Özet

Cellulaire membraanaffiniteitschromatografiekolommen om gespecialiseerde plantenmetabolieten te identificeren die interageren met geïmmobiliseerde tropomyosinekinasereceptor B

Published: January 19, 2022
doi:

Özet

Het protocol beschrijft de bereiding van celmembraanaffiniteitschromatografie (CMAC) kolommen met geïmmobiliseerde celmembraanfragmenten die functionele transmembraantropomyosinekinasereceptor B-eiwitten bevatten. Het gebruik van CMAC-kolommen bij de identificatie van gespecialiseerde plantenmetabolieten die interageren met deze receptoren en aanwezig zijn in complexe natuurlijke mengsels wordt ook uitgelegd.

Abstract

Chemicaliën gesynthetiseerd door planten, schimmels, bacteriën en ongewervelde zeedieren zijn een rijke bron van nieuwe medicijnhits en -leads. Geneesmiddelen zoals statines, penicilline, paclitaxel, rapamycine of artemisinine, vaak gebruikt in de medische praktijk, zijn voor het eerst geïdentificeerd en geïsoleerd uit natuurlijke producten. De identificatie en isolatie van biologisch actieve gespecialiseerde metabolieten uit natuurlijke bronnen is echter een uitdagend en tijdrovend proces. Traditioneel worden individuele metabolieten geïsoleerd en gezuiverd uit complexe mengsels, na de extractie van biomassa. Vervolgens worden de geïsoleerde moleculen getest in functionele assays om hun biologische activiteit te verifiëren. Hier presenteren we het gebruik van cellulaire membraanaffiniteitschromatografie (CMAC) -kolommen om biologisch actieve verbindingen rechtstreeks uit complexe mengsels te identificeren. CMAC-kolommen maken de identificatie mogelijk van verbindingen die interageren met geïmmobiliseerde functionele transmembraaneiwitten (TMP’s) ingebed in hun inheemse fosfolipide dubbellaagse omgeving. Dit is een gerichte aanpak, die vereist dat men de TMP kent waarvan men de activiteit wil moduleren met het nieuw geïdentificeerde kandidaat-geneesmiddel met kleine moleculen. In dit protocol presenteren we een aanpak om CMAC-kolommen voor te bereiden met geïmmobiliseerde tropomyosinekinasereceptor B (TrkB), die naar voren is gekomen als een levensvatbaar doelwit voor het ontdekken van geneesmiddelen voor tal van aandoeningen van het zenuwstelsel. In dit artikel bieden we een gedetailleerd protocol om de CMAC-kolom samen te stellen met geïmmobiliseerde TrkB-receptoren met behulp van neuroblastoomcellijnen die TrkB-receptoren overexpressie geven. We presenteren verder de aanpak om de functionaliteit van de kolom en het gebruik ervan bij de identificatie van gespecialiseerde plantenmetabolieten die interageren met TrkB-receptoren te onderzoeken.

Introduction

Botanische mengsels zijn rijk aan farmacologisch actieve verbindingen1, die dienen als een goede bron voor de identificatie van nieuwe medicijnhits en leads 2,3,4,5. De ontdekking van nieuwe geneesmiddelen uit natuurlijke producten is een vruchtbare aanpak geweest en veel momenteel goedgekeurde geneesmiddelen zijn afkomstig van verbindingen die voor het eerst in de natuur zijn geïdentificeerd. De chemische diversiteit van natuurlijke verbindingen is moeilijk te evenaren door door de mens gemaakte bibliotheken van chemisch gesynthetiseerde moleculen. Veel natuurlijke verbindingen interageren met en moduleren menselijke eiwitdoelen en kunnen worden beschouwd als evolutionair geoptimaliseerde medicijnachtige moleculen6. Deze natuurlijke verbindingen zijn bijzonder geschikt voor de identificatie van geneesmiddellood voor gebruik bij neurologische aandoeningen6. Twee van de momenteel door de FDA goedgekeurde geneesmiddelen voor de behandeling van de ziekte van Alzheimer (AD) zijn afgeleid van natuurlijke alkaloïden, namelijk: galantamine en rivastigmine (een derivaat van fysostigmine)6. Levodopa, momenteel het meest voorgeschreven medicijn voor de ziekte van Parkinson, werd voor het eerst geïdentificeerd uit de brede boon (Vicia faba L.) 7. Pergolide en lisuride, dopaminerge receptoragonisten zijn de derivaten van natuurlijke moederkorenalkaloïden uit de parasitaire schimmel Claviceps purpurea8. Reserpine, een alkaloïde geïsoleerd uit Indiase slangenwortel (Rauvolfia serpentina (L.) Benth. ex Kurz) was een van de eerste antipsychotica9. Onlangs zijn ontregelde immuunrespons en systemische ontsteking in verband gebracht met de ontwikkeling van tal van neurologische aandoeningen, zoals depressieve stoornissen of neurodegeneratieve ziekten10. Een plantaardig dieet samen met andere leefstijlinterventies blijkt de cognitieve en functionele vaardigheden bij ouderen te verbeteren 11,12,13,14,15,16,17,18,19,20,21 . Bepaalde elektrofiele moleculen die behoren tot triterpenen en polyfenolen blijken ontstekingsreacties te moduleren in zowel in vitro als in vivo modellen12. Natuurlijke verbindingen die α,β-onverzadigde carbonyl (bijv. Curcumine, cinnamaldehyde) of isothiocyanaatgroep (bijv. Sulforafaan) bevatten, interfereren bijvoorbeeld met Toll-like receptor-4 (TLR4) dimerisatie en remmen de stroomafwaartse synthese van pro-inflammatoire cytokines in een muriene interleukine-3-afhankelijke pro-B-cellijn12,22 . Epidemiologisch bewijs wijst er sterk op dat fytochemicaliën in de voeding, aanwezig in complexe voedselmatrices, ook een levensvatbare bron van nieuwe geneesmiddelen kunnen vormen6.

Een van de belangrijkste obstakels bij de identificatie van biologisch actieve moleculen die aanwezig zijn in plantenextracten, waaronder plantaardig voedsel, is de complexiteit van de onderzochte monsters. Traditioneel worden de individuele verbindingen geïsoleerd, gezuiverd en vervolgens getest op biologische activiteit. Deze aanpak leidt meestal tot de identificatie van de meest voorkomende en goed gekarakteriseerde verbindingen. Fenotypische geneesmiddelontdekkingsbenaderingen zonder een gedefinieerd moleculair doelwit zijn afhankelijk van de biogeleide fractionering van complexe mengsels23. In deze benadering wordt een extract gefractioneerd in minder complexe subfracties die vervolgens worden getest in fenotypische assays. De isolatie en zuivering van actieve verbindingen worden geleid door biologische activiteit die in de test wordt geverifieerd. De kennis van de identiteit van een bepaald geneesmiddeldoel kan de identificatie van farmacologisch actieve verbindingen in complexe mengsels aanzienlijk versnellen. Die benaderingen zijn meestal gebaseerd op de immobilisatie van het moleculaire doelwit, bijvoorbeeld een enzym, op een vast oppervlak, zoals magnetische kralen23. De geïmmobiliseerde doelen worden vervolgens gebruikt in de screeningsexperimenten die resulteren in de isolatie van verbindingen die interageren met het doelwit. Hoewel deze benadering op grote schaal is gebruikt bij de identificatie van verbindingen die gericht zijn op cytosolische eiwitten, is deze minder vaak toegepast bij de identificatie van chemicaliën die interageren met transmembraaneiwitten (TMP’s)23. Een extra uitdaging bij de immobilisatie van TMP’s komt voort uit het feit dat de activiteit van het eiwit afhankelijk is van de interactie met celmembraanfosfolipiden en andere moleculen in de dubbellaag zoals cholesterol 23,24. Het is belangrijk om deze subtiele interacties tussen eiwitten en hun inheemse fosfolipide dubbellaagse omgeving te behouden bij het immobiliseren van het transmembraandoel.

Bij cellulaire membraanaffiniteit chromatografie (CMAC) worden celmembraanfragmenten, en niet gezuiverde eiwitten, geïmmobiliseerd op de stationaire fasedeeltjes van het kunstmatige membraan (IAM) 23. IAM stationaire fasen worden bereid door fosfatidylcholine analogen covalent te binden aan silica. Onlangs zijn nieuwe klassen van IAM stationaire fasen ontwikkeld waarin vrije amine- en silanolgroepen end-capped (IAM. PC. DD2 deeltjes). Tijdens cmac-kolommenvoorbereiding worden celmembraanfragmenten geïmmobiliseerd op het oppervlak van IAM-deeltjes door adsorptie.

CMAC-kolommen zijn tot nu toe gebruikt om verschillende klassen TMP’s te immobiliseren, waaronder ionkanalen (bijv. Nicotinereceptoren), GPCR’s (bijv. Opioïde receptoren), eiwittransporters (bijv. P-glycoproteïne), enz.24. De geïmmobiliseerde eiwitdoelen zijn gebruikt bij de karakterisering van de farmacodynamiek (bijv. Dissociatieconstante, Kd) of bij het bepalen van bindingskinetiek (kaan en kuit) van liganden met kleine moleculen die interageren met het doelwit, evenals bij het proces van identificatie van potentiële nieuwe geneesmiddelkabels die aanwezig zijn in complexe matrices24 . Hier presenteren we de voorbereiding van CMAC-kolommen met de geïmmobiliseerde tropomyosinekinasereceptor B (TrkB), die naar voren is gekomen als een levensvatbaar doelwit voor medicijnontdekking voor tal van aandoeningen van het zenuwstelsel.

Eerdere studies toonden aan dat de activering van de van de hersenen afgeleide neurotrofe factor (BDNF) / TrkB-route geassocieerd is met de verbetering van bepaalde neurologische aandoeningen, zoals AD of depressievestoornis 25,26,27,28. Er werd gemeld dat BDNF-niveaus en de receptor TrkB-expressie afnemen in AD, en vergelijkbare reducties verminderen de hippocampusfunctie in diermodellen van AD29. Verlaagde niveaus van BDNF werden gemeld in serum en hersenen van AD-patiënten 30,31,32. Tau-overexpressie of hyperfosforylering bleken de BDNF-expressie in primaire neuronen en AD-diermodellen te downreguleren 33,34,35. Bovendien werd gemeld dat BDNF beschermende effecten had op β-amyloïde geïnduceerde neurotoxiciteit in vitro tr in vivo36. Directe toediening van BDNF in de hersenen van ratten bleek het leren en geheugen te verhogen bij cognitief gehandicapte dieren37. BDNF /TrkB kwam naar voren als een geldig doelwit voor het verbeteren van neurologische en psychiatrische stoornissen, waaronder AD28,38. Het richten op de BDNF/TrkB-signaleringsroute voor de ontwikkeling van therapieën in AD zal ons begrip van de ziekte mogelijk verbeteren39. Helaas kan BDNF zelf niet als behandeling worden gebruikt vanwege de slechte farmacokinetische eigenschappen en nadelige bijwerkingen40. Kleine molecuulactivatoren van TrkB/BDNF-routes zijn onderzocht als potentiële TrkB-liganden 41,42,43. Van de geteste agonisten met kleine moleculen is aangetoond dat 7,8-dihydroxyflavone (7,8-DHF) de BDNF / TrkB-route 41,44,45,46 activeert. Een derivaat van 7,8-DHF (R13; 4-Oxo-2-phenyl-4H-chromene-7,8-diyl bis(methylcarbamaat)) wordt momenteel overwogen als een mogelijk medicijn voor AD47. Onlangs werd aangetoond dat verschillende antidepressiva werken door direct te binden aan TrkB en BDNF-signalering te bevorderen, waardoor het belang van het nastreven van TrkB als een geldig doelwit voor de behandeling van verschillende neurologische aandoeningen verder wordt benadrukt48.

Het protocol beschrijft het proces van het samenstellen van de functionele TrkB-kolom en de TrkB-NULL-negatieve besturingskolom. De kolommen worden gekarakteriseerd met behulp van een bekend natuurproduct kleinmoleculair ligand: 7,8-DHF. Daarnaast beschrijven we het proces van het screenen van complexe matrices, met behulp van plantenextract als voorbeeld, voor de identificatie van verbindingen die interageren met TrkB.

Protocol

1. Celkweek van SH-SY5Y neuroblastoomcellen (TrkB en TrkB-NULL (ouderlijke) cellijnen) OPMERKING: Cellijnen (SH-SY5Y Cell Line (TrkB, BR6) en SH-SY5Y Parental Cell Line (TrkB NULL))49,50 werden gekocht bij Kerafast. Gekweekte cellen worden gebruikt als bron van de transmembraanreceptoren die moeten worden geïmmobiliseerd voor de bereiding van CMAC-kolommen. In de volgende stappen wordt beschreven hoe u celmembraanfragme…

Representative Results

Volgens het protocol werden twee CMAC-chromatografische kolommen samengesteld: één met de geïmmobiliseerde SH-SY5Y neuroblastoomcelmembraanfragmenten met overexpressie TrkB en één met SH-SY5Y TrkB-NULL celmembraanfragmenten. De correct geassembleerde CMAC-kolom is weergegeven in figuur 1 en de stappen die betrokken zijn bij immobilisatie van celmembraanfragmenten zijn weergegeven in figuur 2. Sinds de immobilisatie van TrkB recep…

Discussion

Identificatie van actieve verbindingen die aanwezig zijn in complexe mengsels van gespecialiseerde metabolieten is een zeer uitdagende taak23. Traditioneel worden individuele verbindingen geïsoleerd en wordt hun activiteit getest in verschillende testen. Deze aanpak is tijdrovend en kostbaar en leidt vaak tot isolatie en identificatie van de meest voorkomende en goed gekarakteriseerde verbindingen23. De momenteel gebruikte high-throughput screeningstests zijn sterk afhank…

Açıklamalar

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Z.C.A. werd ondersteund door de Scientific and Technological Research Council of Turkey (TUBITAK) 2219 – International Postdoctoral Research Fellowship Program. Onderzoek gerapporteerd in deze publicatie werd ondersteund door het National Center for Complimentary and Integrative Medicine van de National Institutes of Health onder toekenningsnummer 1R41AT011716-01. Dit werk werd ook gedeeltelijk ondersteund door de American Society of Pharmacognosy Research Starter Grant, Regis Technologies-subsidie aan L.C. De inhoud is uitsluitend de verantwoordelijkheid van de auteurs en vertegenwoordigt niet noodzakelijkerwijs de officiële standpunten van de National Institutes of Health.

Materials

7-8 Dihydroxyflavone hydrate Sigma-Aldrich D5446-10 mg ≥98% (HPLC)
Adenosine 5'-triphosphate (ATP) disodium salt hydrate Sigma-Aldrich A2383-1 g
Ammonium acetate VWR Chemicals BDH BDH9204-500 g
BDNF antibody Invitrogen PA5-15198-400 μL Primary antibody; 2 mg/mL of concentration
Benzamidine hydrochloride hydrate Sigma-Aldrich B6506-25 g
Brain derived neurotrophic factor (BDNF) human Sigma-Aldrich B3795-10 μg Recombinant, expressed in E. coli, lyophilized powder, suitable for cell culture
Calcium chloride VWR Analytical BDH9224-1 kg
Cholic acid sodium salt Alfa Aesar J62050-100 g
Dounce homogenizer VWR 71000-516 40 mL, 285 mm (overall lenght), 32 x 140 mm (O.D. x H)
Ethanol Sigma-Aldrich 493511
Ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA) VWR Analytical BDH-9232-500 g
Fetal bovine serum Sigma-Aldrich F2442-500 mL sterile-filtered, suitable for cell culture
G418 disulfate salt solution Sigma-Aldrich G8168-100 mL 50 mg/mL in H2O, 0.1 μm filtered, suitable for cell culture
Glycerol VWR Life Science E520-100 mL
Immobilized artificial membrane (IAM.PC.DD2) Regis Technologies, Inc. 1-771050-500
Magnesium chloride hexahydrate VWR Analytical BDH9244-500 mL
Methanol Sigma-Aldrich 322425
Nikon Plan Fluor Nikon Confocal laser scanning microscope
Normal goat serum (10%) Life Technologies 50197Z
Penicillin-Streptomycin Sigma-Aldrich P4333-100 mL
Phenylmethanesulfonyl fluoride (PMSF) Thermo Scientific 36978-5 g
Phosphate buffered saline (PBS) VWR Life Science K812-500 mL 1x
Potassium chloride VWR Chemicals BDH 0395-1 kg
Protease inhibitor cocktail VWR Life Science Ambreso M221-1 mL Proteomics grade, containing 50 mM AEBSF, 30 µM aprotonin, 1 mM bestatin, 1 mM E-64 and 1 mM leupeptin
RPMI-1640 medium Sigma-Aldrich R8758-500 mL with L-glutamine and sodium bicarbonate, liquid, sterile-filtered, suitable for cell culture
Secondary antibody goat anti-rabbit IgG (H+L) Invitrogen Alexa Flour Plus 488 A32731
SH-SY5Y Neuroblastoma cell lines expressing Trk-B Kerafast ECP007
SH-SY5Y Trk-NULL cell line Kerafast ECP005
Snake skin dialysis tubing Thermo Scientific 88245 10K MWCO, 35 mm dry I.D.
Sodium azide Sigma-Aldrich S2002
Sodium chloride BDH VWR Analytical BDH9286-2.5 kg
Tricorn 5/20 column GE Healthcare 24-4064-08
Tris-HCl VWR Life Science 0497-1 kg
Trypsin-EDTA solution Sigma-Aldrich T4049-500 mL 0.25%, sterile-filtered, suitable for cell culture, 2.5 g porcine trypsin and 0.2 g EDTA

Referanslar

  1. Thomford, N. E., et al. Natural Products for Drug Discovery in the 21st Century: Innovations for Novel Drug Discovery. International Journal of Molecular Sciences. 19 (6), 1578 (2018).
  2. Atanasov, A. G., Zotchev, S. B., Dirsch, V. M. International Natural Product Sciences Taskforce, Supuran, C.T. Natural products in drug discovery: advances and opportunities. Nature Reviews. Drug Discovery. 20 (3), 200-216 (2021).
  3. Altmann, K. H. Drugs from the Oceans: Marine Natural Products as Leads for Drug Discovery. Chimia. 71 (10), 646-652 (2017).
  4. Bernardini, S., Tiezzi, A., Laghezza Masci, V., Ovidi, E. Natural products for human health: an historical overview of the drug discovery approaches. Natural Product Research. 32 (16), 1926-1950 (2018).
  5. DeCorte, B. L. Underexplored Opportunities for Natural Products in Drug Discovery. Journal of Medicinal Chemistry. 59 (20), 9295-9304 (2016).
  6. Lee, J., Jo, D. G., Park, D., Chung, H. Y., Mattson, M. P. Adaptive cellular stress pathways as therapeutic targets of dietary phytochemicals: focus on the nervous system. Pharmacological Reviews. 66 (3), 815-868 (2014).
  7. Hornykiewicz, O. L-DOPA: from a biologically inactive amino acid to a successful therapeutic agent. Amino Acids. 23 (1-3), 65-70 (2002).
  8. Hoyer, D. Targeting the 5-HT system: Potential side effects. Neuropharmacology. 179, 108233 (2020).
  9. Nur, S., Adams, C. E. Chlorpromazine versus reserpine for schizophrenia. The Cochrane Database of Systematic Reviews. 4, (2016).
  10. Chung, H. Y., et al. Redefining Chronic Inflammation in Aging and Age-Related Diseases: Proposal of the Senoinflammation Concept. Aging and Disease. 10 (2), 367-382 (2019).
  11. Fitzgerald, K. N., et al. Potential reversal of epigenetic age using a diet and lifestyle intervention: a pilot randomized clinical trial. Aging. 13 (7), 9419-9432 (2021).
  12. Zhao, L., Lee, J. Y., Hwang, D. H. Inhibition of pattern recognition receptor-mediated inflammation by bioactive phytochemicals. Nutrition Reviews. 69 (6), 310-320 (2011).
  13. Corbi, G., et al. Dietary Phytochemicals in Neuroimmunoaging: A New Therapeutic Possibility for Humans?. Frontiers in Pharmacology. 7, 364 (2016).
  14. Davinelli, S., et al. Dietary phytochemicals and neuro-inflammaging: from mechanistic insights to translational challenges. Immunity & Ageing: I & A. 13, 16 (2016).
  15. Ostan, R., et al. Inflammaging and cancer: a challenge for the Mediterranean diet. Nutrients. 7 (4), 2589-2621 (2015).
  16. Martucci, M., et al. Mediterranean diet and inflammaging within the hormesis paradigm. Nutrition Reviews. 75 (6), 442-455 (2017).
  17. Szarcvel Szic, K., Declerck, K., Vidakovic, M., Vanden Berghe, W. From inflammaging to healthy aging by dietary lifestyle choices: is epigenetics the key to personalized nutrition. Clinical Epigenetics. 7 (1), 33 (2015).
  18. Dean, E., Gormsen Hansen, R. Prescribing optimal nutrition and physical activity as "first-line" interventions for best practice management of chronic low-grade inflammation associated with osteoarthritis: evidence synthesis. Arthritis. , 560634 (2012).
  19. Ruiz-Núñez, B., Pruimboom, L., Dijck-Brouwer, D. A., Muskiet, F. A. Lifestyle and nutritional imbalances associated with Western diseases: causes and consequences of chronic systemic low-grade inflammation in an evolutionary context. TheJournal of Nutritional Biochemistry. 24 (7), 1183-1201 (2013).
  20. Agarwal, P., et al. MIND Diet Associated with Reduced Incidence and Delayed Progression of Parkinsonism in Old Age. The Journal of Nutrition, Health & Aging. 22 (10), 1211-1215 (2018).
  21. Morris, M. C., et al. MIND diet associated with reduced incidence of Alzheimer’s Disease. Alzheimer’s & Dementia: The Journal of the Alzheimer’s Association. 11 (9), 1007-1014 (2015).
  22. Franceschi, C., Garagnani, P., Parini, P., Giuliani, C., Santoro, A. Inflammaging: a new immune-metabolic viewpoint for age-related diseases. Nature Reviews. Endocrinology. 14 (10), 576-590 (2018).
  23. Ciesla, L., Moaddel, R. Comparison of analytical techniques for the identification of bioactive compounds from natural products. Natural Product Reports. 33 (10), 1131-1145 (2016).
  24. Moaddel, R., Wainer, I. W. The preparation and development of cellular membrane affinity chromatography columns. Nature Protocols. 4 (2), 197-205 (2009).
  25. Ferrer, I., et al. BDNF and full-length and truncated TrkB expression in Alzheimer disease. Implications in therapeutic strategies. Journal of Neuropathology and Experimental Neurology. 58 (7), 729-739 (1999).
  26. Numakawa, T., Odaka, H., Adachi, N. Actions of Brain-Derived Neurotrophin Factor in the Neurogenesis and Neuronal Function, and Its Involvement in the Pathophysiology of Brain Diseases. International Journal of Molecular Sciences. 19 (11), 3650 (2018).
  27. Lima Giacobbo, B., et al. Brain-Derived Neurotrophic Factor in Brain Disorders: Focus on Neuroinflammation. Molecular Neurobiology. 56 (5), 3295-3312 (2019).
  28. Wang, Z. H., et al. Deficiency in BDNF/TrkB Neurotrophic Activity Stimulates δ-Secretase by Upregulating C/EBPβ in Alzheimer’s Disease. Cell Reports. 28 (3), 655-669 (2019).
  29. Devi, L., Ohno, M. TrkB Reduction Exacerbates Alzheimer’s Disease-like Signaling Aberrations and Memory Deficits without Affecting beta-Amyloidosis in 5XFAD Mice. Translational Psychiatry. 5 (5), 562 (2015).
  30. Jiao, S. S., et al. Brain-derived Neurotrophic Factor Protects against Tau-related Neurodegeneration of Alzheimer’s Disease. Translational Psychiatry. 6 (10), 907 (2016).
  31. Ng, T., Ho, C., Tam, W., Kua, E., Ho, R. C. Decreased Serum Brain-Derived Neurotrophic Factor (BDNF) Levels in Patients with Alzheimer’s Disease (AD): A Systematic Review and Meta-Analysis. International Journal of Molecular Sciences. 20 (2), 257 (2019).
  32. Amidfar, M., de Oliveira, J., Kucharska, E., Budni, J., Kim, Y. K. The Role of CREB and BDNF in Neurobiology and Treatment of Alzheimer’s Disease. Life Sciences. 257, 118020 (2020).
  33. Atasoy, I. L., et al. Both Secreted and the Cellular Levels of BDNF Attenuated due to Tau Hyperphosphorylation in Primary Cultures of Cortical Neurons. Journal of Chemical Neuroanatomy. 80, 19-26 (2017).
  34. Rosa, E., et al. Tau Downregulates BDNF Expression in Animal and Cellular Models of Alzheimer’s Disease. Neurobiology of Aging. 48, 135-142 (2016).
  35. Xiang, J., et al. Delta-secretase-cleaved Tau Antagonizes TrkB Neurotrophic Signalings, Mediating Alzheimer’s Disease Pathologies. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 116 (18), 9094-9102 (2019).
  36. Giuffrida, M. L., Copani, A., Rizzarelli, E. A Promising Connection between BDNF and Alzheimer’s Disease. Aging. 10 (8), 1791-1792 (2018).
  37. Ando, S., et al. Animal Model of Dementia Induced by Entorhinal Synaptic Damage and Partial Restoration of Cognitive Deficits by BDNF and Carnitine. Journal of Neuroscience Research. 70 (3), 519-527 (2002).
  38. Fischer, D. L., Sortwell, C. E. BDNF Provides Many Routes Toward STN DBS-Mediated Disease Modification. Movement Disorders. Official Journal of the Movement Disorder Society. 34 (1), 22-34 (2019).
  39. Zhang, F., Kang, Z., Li, W., Xiao, Z., Zhou, X. Roles of Brain-derived Neurotrophic Factor/Tropomyosin-related Kinase B (BDNF/TrkB) Signalling in Alzheimer’s Disease. Journal of Clinical Neuroscience: Official Journal of the Neurological Society of Australasia. 19 (7), 946-949 (2012).
  40. Pilakka-Kanthikeel, S., Atluri, V. S., Sagar, V., Saxena, S. K., Nair, M. Targeted Brain Derived Neurotropic Factors (BDNF) Delivery across the Blood-Brain Barrier for Neuro-protection using Magnetic Nano Carriers: An In-vitro Study. PLoS One. 8 (4), 62241 (2013).
  41. Jang, S. W., et al. A Selective TrkB Agonist with Potent Neurotrophic Activities by 7,8-Dihydroxyflavone. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 107 (6), 2687-2692 (2010).
  42. Todd, D., et al. A Monoclonal Antibody TrkB Receptor Agonist as a Potential Therapeutic for Huntington’s Disease. Plos One. 9 (2), 87923 (2014).
  43. Liu, X., et al. Optimization of a Small Tropomyosin-Related Kinase B (TrkB) Agonist 7,8-Dihydroxyflavone Active in Mouse Models of Depression. Journal of Medicinal Chemistry. 55 (19), 8524-8537 (2012).
  44. Liu, X., et al. Biochemical and Biophysical Investigation of the Brain-derived Neurotrophic Factor Mimetic 7,8-Dihydroxyflavone in the Binding and Activation of the TrkB Receptor. The Journal of Biological Chemistry. 289 (40), 27571-27584 (2014).
  45. Chen, L., Gao, X., Zhao, S., Hu, W., Chen, J. The Small-Molecule TrkB Agonist 7,8-Dihydroxyflavone Decreases Hippocampal Newborn Neuron Death After Traumatic Brain Injury. Journal of Neuropathology and Experimental Neurology. 74 (6), 557-567 (2015).
  46. Liu, X., et al. Optimization of a Small Tropomyosin-related Kinase B (TrkB) Agonist 7,8-Dihydroxyflavone Active in Mouse Models of Depression. Journal of Medicinal Chemistry. 55 (19), 8524-8537 (2012).
  47. Zhang, Z., et al. 7,8-Dihydroxyflavone Prevents Synaptic Loss and Memory Deficits in a Mouse Model of Alzheimer’s Disease. Neuropsychopharmacology: Official Publication of the American College of Neuropsychopharmacology. 39 (3), 638-650 (2014).
  48. Casarotto, P. C., et al. Antidepressant Drugs Act by Directly Binding to TRKB Neurotrophin Receptors. Cell. 184 (5), 1299-1313 (2021).
  49. Iyer, R., et al. Entrectinib is a potent inhibitor of Trk-driven neuroblastomas in a xenograft mouse model. Cancer letters. 372 (2), 179-186 (2016).
  50. Iyer, R., et al. Nanoparticle delivery of an SN38 conjugate is more effective than irinotecan in a mouse model of neuroblastoma. Cancer letters. 360 (2), 205-212 (2015).
  51. Ng, E. S., Chan, N. W., Lewis, D. F., Hindsgaul, O., Schriemer, D. C. Frontal Affinity Chromatography-Mass spectrometry. Nature Protocols. 2 (8), 1907-1917 (2007).
  52. Maciuk, A., Moaddel, R., Haginaka, J., Wainer, I. W. Screening of Tobacco Smoke Condensate for Nicotinic Acetylcholine Receptor Ligands using Cellular Membrane Affinity Chromatography Columns and Missing Peak Chromatography. Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis. 48 (2), 238-246 (2008).
  53. Harvey, A. L., Edrada-Ebel, R., Quinn, R. J. The Re-emergence of Natural Products for Drug Discovery in the Genomics Era. Nature Reviews. Drug Discovery. 14 (2), 111-129 (2015).
  54. Ciesla, L., et al. Development and Characterization of the α3β4α5 Nicotinic Receptor Cellular Membrane Affinity Chromatography Column and Its Application for on line Screening of Plant Extracts. Journal of Chromatography A. 1431, 138-144 (2016).

Play Video

Bu Makaleden Alıntı Yapın
Arituluk, Z. C., Adhikari, B., Maitra, U., Goodman, C., Ciesla, L. M. Cellular Membrane Affinity Chromatography Columns to Identify Specialized Plant Metabolites Interacting with Immobilized Tropomyosin Kinase Receptor B. J. Vis. Exp. (179), e63118, doi:10.3791/63118 (2022).

View Video