This content is Free Access.
Chapters
- 00:05Title
- 00:48Digestion of DNA with MNase and Separation of DNA Fragments by PAGE
- 03:05Isolation of DNA Fragments from PAGE Gels and Linker Generation
- 04:26End Repair of Gel-purified Fragments and Linker Ligation
- 05:32Size Selection and Assembly of Vector-insert Construct
- 06:18Electroporation of TG1 Electrocompetent E. coli Cells
- 08:38Results: a gRNA Library can be Generated from and Target DNA
- 09:56Conclusion
שיטות ליצירת ספריות gRNA בקנה מידה גדול צריך להיות פשוט, יעיל וחסכוני. אנו מתארים פרוטוקול לייצור של ספריות gRNA מבוסס על עיכול אנזימטי של יעד ה-DNA. שיטה זו, CORALINA (ספריית gRNA מקיף הדור באמצעות פעילות נוקלאז מבוקר) מציג אלטרנטיבה סינתזה יקר oligonucleotide מותאם אישית.
