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Purification de protéine anaérobie et l’analyse cinétique via la sonde à oxygène pour l’étude de l’Inhibition et l’activité DesB Dioxygenase
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October 03, 2018
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Nous présentons ici un protocole pour la purification de protéine anaérobie, la concentration de protéines anaérobie et ultérieure caractérisation cinétique à l’aide d’un système d’électrodes de l’oxygène. La méthode est illustrée à l’aide de l’enzyme DesB, une enzyme dioxygénase qui est plus stable et plus active lorsque purifié et stockées dans un environnement anaérobie.
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AnaerobicProtein PurificationKinetic AnalysisOxygen ElectrodeDesB DioxygenaseEnzyme ActivityInhibitionInorganic BiochemistryOxygen-sensitive MetalsProtein ExpressionCell PelletAmylose ColumnLysozymeHigh-pressure HomogenizationNitrogen GasGlove BoxAmylose Column BufferElution BufferFerrous Ammonium SulfateDithiothreitol
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Uchendu, S. N., Rafalowski, A., Cohn, E. F., Davoren, L. W., Taylor, E. A. Anaerobic Protein Purification and Kinetic Analysis via Oxygen Electrode for Studying DesB Dioxygenase Activity and Inhibition. J. Vis. Exp. (140), e58307, doi:10.3791/58307 (2018).
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