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बड़े पैमाने पर परमाणु इंटरैक्टूम प्रोफाइलिंग के लिए लेबल-फ्री इम्यूनोप्रिसिप्रिशन मास स्पेक्ट्रोमेट्री वर्कफ्लो
JoVE Journal
Biochemistry
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JoVE Journal Biochemistry
Label-Free Immunoprecipitation Mass Spectrometry Workflow for Large-scale Nuclear Interactome Profiling
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बड़े पैमाने पर परमाणु इंटरैक्टूम प्रोफाइलिंग के लिए लेबल-फ्री इम्यूनोप्रिसिप्रिशन मास स्पेक्ट्रोमेट्री वर्कफ्लो

DOI:
10.3791/60432-v

•

11:19 min

•

November 17, 2019

•

, ,
1Department of Molecular, Cellular and Developmental Biology,University of Colorado, 2Linda Crnic Institute for Down Syndrome,University of Colorado School of Medicine

Chapters

  • 00:04Title
  • 01:07Preparation of Nuclear Extract
  • 03:45Immunoprecipitation of Endogenous Nuclear Bait Protein
  • 07:01Sample Preparation and LC/MS System Suitability
  • 09:09Results: A Single-bait Single-antibody IP-MS Experiment
  • 10:25Conclusion

Summary

Automatic Translation

Automatic Translation

वर्णित ब्याज और लेबल मुक्त द्रव्यमान स्पेक्ट्रोमेट्री के दिए गए प्रोटीन के इम्यूनोफिनिटी संवर्धन का उपयोग करके परमाणु उपसे्युलर अंश से प्रोटीन इंटरैक्शन भागीदारों की पहचान करने के लिए एक प्रोटेओमिक्स वर्कफ्लो है। कार्यप्रवाह में उपसेलर आंशिकता, इम्यूनोप्रिसिपेटेशन, फिल्टर एडेड नमूना तैयार करना, ऑफलाइन सफाई, मास स्पेक्ट्रोमेट्री और डाउनस्ट्रीम बायोइन्फॉर्मेटिक्स पाइपलाइन शामिल है।

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Label-freeImmunoprecipitationMass SpectrometryNuclear InteractomeProtein-protein InteractionsSubcellular FractionationAffinity PurificationProteomics WorkflowCell LysisNuclear LysateDounce Homogenization

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