Journal
/
Biochemistry
/
Strategisk screening og karakterisering af Visual GPCR-mini-G Protein Signaling Complex for vellykket krystallisering
JoVE Journal
Biochemistry
This content is Free Access.
JoVE Journal Biochemistry
Strategic Screening and Characterization of the Visual GPCR-mini-G Protein Signaling Complex for Successful Crystallization

Strategisk screening og karakterisering af Visual GPCR-mini-G Protein Signaling Complex for vellykket krystallisering

DOI:
10.3791/60747-v

•

09:19 min

•

March 16, 2020

•

, , , , , ,
1Laboratory of Biomolecular Research,Paul Scherrer Institute, 2Department of Biology,ETH Zürich, 3Center for Radiopharmaceutical Sciences,Paul Scherrer Institute, 4Laboratory of Molecular Biology,Medical Research Council

Chapters

  • 00:04Introduction
  • 00:45Cell Membrane Solubilization and Protein Extraction
  • 03:53UV-VIS Spectroscopy
  • 04:33Automated Size-Exclusion Chromatography of Rhodopsin and Rhodopsin Mini-Go Complex
  • 06:04Deglycosylation
  • 06:44Results: UV-VIS Spectroscopy, SEC, and SDS-PAGE
  • 08:34Conclusion

Summary

Automatic Translation

Automatic Translation

Denne rapport beskriver screening af forskellige rengøringsmidler til forberedelse af den visuelle GPCR, rhodopsin, og dens kompleks med mini-Go. Biokemiske metoder, der karakteriserer kompleksets kvalitet på forskellige stadier under rensningen, påvises. Denne protokol kan generaliseres til andre membran protein komplekser for deres fremtidige strukturelle undersøgelser.

Tags

Keywords: GPCRMini-G ProteinSignal TransductionMembrane Protein ComplexDetergent ScreeningCrystallizationHEK293 CellsAffinity Purification9-cis RetinalBuffer Exchange

Article

Embed

ADD TO PLAYLIST

Usage Statistics

Related Videos

check_url/60747?article_type=v

Protein Complex Affinity Capture fra Cryomilled pattedyrsceller
check_url/60747?article_type=v

Måling af G-proteinkoblet receptorreceptor via radio-mærket GTP-binding
check_url/60747?article_type=v

Biokemiske og strukturel karakterisering af kulhydrat Transport substrat-bindende-protein SP0092
check_url/60747?article_type=v

Voksende Protein krystaller med forskellige dimensioner ved hjælp af automatiseret krystallisering kombineret med In Situ dynamisk lysspredning
check_url/60747?article_type=v

Ionbytning kromatografi (IEX) koblet til multi-vinkel lysspredning (MALS) for Protein adskillelse og karakterisering
check_url/60747?article_type=v

Derivatization af Protein Krystaller med I3C ved hjælp af Random Microseed Matrix Screening
check_url/60747?article_type=v

Krystallisering og strukturel bestemmelse af et enzym:Substratkompleks ved seriel krystallografi i en alsidig mikrofluidisk chip
check_url/60747?article_type=v

Måling sammensætning af CD95 Death-inducerende signalering kompleks og behandling af Procaspase-8 i dette kompleks
check_url/60747?article_type=v

High-throughput proteinkrystallisering via mikrodialyse
check_url/60747?article_type=v

High-throughput screening for at opnå krystal hits til proteinkrystallografi

Read Article