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Suivi des particules sensibles à la masse pour caractériser la dynamique des macromolécules associées à la membrane
JoVE Journal
Biyokimya
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Mass-Sensitive Particle Tracking to Characterize Membrane-Associated Macromolecule Dynamics
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Suivi des particules sensibles à la masse pour caractériser la dynamique des macromolécules associées à la membrane

DOI:
10.3791/63583-v

•

13:30 min

•

February 18, 2022

•

, , ,
1Department of Cellular and Molecular Biophysics,Max Planck Institute of Biochemistry, 2Fizik Bölümü,Technical University Munich, 3Department of Cellular Physiology, Biomedical Center (BMC),Ludwig-Maximilians-Universität München

Bölümler

  • 00:05Introduction
  • 00:43Cleaning of Microscope Slides
  • 01:48Assembly of Flow Chambers
  • 02:41Supported Lipid Bilayer (SLB) Formation
  • 03:31Imaging
  • 04:31Data Analysis
  • 10:25Results: Native and Ratiometric View of Exemplary Surfaces
  • 11:01Results: Calibration of the Mass-to-Contrast Relation for MSPT Measurements
  • 12:15Results: Deciphering Oligomer States of Membrane-Associated Proteins
  • 12:57Conclusion

Özet

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Ce protocole décrit une approche de traitement d’image et de suivi d’une seule particule basée sur iSCAT qui permet d’étudier simultanément la masse moléculaire et le comportement diffusif des macromolécules interagissant avec les membranes lipidiques. Des instructions étape par étape pour la préparation des échantillons, la conversion masse-contraste, l’acquisition de films et le post-traitement sont fournies ainsi que des instructions pour éviter les pièges potentiels.

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Mass-sensitive Particle TrackingMembrane-associated MacromoleculesLabel-freeOligomeric StatesLipid MembranesBiomolecule DynamicsLigand-induced Receptor ComplexesSmall Unilamellar VesiclesFlow ChamberMass Photometer

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