本方案描述了 通过 立体定位框架两点注射溶血磷脂酰胆碱以在小鼠中产生稳定且可重复的脱髓鞘模型。
受体介导的溶血磷脂信号传导有助于各种神经系统疾病的病理生理学,尤其是多发性硬化症(MS)。溶血磷脂酰胆碱(LPC)是一种与炎症相关的内源性溶血磷脂,可诱发快速损伤,对髓鞘脂质有毒性,导致局灶性脱髓鞘。本文给出了立体定向两点LPC注射的详细方案,可直接导致严重脱髓鞘,并通过外科手术在小鼠中快速稳定地复制实验性脱髓鞘损伤。因此,该模型与脱髓鞘疾病,特别是MS高度相关,并且可以促进相关的临床相关研究的进展。此外,使用免疫荧光和Luxol快速蓝色染色方法来描述注射LPC的小鼠胼胝体中脱髓鞘的时间过程。此外,该行为方法用于评估建模后小鼠的认知功能。总体而言, 通过 立体定位框架两点注射溶血磷脂酰胆碱是一种稳定且可重复的方法,可在小鼠中生成脱髓鞘模型以进行进一步研究。
受体介导的溶血磷脂信号传导涉及几乎所有器官系统的不同生理过程1.在中枢神经系统(CNS)中,这种信号传导在自身免疫性神经系统疾病(如多发性硬化症(MS))的发病机制中起着关键作用。多发性硬化症是一种慢性免疫介导的疾病,其特征是病理性脱髓鞘和炎症反应,导致神经系统功能障碍和认知障碍2,3。在疾病早期持续复发和缓解后,大多数患者最终进展到继发性进展阶段,这可能对大脑造成不可逆转的损害并导致残疾4。据信,继发性进展病程的病理标志是由炎症性病变引起的脱髓鞘斑块5。现有的MS治疗方法可以显着降低复发的风险。然而,对于进行性MS6引起的长期脱髓鞘损伤,仍然没有有效的治疗方法。因此,需要一个稳定建立且易于重现的模型来研究专注于白质变性的临床前治疗。
脱髓鞘和髓鞘再生是发展为多发性硬化症的两个主要病理过程。脱髓鞘是由促炎表型7的小胶质细胞诱导的轴突周围髓鞘的丧失,它导致神经冲动的缓慢传导并导致神经元和神经系统疾病的丧失。髓鞘再生是由少突胶质细胞介导的内源性修复反应,其中疾病可能导致神经变性和认知障碍8。炎症反应对整个过程至关重要,影响髓鞘损伤和修复的程度。
因此,持续的炎症性脱髓鞘的稳定动物模型对于进一步探索MS的治疗策略具有重要意义,由于MS的复杂性,已经建立了各种类型的动物模型来模拟 体内脱髓鞘病变,包括实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE),毒性脱髓鞘模型,铜绿素(CPZ)和溶酶磷脂酰胆碱(LPC)9.LPC是一种与炎症相关的内源性溶血磷脂,可诱发快速损伤,对髓鞘脂质有毒性,导致局灶性脱髓鞘。根据以前的报告和研究10,11,提供了具有一些修改的两点注射的详细方案。通常,经典的单点LPC注射模型仅在注射部位产生局部脱髓鞘,并且通常伴有自发性髓鞘再生12,13。然而,两点注射LPC模型可以证明LPC可以直接诱导小鼠胼胝体脱髓鞘,并导致更持久的脱髓鞘,髓鞘再生很少。
MS是中枢神经系统的慢性脱髓鞘疾病,是年轻人神经系统功能障碍的最常见原因之一20.临床上,大约60%-80%的MS患者在发展为继发性进行性MS21,22之前经历复发和缓解的周期,并且最终导致累积的运动障碍和认知缺陷23。目前,没有一个单一的实验模型涵盖了该疾病24的各种临床、病理或免疫学特征。?…
The authors have nothing to disclose.
本研究由国家自然科学基金(基金资助:82071380、81873743)资助。
L-α-Lysophosphatidylcholine from egg yolk | Sigma-Aldrich | L4129-25MG | |
32 gauge Needle | HAMILTON | 7762-05 | |
10 μl syringe | HAMILTON | 80014 | |
high speed skull drill | strong,korea | strong204 | |
drill | Hager & Meisinger, Germany | REF 500 104 001 001 005 | |
Matrx Animal Aneathesia Ventilator | MIDMARK | VMR | |
Portable Stereotaxic Instrument for Mouse | Reward | 68507 | |
Micro syringe | Reward | KDS LEGATO 130 | |
Isoflurane | VETEASY | ||
Paraformaldehyde | Servicebio | G1101 | |
Phosphate buffer | BOSTER | PYG0021 | |
LuxoL fast bLue | Servicebio | G1030-100ML | |
Suture | FUSUNPHARMA | 20152021225 | |
Brain mold | Reward | 68707 | |
Electron microscope fixative | Servicebio | G1102-100ML | |
Neutral red (C.I. 50040), for microscopy Certistain | Sigma-Aldrich | 1.01376 | |
Anti-Myelin Basic Protein Antibody | Millipore | #AB5864 | |
Anti-GST-P pAb | MBL | #311 | |
Ki-67 Monoclonal Antibody (SolA15) | Thermo Fisher Scientific | 14-5698-95 | |
Beta Actin Monoclonal Antibody | Proteintech | 66009-1-Ig | |
Myelin Basic Protein Polyclonal Antibody | Proteintech | 10458-1-AP | |
OLIG2 Polyclonal Antibody | Proteintech | 13999-1-AP | |
Alexa Fluor 488 AffiniPure Donkey anti-Rabbit IgG (H+L) | YEASEN | 34206ES60 | |
Alexa Fluor 594 AffiniPure Donkey Anti-Rat IgG (H+L) | YEASEN | 34412ES60 | |
Alexa Fluor 594 AffiniPure Donkey Anti-Rabbit IgG (H+L) | YEASEN | 34212ES60 | |
HRP Goat Anti-Rabbit IgG (H+L) | abclonal | AS014 | |
HRP Goat Anti-Mouse IgG (H+L) | abclonal | AS003 | |
Adult C57BL/6 male and female mice | Hunan SJA Laboratory Animal Co. Ltd |