 관 질환 심근 경색 및 허 혈 성 뇌졸중 후 이며 암, 조직의 질환, 수술 등 주요 외상 다른 장애의 과정을 복잡 하 게 수로 모든 의료 분야에 대 한 임상 도전 이다.
실험 모델은 이러한 메커니즘을 연구 하는 데 필요한. 스테이 시스 모델 일관성 혈전 크기와 혈전의 정량 금액을 유도합니다. 그러나, 그것은 체계적으로 열 등 한 베 나 정 맥 혈전 크기에서 변화 및 모든 잘못 된 데이터 해석에의 측 지점 선 하는 데 필요한. 초음파를 사용 하 여 혈전 크기를 측정 하는 비-침략 적 기술을 개발 했습니다. 이 기술을 사용 하 여, 우리가 평가할 수 혈전 개발 및 해상도 같은 동물에서 시간이 지남에. 이 방법은 마우스 교체, 감소, 및 연구에 있는 동물의 구체화의 원리와 일치 하는 정 맥 혈전 증의 정량화에 필요한 수를 제한 합니다. 우리는 초음파로 혈전 무게와 측정으로 혈전 크기 상관의 조직학 분석 얻은 증명 하고있다. 따라서, 현재 연구에 높은 주파수의 초음파를 사용 하 여 모니터링 하는 방법 열 등 한 베 나 정 맥 stasis 모델을 사용 하 여 마우스에 깊은 정 맥 혈전 증을 유발 하는 방법을 설명 합니다.
Introduction
정 맥 혈전 색 전 증 (VTE), 깊은 정 맥 혈전 증 (DVT) 폐 색 전 증의 구성 된 심근 경색 및 뇌졸중 후 심장 혈관 죽음의 세 번째 주요 원인입니다. 그것은 1에서 5001의 연간 발생률을 인구의 1-2%에 영향을 미치는 일반적인 조건. VTE 이어질 수 있습니다: 1) 폐 색 전 증; 통해 죽음 만성적인 다리 통증, 붓기, 및 궤; 특징 2) 후 thrombotic 증후군 또는 3) 중요 한 만성 호흡 타협의 결과로 만성 폐 고혈압. VTE는 다중 요인 질병 이며 그것은 전에 백 년 이상 설명으로 혈액의 흐름, 혈관 벽, 또는 hypercoagulable 국가 응고 fibrinolytic 시스템 사이의 균형의 붕괴 때문에 손상의 스테이 시스에서 발생할 수 있습니다. Virchow에 의해 Virchow의 3 인조로 알려져 있다.
대부분의 경우에서 그것은 인간의 DVT 샘플을 얻을 수, 때문에 연구원은 DVT의 실험 동물 모델을 개발 했습니다. 쥐2, 마우스3, 토끼4, 돼지5,6개 및 비 인간 영장류7 을 포함 하 여 여러 동물 사용 되었습니다. 쥐 유전자 변형 될 수 있으며 DVT를 공부 하는 가장 자주 사용된 동물. 모든 동물에서의 자발적인 DVT 하지 쥐에서 관찰 됩니다. 따라서, 정 맥 벽의 물리적 또는 화학적 변경 마우스에서 혈전 증을 만드는 데 사용 됩니다. 우리는 열 등 한 베 나 정 맥 (IVC) 마우스8,,910의 혈전 증을 유발 하 이전 제 2 철 염화 모델을 이용 했다. 이 분 이내 폐색 혈전을 안정적으로 생산의 장점이 고 급성 DVT 동안 항 응고 제와 항 혈소판 약물의 역할을 조사 하는 데 사용할 수 있습니다. 그러나, 그것은 터미널 절차입니다. 따라서, 공부 하 고 급성과 만성 DVT, 스테이 시스 모델 더 적당 하다. 이 모델에서는 혈전 형성 IVC, DVT 개발 Virchow의 3 인조의 요소 중 하나에서 혈액 흐름의 완전 한 중단에 의해 유도 된다. DVT 형성 FeCl3 모델11에 비해 이점이 해상도 공부 하 고이 모델을 사용할 수 있습니다.
혈전 형성 및 해상도 마이크로 이미징-고주파 초음파 시스템12을 사용 하 여 시간이 지남에 따라 비-침략 적 방법을 개발 했습니다. 우리는 이전 측정 초음파에 의해 정 맥 혈전 증의 혈전 병 적 얻은 호의 상관을 증명 하고있다. 우리가 측정 초음파 상관 혈전 무게와 혈전 영역 histochemistry9,10정량으로 얻은 두 후속 연구에서 확인 했습니다. 더 중요 한 것은, 우리는 높은 주파수 초음파 쥐12에서 깊은 정 맥 혈전의 형성을 모니터링 하는 데 사용할 수 있습니다 보여주 있다. 그것은 또한 비-침략 적 방법으로 혈전 해상도 척도를 사용할 수 있습니다.
여기, 우리는 스테이 시스 유도 혈전 증 마우스 모델 및 어떻게 혈전 형성을 모니터링할 수 있습니다 비 접촉 고주파 초음파를 사용 하 여 시간이 지남에 사용 하 여 혈전 형성을 허용 하는 프로토콜을 설명 합니다.
Protocol
Representative Results
Discussion
스테이 시스 모델을 사용 하 여 성공적인 정 맥 혈전 형성에 대 한 몇 가지 중요 한 단계가 있습니다. 유도 정 맥 혈전 증의 열 등 한 베 나 정 맥과 대동맥 주변 지방의 축적으로 인해 오래 된 쥐에 있는 더 많은 도전 이다. 이상적으로,이 절차를 진행 하는 쥐 8-10 주 오래 된 해야 합니다. 신중 하지 무딘 해 부 및 합자는 IVC 내 피 손상을 유도를 취해야 한다. 또한, 수술 후 적어도 30 분 동안 34 ° C 배?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
이 작품은 심장과 스트로크 캐나다 재단에서 교부 금에 의해 그리고에 모리스와 벨라 Fainman 가족 기초에 의해 지원 되었다. 저자에 대 한 그녀의 기술 VEVO770 초음파 이미징 시스템 베로 미를 감사 하 고 싶습니다.
Materials
| 6-0 perma-hand silk suture | Ethicon | 706G | |
| Surgical Scissors | Fine Science Tools | 20830-00 | |
| Suture tying forceps | Fine Science Tools | 20830-00 | |
| blunt forceps (straight and curved) | Fine Science Tools | 20830-00 | |
| Needle Driver | Fine Science Tools | 13002-10 | |
| Moria Spring Scissors | Fine Science Tools | 15396-00 | |
| 1ml syringes | BD Biosciences | ||
| 26G needles | Becton Dickinson & Co. | ||
| VEVO 770 High Resolution Imaging System | Visualsonics | No longer sold | |
| SR Buprenorphine | ZooPharm | Given to LDI by Vet | |
| Surgery Microscope | Leica | Leica M651 | |
| Systan eye oinment | Alcon | 288/28062-0 | |
| 2×2 sterile Gauze | CDMV | #104148 | |
| Cotton Tip Applicators | from JGH | ||
| Transpore hypoallergenic surgical tape | CDMV | #7411 | |
| Ultrasound gel (Aquasonic-100) | Dufort & Lavigne | #AKEN4061 | |
| Incubator | From JGH | ||
| Isoflurane | Dispomed | ||
| Anesthetic chamber,hoses, and adminstration equipment | Dispomed | ||
| Hair remover | Nair | ||
| Water heated hard pad | Braintree Scientific, Inc. | #HHP-2 | |
| Gaymar heater water pump TP500 | MATVET Inc. | #R-500305 | |
| Infra-red heating lamp | electrimat inc. | #1R175R-PAR | |
| Mouse rectal temperature prope | emkaTECHNOLOGIES | ||
| Sterile water | From JGH |
References
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