פקקת ורידים עמוקה שנגזרות Stasis בעכברים המנוטרת על-ידי בדיקת אולטרה סאונד בתדירות גבוהה
Summary
בפרוטוקול הנוכחי מתאר את השלבים להשגת פקקת ורידים באמצעות מודל של ההקפאה. בנוסף, אנו משתמשים בשיטה לא פולשנית למדוד כגון היווצרות והרזולוציה לאורך זמן.
Abstract
פקקת ורידים היא מצב נפוץ המשפיעים על 1-2% של האוכלוסייה, עם שכיחות שנתי של 1 ב 500. פקקת ורידים יכולה להוביל למוות באמצעות תסחיף ריאתי או תוצאות התסמונת הפוסט-קדחת, המאופיינת על ידי כאב כרוני, נפיחות, כיבת, או כרונית יתר לחץ דם ריאתי וכתוצאה מכך משמעותיות כרוניות בדרכי הנשימה פשרה. זו היא המחלה הנפוצה ביותר לב וכלי דם לאחר אוטם שריר הלב, שבץ איסכמי והיא אתגר קליני עבור כל התחומים הרפואיים, כמו זה יכול לסבך את הקורס של הפרעות אחרות כגון סרטן, מחלות מערכתיות, ניתוח נזק גדול.
גרסאות ניסיוניות נחוצים לחקור מנגנונים אלה. המודל ההקפאה גורם עקבי כגון גודל וכמות לכימות של כגון. עם זאת, יש צורך בשיטתיות מאתרים ומפסיקים בצד סניפים של הכלילי התחתון כדי למנוע השתנות במידות כגון כל פרשנות הנתונים שגויים. פיתחנו שיטה לא פולשנית כדי למדוד את גודל כגון באמצעות בדיקת אולטרה סאונד. בעזרת טכניקה זו, שנוכל להעריך כגון פיתוח והרזולוציה לאורך זמן של אותה חיה. גישה זו מגבילה את מספר עכברים הנדרש על כימות של פקקת ורידים בקנה אחד עם עקרון ההחלפה, הפחתת ו עידון של בעלי חיים במחקר. הראו כי משקל כגון וניתוח היסטולוגית של כגון גודל לתאם עם מדידה שהושג עם בדיקת אולטרה סאונד. לפיכך, המחקר הנוכחי מתאר כיצד לגרום פקקת ורידים עמוקה בעכברים באמצעות מודל stasis הכלילי וכיצד לפקח עליו באמצעות אולטרסאונד בתדירות גבוהה.
Introduction
ורידי פקיקי (VTE), אשר מורכב של פקקת ורידים עמוקה (DVT), תסחיף ריאתי, הוא הגורם המוביל השלישי המוות לב וכלי דם לאחר אוטם שריר הלב ושבץ. . זה מצב שכיח המשפיעים על 1-2% של האוכלוסייה, עם שכיחות שנתי של 1 ב 5001… VTE יכול להוביל: 1) מוות תסחיף ריאתי; 2) תסמונת פוסט-קדחת, המאופיינת על ידי כאב כרוני, נפיחות, כיבי; או 3) לחץ דם ריאתי כרוני וכתוצאה מכך משמעותי כרונית פשרה בדרכי הנשימה. VTE היא מחלה רב העצרת, העלולות לנבוע ההקפאה של זרימת הדם, נזק כלי הדם ו/או hypercoagulable הברית עקב הפרעה של איזון בין את הקרישה ומערכות fibrinolytic, כפי שתיארנו זה לפני מאה שנה מאת וירכו וידוע בשם וירשאו.
כי ברוב המקרים זה אפשרי להשיג דגימות DVT אנושי, חוקרים פיתחו מודלים חייתיים ניסיוני של DVT. מספר בעלי חיים כולל עכברוש2, עכבר3, ארנב4, חזיר5, הכלב6ואנושיות הפרימטים7 שימשו. עכברים יכול להיות שונה גנטית, החיה שנמצאות בשימוש תכוף ביותר ללמוד DVT. עם זאת, כמו כל בעלי החיים, DVT ספונטנית הוא לא ציין בעכברים. לפיכך, שינויים פיזי או כימי החומה וריד משמשות ליצירת פקקת בעכברים. בעבר השתמשנו המודל הברזל ותחמוצת כלוריד לזירוז פקקת ב הכלילי התחתון (IVC) של עכברים8,9,10. מודל זה יש את היתרון של אמין בהפקת thrombi ריטלין תוך דקות והוא יכול לשמש כדי לחקור את התפקיד של אנטי מקריש ותרופות נגד טסיות בתקופת DVT חריפה. עם זאת, זה הליך מסוף. לפיכך, במחקר DVT אקוטי וכרוני, המודל stasis הוא מתאים יותר. במודל זה, כגון היווצרות הנגרמת על ידי ההפרעה מלאה של זרימת הדם ב- IVC, אחד הגורמים בטריאד וירשאו להתפתחות DVT. מודל זה ניתן ללמוד היווצרות DVT ו ברזולוציה, וזה יתרון לעומת ה3 דגם של FeCl11.
פיתחנו שיטה לא פולשנית לעקוב אחר כגון היווצרות והרזולוציה לאורך זמן באמצעות מערכת מיקרו-הדמיה סאונד בתדירות גבוהה12. בעבר הראו כי מדידה של פקקת ורידים על ידי אולטרסאונד להרכב בחיוב thrombi מתקבל באופן פתולוגי. יש לנו אישר ב שני מחקרים מאוחרים יותר כי מדידות שהושג עם אולטרסאונד לתאם עם כגון משקל, כגון אזור לכמת על ידי9,להסטולוגיה10. יותר חשוב, יש הראנו שסאונד בתדירות גבוהה הזה יכול לשמש כדי לפקח על היווצרות של פקקת ורידים עמוקה עכברים12. זה עשוי לשמש גם לכמת כגון רזולוציה בצורה לא פולשנית.
כאן נתאר את פרוטוקול המאפשר כגון היווצרות באמצעות המודל העכבר stasis-induced פקקת, כיצד כגון היווצרות ניתן לנטר בצורה לא-פולשנית לאורך זמן באמצעות אולטרסאונד בתדירות גבוהה.
Protocol
Representative Results
Discussion
ישנם מספר צעדים קריטיים על היווצרות כגון ורידים מוצלח באמצעות מודל ההקפאה. אינדוקציה של פקקת ורידים הוא יותר מאתגרת בעכברים ישנים בשל הצטברות שומן סביב הכלילי התחתון של אבי העורקים. באופן אידיאלי, עכברים לעבור הליך זה צריך להיות 8 – בן-10 שבועות. נהדר להקפיד שלא לגרום נזק אנדותל IVC במהלך עמום…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
עבודה זו נתמכה על ידי מענק של הלב ועל קו הבסיס של קנדה על ידי מוריס וקרן משפחת בלה Fainman. המחברים רוצה להודות ורוניק מישו עזרה טכנית עם מערכת הדמיה של סאונד VEVO770.
Materials
| 6-0 perma-hand silk suture | Ethicon | 706G | |
| Surgical Scissors | Fine Science Tools | 20830-00 | |
| Suture tying forceps | Fine Science Tools | 20830-00 | |
| blunt forceps (straight and curved) | Fine Science Tools | 20830-00 | |
| Needle Driver | Fine Science Tools | 13002-10 | |
| Moria Spring Scissors | Fine Science Tools | 15396-00 | |
| 1ml syringes | BD Biosciences | ||
| 26G needles | Becton Dickinson & Co. | ||
| VEVO 770 High Resolution Imaging System | Visualsonics | No longer sold | |
| SR Buprenorphine | ZooPharm | Given to LDI by Vet | |
| Surgery Microscope | Leica | Leica M651 | |
| Systan eye oinment | Alcon | 288/28062-0 | |
| 2×2 sterile Gauze | CDMV | #104148 | |
| Cotton Tip Applicators | from JGH | ||
| Transpore hypoallergenic surgical tape | CDMV | #7411 | |
| Ultrasound gel (Aquasonic-100) | Dufort & Lavigne | #AKEN4061 | |
| Incubator | From JGH | ||
| Isoflurane | Dispomed | ||
| Anesthetic chamber,hoses, and adminstration equipment | Dispomed | ||
| Hair remover | Nair | ||
| Water heated hard pad | Braintree Scientific, Inc. | #HHP-2 | |
| Gaymar heater water pump TP500 | MATVET Inc. | #R-500305 | |
| Infra-red heating lamp | electrimat inc. | #1R175R-PAR | |
| Mouse rectal temperature prope | emkaTECHNOLOGIES | ||
| Sterile water | From JGH |
References
- Fowkes, F. J., Price, J. F., Fowkes, F. G. Incidence of diagnosed deep vein thrombosis in the general population: systematic review. Eur J Vasc Endovasc Surg. 25 (1), 1-5 (2003).
- McGuinness, C. L., et al. Recruitment of labelled monocytes by experimental venous thrombi. Thromb Haemost. 85 (6), 1018-1024 (2001).
- Singh, I., et al. Failure of thrombus to resolve in urokinase-type plasminogen activator gene-knockout mice: rescue by normal bone marrow-derived cells. Circulation. 107 (6), 869-875 (2003).
- Itoh, K., Ieko, M., Hiraguchi, E., Kitayama, H., Tsukamoto, E. In vivo kinetics of 99mTc labeled recombinant tissue plasminogen activator in rabbits. Ann Nucl Med. 8 (3), 193-199 (1994).
- Kang, C., Bonneau, M., Brouland, J. P., Bal dit Sollier, C., Drouet, L. In vivo pig models of venous thrombosis mimicking human disease. Thromb Haemost. 89 (2), 256-263 (2003).
- Knight, L. C., Baidoo, K. E., Romano, J. E., Gabriel, J. L., Maurer, A. H. Imaging pulmonary emboli and deep venous thrombi with 99mTc-bitistatin, a platelet-binding polypeptide from viper venom. J Nucl Med. 41 (6), 1056-1064 (2000).
- Wakefield, T. W., et al. Venous thrombosis prophylaxis by inflammatory inhibition without anticoagulation therapy. J Vasc Surg. 31 (2), 309-324 (2000).
- Robins, R. S., et al. Vascular Gas6 contributes to thrombogenesis and promotes tissue factor up-regulation after vessel injury in mice. Blood. 121 (4), 692-699 (2013).
- Aghourian, M. N., Lemarie, C. A., Bertin, F. R., Blostein, M. D. Prostaglandin E synthase is upregulated by Gas6 during cancer-induced venous thrombosis. Blood. 127 (6), 769-777 (2016).
- Laurance, S., et al. Gas6 (Growth Arrest-Specific 6) Promotes Inflammatory (CCR2hiCX3CR1lo) Monocyte Recruitment in Venous Thrombosis. Arterioscler Thromb Vasc Biol. , (2017).
- Diaz, J. A., et al. Critical review of mouse models of venous thrombosis. Arterioscler Thromb Vasc Biol. 32 (3), 556-562 (2012).
- Aghourian, M. N., Lemarie, C. A., Blostein, M. D. In vivo monitoring of venous thrombosis in mice. J Thromb Haemost. 10 (3), 447-452 (2012).
- Brandt, M., et al. Deep vein thrombus formation induced by flow reduction in mice is determined by venous side branches. Clin Hemorheol Microcirc. 56 (2), 145-152 (2014).
- Diaz, J. A., Farris, D. M., Wrobleski, S. K., Myers, D. D., Wakefield, T. W. Inferior vena cava branch variations in C57BL/6 mice have an impact on thrombus size in an IVC ligation (stasis) model. J Thromb Haemost. 13 (4), 660-664 (2015).
- Luther, N., et al. Innate Effector-Memory T Cell Activation Regulates Post-Thrombotic Vein Wall Inflammation and Thrombus Resolution. Circ Res. , (2016).
- Subramaniam, S., et al. Distinct contributions of complement factors to platelet activation and fibrin formation in venous thrombus development. Blood. 129 (16), 2291-2302 (2017).
- Diaz, J. A., et al. Thrombogenesis with continuous blood flow in the inferior vena cava. A novel mouse model. Thromb Haemost. 104 (2), 366-375 (2010).
