Derin Ven Trombozu Staz farelerde yüksek frekans Ultrasonografi tarafından izlenen tarafından indüklenen
Summary
Mevcut Protokolü Venöz tromboz Staz modelini kullanarak elde etmek için gereken adımları açıklar. Buna ek olarak, biz trombüsü oluşumu ve çözünürlük zamanla ölçmek için non-invaziv bir yöntem kullanarak.
Abstract
Venöz tromboz nüfusun % 1-2 1 500 yıllık insidansı ile etkileyen yaygın bir durumdur. Venöz tromboz, pulmoner emboli veya sonuçlar sonrası trombotik sendromu, kronik bacak ağrı, şişlik ve ülserasyon ile karakterize veya önemli kronik kaynaklanan Kronik Pulmoner Hipertansiyon ölüme açabilir solunum uzlaşma. Bu en yaygın kardiyovasküler hastalık akut miyokard infarktüsü ve iskemik inme sonrası ve kanser, sistemik hastalığı, cerrahi ve büyük travma gibi diğer bozuklukları seyri karmaşık hale getirebilir gibi tüm tıp disiplinleri için klinik bir mücadeledir.
Deneysel modeller bu mekanizmaların çalışması gereklidir. Staz modeli tutarlı trombüsü boyutu ve trombüsü ölçülebilir miktarda neden olmaktadır. Ancak, sistematik olarak ligate yan dalları inferior vena kava trombüsü boyutları değişkenlik ve herhangi bir hatalı veri yorum önlemek için gereklidir. Ultrasonografi kullanarak trombüsü boyutunu ölçmek için non-invaziv bir yöntem geliştirdik. Bu tekniği kullanarak, biz trombüsü geliştirme ve çözünürlük zaman içinde aynı hayvan değerlendirebilir. Bu yaklaşım Venöz tromboz değiştirme, azaltma ve araştırma hayvanlarda arıtma prensibi ile tutarlı miktar için gerekli fare sayısını sınırlar. Ultrasonografi ile elde trombüsü ağırlık ve histolojik trombüsü boyut ilişkili ile ölçüm analizi göstermiştir. Bu nedenle, çalışmada Derin Ven Trombozu inferior vena kava Staz modelini kullanarak farelerde ikna etmek ve yüksek frekans ultrason kullanarak izlemek anlatılmaktadır.
Introduction
Derin Venöz trombozu (DVT) ve pulmoner emboli oluşur, Venöz tromboemboli (VTE), miyokard enfarktüsü ve inme sonra kardiyovasküler ölüm üçüncü önde gelen nedenidir. Nüfusun % 1-2 1 5001yıllık insidansı ile etkileyen yaygın bir durumdur. Download VTE için yol açabilir: 1) ölümün ötesine pulmoner emboli; 2) sonrası trombotik sendromu, kronik bacak ağrı, şişlik ve ülserasyon ile karakterize; ya da 3) önemli Kronik solunum uzlaşma içinde kaynaklanan Kronik Pulmoner Hipertansiyon. Download VTE çok faktöriyel bir hastalıktır ve yüz yıl önce açıklandığı Staz kan akımı, gemi duvarları ve/veya pıhtılaşma Birleşik koagülasyon ve fibrinolitik sistem arasındaki dengeyi bir bozulma nedeniyle zarar neden olabilir Virchow tarafından ve Virchow’ın Üçlü bilinir.
Çoğu zaman insan DVT örnekleri elde edebilmek mümkün değildir çünkü, araştırmacılar DVT deneysel hayvan modelleri geliştirdi. Sıçan2, fare3, tavşan4, domuz5, köpek6ve insan dışı primat7 de dahil olmak üzere çeşitli hayvanlar kullanılmıştır. Fare genetiği değiştirilmiş ve DVT eğitim için en sık kullanılan hayvan vardır. Ancak, Bütün hayvanlar gibi farelerde spontan DVT gözlenen değil. Böylece, fiziksel veya kimyasal değişiklikler damar duvarının trombozu farelerde oluşturmak için kullanılır. Biz daha önce biatriyal Trombus fareler8,9,10inferior vena kava (IVC) ikna etmek için ferrik klorid modeli kullandık. Bu model güvenilir birkaç dakika içinde tıkayıcı olu_umu üreten avantajı ve anti-koagulant ve anti-trombosit uyuşturucu rol sırasında akut DVT araştırmak için kullanılır. Ancak, bu terminal bir işlemdir. Böylece, akut ve kronik DVT çalışmaya, staz modeli daha uygundur. Bu modelde, trombüsü oluşumu IVC Virchow’ın Üçlü DVT gelişimi için faktörlerin kan akımı tam kesintiye indüklenen. Bu model DVT oluşumu ve FeCl3 model11‘ e göre bir avantajdır çözünürlük çalışma için kullanılabilir.
Trombüsü oluşumu ve çözünürlük bir mikro-görüntüleme yüksek frekanslı ultrason sistemi12kullanarak zaman içinde takip etmek non-invaziv bir yöntem geliştirdik. Biz daha önce ultrason tarafından Venöz tromboz ölçümü olumlu patolojik olarak elde edilen olu_umu ile ilişkili olan göstermiştir. Biz iki sonraki çalışmalarda ölçümleri ultrason ilişkili trombüsü ağırlık ve histochemistry9,10tarafından sayısal trombüsü alanı ile elde edilen doğruladı. Daha da önemlisi, yüksek frekans ultrason fareler12derin Venöz tromboz oluşumunu izlemek için kullanılan göstermiştir. Trombüsü çözünürlük non-invaziv bir şekilde ölçmek için de kullanılabilir.
Burada, staz kaynaklı trombozu fare modeli ve nasıl trombüsü formasyonu olmayan invaziv yüksek frekans ultrason kullanarak zaman içinde izlenebilir kullanarak trombüsü oluşumu izin iletişim kuralı anlatacağım.
Protocol
Representative Results
Discussion
Staz modelini kullanarak başarılı Venöz trombüsü oluşumu için birkaç önemli adım vardır. Ven Trombozu indüksiyon daha inferior vena kava ve aort damarı çevreleyen yağ birikimi nedeniyle eski farelerde zordur. İdeal olarak, bu yordamı geçiren fareler 8 – 10 hafta çocuk olmalıdır. Büyük değil ikna etmek IVC endotel hasarı künt diseksiyon ve bağ sırasında için özen gösterilmelidir. Buna ek olarak, bu ameliyattan sonra en az 30 dakika 34 ° C kuluçka makinesine hayvan tutmak için ve yalnız…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Bu eser kalp ve inme Vakfı Kanada bir hibe ve Morris ve Bella Fainman Aile Vakfı tarafından desteklenmiştir. Yazarlar Veronique Michaud VEVO770 ultrason görüntüleme sistemi ile onun teknik yardım için teşekkür etmek istiyorum.
Materials
| 6-0 perma-hand silk suture | Ethicon | 706G | |
| Surgical Scissors | Fine Science Tools | 20830-00 | |
| Suture tying forceps | Fine Science Tools | 20830-00 | |
| blunt forceps (straight and curved) | Fine Science Tools | 20830-00 | |
| Needle Driver | Fine Science Tools | 13002-10 | |
| Moria Spring Scissors | Fine Science Tools | 15396-00 | |
| 1ml syringes | BD Biosciences | ||
| 26G needles | Becton Dickinson & Co. | ||
| VEVO 770 High Resolution Imaging System | Visualsonics | No longer sold | |
| SR Buprenorphine | ZooPharm | Given to LDI by Vet | |
| Surgery Microscope | Leica | Leica M651 | |
| Systan eye oinment | Alcon | 288/28062-0 | |
| 2×2 sterile Gauze | CDMV | #104148 | |
| Cotton Tip Applicators | from JGH | ||
| Transpore hypoallergenic surgical tape | CDMV | #7411 | |
| Ultrasound gel (Aquasonic-100) | Dufort & Lavigne | #AKEN4061 | |
| Incubator | From JGH | ||
| Isoflurane | Dispomed | ||
| Anesthetic chamber,hoses, and adminstration equipment | Dispomed | ||
| Hair remover | Nair | ||
| Water heated hard pad | Braintree Scientific, Inc. | #HHP-2 | |
| Gaymar heater water pump TP500 | MATVET Inc. | #R-500305 | |
| Infra-red heating lamp | electrimat inc. | #1R175R-PAR | |
| Mouse rectal temperature prope | emkaTECHNOLOGIES | ||
| Sterile water | From JGH |
References
- Fowkes, F. J., Price, J. F., Fowkes, F. G. Incidence of diagnosed deep vein thrombosis in the general population: systematic review. Eur J Vasc Endovasc Surg. 25 (1), 1-5 (2003).
- McGuinness, C. L., et al. Recruitment of labelled monocytes by experimental venous thrombi. Thromb Haemost. 85 (6), 1018-1024 (2001).
- Singh, I., et al. Failure of thrombus to resolve in urokinase-type plasminogen activator gene-knockout mice: rescue by normal bone marrow-derived cells. Circulation. 107 (6), 869-875 (2003).
- Itoh, K., Ieko, M., Hiraguchi, E., Kitayama, H., Tsukamoto, E. In vivo kinetics of 99mTc labeled recombinant tissue plasminogen activator in rabbits. Ann Nucl Med. 8 (3), 193-199 (1994).
- Kang, C., Bonneau, M., Brouland, J. P., Bal dit Sollier, C., Drouet, L. In vivo pig models of venous thrombosis mimicking human disease. Thromb Haemost. 89 (2), 256-263 (2003).
- Knight, L. C., Baidoo, K. E., Romano, J. E., Gabriel, J. L., Maurer, A. H. Imaging pulmonary emboli and deep venous thrombi with 99mTc-bitistatin, a platelet-binding polypeptide from viper venom. J Nucl Med. 41 (6), 1056-1064 (2000).
- Wakefield, T. W., et al. Venous thrombosis prophylaxis by inflammatory inhibition without anticoagulation therapy. J Vasc Surg. 31 (2), 309-324 (2000).
- Robins, R. S., et al. Vascular Gas6 contributes to thrombogenesis and promotes tissue factor up-regulation after vessel injury in mice. Blood. 121 (4), 692-699 (2013).
- Aghourian, M. N., Lemarie, C. A., Bertin, F. R., Blostein, M. D. Prostaglandin E synthase is upregulated by Gas6 during cancer-induced venous thrombosis. Blood. 127 (6), 769-777 (2016).
- Laurance, S., et al. Gas6 (Growth Arrest-Specific 6) Promotes Inflammatory (CCR2hiCX3CR1lo) Monocyte Recruitment in Venous Thrombosis. Arterioscler Thromb Vasc Biol. , (2017).
- Diaz, J. A., et al. Critical review of mouse models of venous thrombosis. Arterioscler Thromb Vasc Biol. 32 (3), 556-562 (2012).
- Aghourian, M. N., Lemarie, C. A., Blostein, M. D. In vivo monitoring of venous thrombosis in mice. J Thromb Haemost. 10 (3), 447-452 (2012).
- Brandt, M., et al. Deep vein thrombus formation induced by flow reduction in mice is determined by venous side branches. Clin Hemorheol Microcirc. 56 (2), 145-152 (2014).
- Diaz, J. A., Farris, D. M., Wrobleski, S. K., Myers, D. D., Wakefield, T. W. Inferior vena cava branch variations in C57BL/6 mice have an impact on thrombus size in an IVC ligation (stasis) model. J Thromb Haemost. 13 (4), 660-664 (2015).
- Luther, N., et al. Innate Effector-Memory T Cell Activation Regulates Post-Thrombotic Vein Wall Inflammation and Thrombus Resolution. Circ Res. , (2016).
- Subramaniam, S., et al. Distinct contributions of complement factors to platelet activation and fibrin formation in venous thrombus development. Blood. 129 (16), 2291-2302 (2017).
- Diaz, J. A., et al. Thrombogenesis with continuous blood flow in the inferior vena cava. A novel mouse model. Thromb Haemost. 104 (2), 366-375 (2010).
