Laboratuvar muhafazasını turkuaz ev ve verimli bir şekilde standart Zebra balığı özellikleri için kullanılan aynı altyapı istihdam Merkezi su filtrasyon sistemi, bireysel balık binlerce yükseltmek killifish ölçeklendirilecektir. Burada verimli killifish bakım izin standart yordamların listesini ayrıntılı.
Deneysel amaçlar için kullanılan modeli laboratuvar balık yetiştiriciliği uygulamaları geliştirme modeli sistemleri, Zebra balığı ve medaka gibi başvuru balık kurulması büyük ölçüde yararlanmıştır. Son yıllarda ortaya çıkan bir balık-turkuaz killifish (Nothobranchius furzeri) – alanları araştırma grupları Biyoloji yaşlanma ve ekoloji, giderek artan sayıda tarafından kabul edilmiştir. Esir bir yaşam süresi 4-8 ay ile bu tür shortest-lived omurgalılar esaret kaldırdı ve yaşlanma oranı ve yaşam beklentisi değişikliklere yol açabilir testinde – kısa bir süre – deneysel müdahaleler bilimsel topluluk sağlar. Embriyonik diapause tarafından karakterize bu tür benzersiz Biyoloji verilen patlayıcı cinsel olgunlaşma, işaretlenmiş morfolojik ve davranış cinsel dimorfizm – ve onların nispeten kısa yetişkin yaşam süresi – özel yetiştirme uygulamaları içinde acil vardır isteğe bağlı. Bu iletişim kuralı en iyi turkuaz killifish laboratuvar Bakımı, etkinleştirme bu tür güçlü laboratuvar hayvan modeli olarak benimsemeye bilimsel topluluk izin anahtar yetiştirme önlemleri kümesini raporlar.
Hızlı yaşam döngüsü ve kısa yaşam süresi göz önüne alındığında, turkuaz killifish Biyoloji1,2,3‘ te bir umut verici yeni model organizma olarak hızla büyüyor. Bu tür benzersiz bir yaşam döngüsü embriyonik diapause, hızlı cinsel olgunlaşma ve bir genişletilmiş post-reproductive hayat sahne4,5oluşan bir teleost için karakterizedir. Son iş bu tür Biyoloji hem tutsak hem de vahşi6,7elucidating için katkıda bulunmuştur. Turkuaz killifish live mevsimlik taze su organları oluşturan Zimbabve ve Mozambik Afrika savana yağışlı sezon sırasında. Kuru sezonunda embriyo su diapause denilen bir stres dayanıklı hayat sahne sayesinde yokluğunda kuru çamur içinde hayatta kalmak.
Genetik haritalar bu tür için oluşturulan8,9edilmiş ve son zamanlarda onların genom sıralı ve monte10,11oldu. Birkaç doğuştan laboratuvar balık suşları geliştirdik ve transgenesis ve CRISPR/Cas9 yolu ile düzenleme genom elde edilebilir içinde bu tür, turkuaz killifish rekabetçi laboratuvar omurgalı model organizma teşvik fiili haline gelmiştir 12,13,14.
Her ne kadar bu tür15için yayımlanmış bir laboratuvar protokol, mevcut protokolünde biz özellikle yaşlanma ve hayatta kalma araştırmak Etüdleri amaçlayan deneysel laboratuvar kuralları kapsamlı bir listesi geliştirmek. Mevcut Protokolü araştırmacılar Zebra balığı ve medaka yetiştiriciliği ile zaten tanıdık turkuaz killifish çiftçiliği anahtar ayarlamalar en az sayıda benimseyerek usta olmak için sağlar. Aynı zamanda, araştırmacılar balık yetiştiriciliği gerekli araçları ile deneyiminiz olmadan gelişen bir turkuaz killifish koloni yükseltmek için bu iletişim kuralı sağlar.
Biz laboratuvar embriyo koleksiyonu, kuluçka gibi yetişkin balık konut, dahil olmak üzere turkuaz killifish kültür için bir protokol tarif doğurmak ve besleme. Bizim iletişim kuralı özellikle yetişkin balık, özellikle deneysel araştırmalar yaşlanma ve yaşam süresi üzerinde duruldu araştırma laboratuvarları hedeflenmektedir. Turkuaz killifish bir çift Zebra balığı tesisi yükseltilebilir; Ancak, standart Zebra balığı bakımı16‘ dan killifish yetiştiriciliği önemli yönleri farklı. Bu ayarlamalar erken bir tuzlu su-karides sadece diyet bir diyet protein açısından zengin kan solucan gibi kuru ve sıvı kuluçka aşaması oluşan embriyo kuluçka belirli adımları ile takıma geçiş içerir.
İletişim kuralına kritik adımlar 8-30 ° C sıcaklık aralığında sevkiyat embriyo içerir. Yetiştirme durumunda, sıklık ve gıda kalitesi besleme verimlilik bağlıdır; Bu nedenle, embriyo verim (bakınız Bölüm 5.6) artırmak için tank doğurmak başına günde en az iki besleme önerilir. Embriyo beyazlatma sırasında embriyo kuluçka beyazlatma çözüm genişletmeniz değil. Bu yumurta koryon ve artan embriyo ölümleri hasara neden olabilir. Metilen mavisi ile embriyo kuluçka zaman kuluçka hazır kapak embriyo canlılığı önemli ölçüde azaltılmış olacak gibi 2 hafta daha uzun süre uzatmak değil. Turkuaz killifish kuluçkalık için Hümik asit solüsyonu düşük sıcaklık tarama artırır ve embriyoların çözüm Komple daldırma eşitlenmiş tarama sağlar. Fry gaz mesane doldurmak mümkün değil yüksek oranda kuluçka sonuçlarında sırasında yetersiz havalandırma (“göbek-kaymak” fenotip, bkz: Notlar bölümünde 5.1).
Sınırlama-in doğurmak için protokol hangi pozlar sorunlar için filtrasyon sistemleri Merkezi ve alternatif yöntemlerle gelecekte değiştirilmesi gerektiğini kum substrate kullanımını içerir. Olası alternatifler tankları damızlık Zebra balığı kullanımı olabilir. Embriyo ağartma büyük fiziksel-kimyasal değişiklikler değiştirilmiş koryon fizyolojisi ve başarı kuluçkalık neden olabilir yumurta koryon neden olabilir. Embriyo sürekli maruz kalma Metilen mavisi yetişkin balık fizyolojisi uzun vadeli değişiklikler neden olabilir. Hayatta kalma kohort çalışmaları için bireysel tankları yetişkin balık yetiştirme balık davranış ve sağlık olumsuz yönde etkileyebilir. Ancak, grup konut hayatta kalma kohort çalışmaları için sıkı sosyal hiyerarşileri için önde gelen sosyal hakimiyet ve erkek bölgede kurulması nedeniyle önemli karıştırıcı faktörlerin ekler. Bu nedenle, yalıtım sağkalım Etütleri erkek balık makul bir uzlaşma olduğuna karar. Beslenme laboratuvar killifish kolonileri un kontrollü kaynaklardan gelen canlı gıda ile dış contaminations için bir risk parazitler ve potansiyel patojenik mikrobiyal topluluklar ekleyin. Gelecekte, bir geçici steril balık besleme geliştirilmelidir.
Bu iletişim kuralı için gelecekteki iyileştirmeler hala 3-4 hafta içinde cinsel olgunlaşma tamamlamak için yol bir kontrollü, Sigara-live diyet ele alınacak. Özet olarak, bizim iletişim kuralı turkuaz killifish laboratuvar için geniş bilimsel bir topluluk kültür erişilebilirlik sunmaktadır.
The authors have nothing to disclose.
Alessandro Cellerino, Tyrone Genade, Anne Brunet, Sabrina Sharp, Mickie Powell, Simone Keil, Yumi Kim, Patrick Smith, Kai Mathar ve Valenzano laboratuvar tüm üyeleri Max Planck Enstitüsü, biyoloji yaşlanma için farklı yönleri için katkıda bulunduğunuz için teşekkür ediyoruz Geçerli killifish yetiştiriciliği protokolü ile yıl içinde.
Probe calibration buffer solution pH=7.0 | Roth | A518.1 | 1L buffer solution pH=7.0 to calibrate water system pH-electrode |
Probe calibration buffer solution pH=4.0 | Roth | P712.1 | 1L buffer solution pH=4.0 to calibrate water system pH-electrode |
Conductivity standard | VWR | 83607.260 | 500 mL Conductivity standard 1,413 uS/cm to calibrate water system conductivity-electrode |
Easy Strips Test 6in1 | JBL | 2533900 | Test strips for determination chlorine values of system water |
Ammonia Test | JBL | 2536500 | Test to determine ammonia content of system water |
Red Sea Salt | Red Sea | 22 kg bucket | |
Sodium hydrogen carbonate | VWR | 27780.360 | |
Humic acid | Sigma- Aldrich | 53680-50G | |
New HUFA Artemia enrichment | ZM Systems UK | 75g bottle | |
Methylene blue | Roth | AE64.1 | |
Hydrogen peroxide solution | Sigma- Aldrich | 31642-1L | 30% (w/w) |
Cononut fiber | Dragon | ZCS010 | |
Whatman paper | GE healthcare | 3030-690 | |
Ethanol pure | VWR | 20821.467 | 100% |
Silica sand | local pet shop | ||
Artemia Eggs Premium Grade | Sanders | ||
Bloodworm | local distributor | Poseidon Aquakultur Germany | |
dNTPs solution mix | Biolabs | N04472 | 10mM |
Taq DNA polymerase | Invitrogen | 18038-042 | 5U/uL |
PCR 10x Buffer | Invitrogen | 18038-042 | |
MgCl2 | Invitrogen | 18038-042 | 50mM |
NaOH | Sigma- Aldrich | S8045-500g | 50mM |
Tris-HCl, pH=8.0 solution | Sigma- Aldrich | T2694-1L | 1M |
HCl 37% | Sigma- Aldrich | H1758-500mL | |
Aquatic housing system | Aquaneering | Central filtration equipped aquatic system | |
Fish tanks | Aquaneering | volume: 0.8L, 2.8L, 9.5L; equipped with baffles, fry mesh and lids | |
Orbital shaker | VWR | 89032-100 | model 5000 |
Microbiological incubator | Thermo Scientific, Heratherm | 50125882 | model IMC18; for storage embryos in the liquid phase, set to t=27-28°C |
Cooling Incubator | Binder | 9020-0209 | model KT115; for storage embryos in the solid phase, set to t=27-28°C |
Hatching incubator | Thermo Scientific, Heratherm | 51028114 | model OGS180; for embryos hatching, set to t=27-28°C |
Stereomicroscope | Leica | model M80 | |
Breeding sand/hatching boxes | Roth | 1598.1 | 1000mL |
Petri dish | Sarstedt | 82.1473 | 92x16mm |
50mL Conical tube | Sarstedt | 62.547.254 | |
15mL Conical tube | Sarstedt | 62.554.002 | |
Disposable Plastic Pasteur pipette | Roth | EA71.1 | 2mL; For fish feeding with bloodworms, or embryos selection cut off the tip to open 3-4mm diameter |
Serological pipette | Sarstedt | 86.1689.001 | 50mL |
Syringe | Henke Sass Wolf | 4100-000V0 | 10mL |
Metal strainer | fineness <1mm; for embryos collection | ||
Tweezers | Dumont | 0508-5/45-PO | type5/45; for embryos transfer |
25L Brine shrimps hatcher | Aquaneering | ZHBS25 | main hatcher |
500mL Brine shrimps hatcher | JBL | 6106100 | model Artemio 1; backuo hatcher |
Narrow-mesh fish nets | JBL | ||
Sand beaker | VWR | BURK7102-5000 | 5000mL |
Brine shrimps separation beaker | VWR | BURK7102-2000 | 2000mL |
Plastic zipper bag | Roth | P279.2 | for dead fish storage |
Pipetboy | Integra | 155000 | model Pipetboy acu2 |
Parafilm | P-Lab | P701605 | |
Air tubing | www.zajac.de | AQ380 | 4-6 mm diameter |
1L Glass bottle | VWR | 215-1595 | |
2L Glass bottle | VWR | 215-1596 | |
500mL Squeeze bottle | Roth | K665.1 | for fish feeding with brine shrimps |
120 micron brine shrimps strainer | Florida Aqua Farms | BB-PC2 | for brine shrimps/bloodworm collection |
Finish filter socks | Aquaneering | MFVB025C | 25 micron |
Central filtration fish housing system | Aquaneering, Techniplast, Aquatic Habitats, Aqua Schwarz |