Este protocolo descreve a manutenção regular e cuidados para manter as condições ideais para a criação de peixes-zebra. O vídeo ilustra o protocolo para a manutenção do sistema, regular da habitação, alimentação, reprodução e criação de larvas de peixe-zebra.
Este protocolo descreve cuidados regulares e manutenção de um laboratório de peixe-zebra. Zebrafish estão ganhando popularidade em genética, a pesquisa farmacológica e comportamental. Como um vertebrado, partes zebrafish similaridade de sequência genética considerável com os seres humanos e estão a ser utilizados como um modelo animal para várias condições de doença humana. As vantagens do peixe-zebra, em comparação com os outros modelos de vertebrados comuns incluem fecundidade elevada, baixo custo de manutenção, os embriões transparentes, e rápido desenvolvimento. Devido ao estímulo do interesse em zebrafish pesquisa, a necessidade de estabelecer e manter uma instalação de alojamento produtiva do peixe-zebra também está aumentando. Embora a literatura esteja disponível para a manutenção de um laboratório de peixe-zebra, um protocolo de vídeo concisa é inexistente. Este vídeo ilustra o protocolo para regular da habitação, alimentação, reprodução e criação de larvas de peixe-zebra. Este processo vai ajudar os pesquisadores a entender o comportamento natural e ótimas condições de zebrafish criação e, portanto, solucionar problemas experimentais que se originam a partir das condições de criação de peixes. Este protocolo será de grande ajuda para os pesquisadores pretendem estabelecer um laboratório de peixe-zebra, e também para estudantes de graduação que estão pretendendo usar zebrafish como um modelo animal.
Zebrafish origem no rio Ganges, no norte da Índia e estão se tornando populares em pesquisa, tanto adulto e sua larva 2, revisado por Spence et al. 3. Peixe-zebra possuem várias vantagens sobre outros modelos animais, tais como elevada fecundidade, facilidade de manutenção, a depuração óptico de embriões, o desenvolvimento embrionário rápida e baixo custo de manutenção. Eles são passíveis de manipulação genética 6 e adequado para rastreio de alto rendimento de drogas 4,5. Sua fertilização é externa que é vantajoso para a sua utilização pelos biólogos do desenvolvimento. Devido a estas características favoráveis, zebrafish estão ganhando popularidade em genética 7, 8 farmacológica e pesquisa comportamental 9,10. Há um número de desafios para a manutenção de uma instalação de criação de peixe-zebra e para a obtenção de embriões de peixe zebra. Aqui, descrevemos nossas experiências e recomendações para enfrentar esses desafios e Øutline um protocolo para a manutenção do sistema, alimentação, reprodução e criação das larvas.
Manutenção do sistema
Para manter o peixe-zebra em condições saudáveis, é importante proporcionar-lhes com um ambiente limpo, em um sistema de aquário que funcione correctamente. Uma parte importante deste sistema é a troca dos filtros regularmente, de modo que todos os tanques de receber o fluxo de água adequada e água limpa. É vital para evitar a interrupção do fornecimento de água de bicicleta para cada tanque devido às tubulações do sistema bloqueadas. Os tubos podem ser limpos com um caudal mais elevado do que a pressão normal de água e se o bloqueio ocorrerá. O ideal, em torno de 10% da água do sistema deve ser substituído diariamente para manter a boa qualidade da água. Alternativamente, a água pode ser substituído enquanto mudando a vasilha ou filtro de carbono. Isto assegura que a sujidade depositada nos tubos de ligação destes filtros é removido. A qualidade da água deve ser verificado em uma base regular. Parâmetros como pH, alcalinidade, temperature, dureza, amônia, oxigênio dissolvido, salinidade e condutividade devem ser considerados como fatores importantes para representar a qualidade da água do sistema (ver Tabela 2 para detalhes). No mínimo, nitrato, pH, temperatura e devem ser monitorados em uma base regular para assegurar a boa qualidade da água para o peixe-zebra habitação. Ideal nitrato (NO 3 -), os níveis são <50 mg / L 11, se estes níveis elevados pode ser reduzida através da substituição da água do sistema de circulação com a água do sistema de fresco. Ocasionalmente, os filtros não se encaixam bem e vazar por isso recomenda-se verificar se há algum vazamento após uma mudança de filtro. Se o fluxo de água do reservatório principal está bloqueada ou depois de alterar a bomba de água ou a alteração de um filtro, o caudal de água pode ser restaurado ou desapertar ou remover o filtro durante alguns segundos, para eliminar quaisquer vácuo sendo gerada nos tubos. O tempo necessário para mudar os filtros podem variar dependendo de vários factores tais como o total de carga biológica on do sistema, limpeza de filtros de outros, e sujidade depositada nos tubos. Assim, os filtros devem ser imediatamente alterado se eles aparecem sujos ou se todos os tanques não estão recebendo o abastecimento de água correta. Recomenda-se também de que a rede de pesca ser limpa com etanol a 70%, e enxaguada em água para descontaminar, e deixou-se secar antes de ser reutilizado. Secagem garante a evaporação do etanol, que de outra forma é tóxica para os peixes.
A maioria dos sistemas de peixe-zebra de usar-clorados água da torneira, no entanto, alguns sistemas utilizam água desionizada. É importante manter a condutividade da água do sistema entre 300 e ~ 1500 uS pois isso reduz a energia do peixe tem de manter os sais do corpo. Portanto, peixe-zebra não podem ser mantidas em água desionizada, a menos que os sais são adicionados para manter os níveis de condutividade óptimas. Existe o risco de possíveis concentrações de cobre elevadas no sistema de água se a água da torneira é usado porque o filtro de carvão não remover o cobre. Assim, users deve verificar se as concentrações de cobre e evitar cobre tubulação onde for possível.
Alimentação
Zebrafish nunca deve ser superalimentados pois isso pode aumentar o nível de nitrato na água, possivelmente afetando sua criação 11, ou viabilidade, como alguns peixes podem morrer devido a excessos. Recomendamos não fornecendo mais alimentos durante qualquer uma alimentação de um tanque de peixes pode terminar dentro de 10 min. É muito importante para remover o sal da salmoura antes de os camarões alimentá-los para o peixe-zebra, como a concentração de sal em excesso provoca a morte. Se mais ovos zebrafish são requeridos, os peixes podem ser alimentados três vezes por dia. Limpeza dos tanques de peixes reprodutores diária também melhora os níveis de produção de ovos.
Ao alimentar os sistemas aquáticos Habitats costumamos desligar a bomba de água e bomba de ar para permitir que o peixe para comer a comida para 10 min. Isso diminui a quantidade de alimentos que é arrastado para os filtros. No entanto, os usuários devem ter o cuidado de reaisbrasa para ligar as bombas novamente mais tarde.
Criação
Zebrafish são geralmente em condição de reprodução ideal entre a 3 e 18 meses de idade. Criação de pares não deve ser realizado durante dois dias consecutivos 11, porém, no tanque de criação pode ser realizado diariamente como um tanque pode conter muitos peixes que reduz a possibilidade de o mesmo par de peixes que estão sendo criados por dois dias seguidos. Reprodução deve ser feita em intervalos regulares, mesmo se os ovos não são necessários. Este processo irá assegurar o ciclo de reprodução do peixe é mantido. Recomenda-se que existem mais mulheres que homens em uma criação de set-up. Zebrafish Masculino mudar suas parceiras em um 12 base diária, que apóia essa recomendação. Além disso, dentro do nosso laboratório que inicialmente teve problemas com a reprodução, no entanto, usando mais mulheres que homens em uma criação de set-up ajudou a resolver o problema. Além disso, a alimentação com um alto teor de proteína content dieta e artémia 2-3 vezes por dia, a partir de tanques de peixes de mistura diferentes (de pais diferentes), mantendo a temperatura da reprodução set-up entre 27 e 28 ° C, e apertando as barrigas das fêmeas com tubos de ovário bloqueadas usando massagem suave melhorada produção de ovos. Recomendamos manter um registro de linhas de peixe / origens para evitar in-breeding entre irmãos. Isto melhora ainda mais a produção de embriões. Manter um registro do número de embriões definidos por peixes de cada tanque também é recomendado. Isto ajuda com a manutenção de uma faixa de tanques de piscicultura melhores e tomando medidas para melhorar a reprodução nos peixes não colocar ovos.
Levantamento de larvas
Alimentação das larvas deve começar a partir de 5 dpf (dias fertilização post). Larvas jovens podem ser alimentados com ração seca de ~ 100 microns de tamanho (por exemplo, ZM100) ou alimento vivo, como paramécio e rotíferos (que estimula o crescimento). O tamanho de alimentos pode ser aumentada lentamentea 200 microns (por exemplo, ZM200) ou 300/400 microns (por exemplo, ZM300). A população de peixes adultos devem ser em torno de 6-7 peixe por litro de água. Esta prática é recomendada para uma melhor manutenção de DBO (Demanda Biológica de Oxigênio) para os tanques.
The authors have nothing to disclose.
Os autores gostariam de agradecer a Tammy Esmaili por sua assistência na gestão de consumíveis de laboratório. AA é o destinatário de uma Bolsa de Doutoramento do Centro de Excelência para a Investigação da Doença de Alzheimer e Cuidados, Faculdade de Ciências Médicas, Edith Cowan University. MC recebe doutoramento apoio financeiro do Rotary Club, Perth. AM, GV, KT, e RNM são financiados pela fundação britânica Alzheimer Research McCusker.
Name of reagent/equipment | Company | Catalogue number | |
Zebrafish circulating system | Aquatic Habitats, USA | AHAB stand-alone, bench-top systems | |
Sodium Bicarbonate | Sigma Aldrich | S6297 | |
Fish food dispenser/Dry food feeder | Aquatic Habitats, USA | AH19 | |
Microscope | Olympus | SZX12 | |
Dry Food | ZM Fish food, UK | ZM100, ZM200, ZM300 | |
Brine shrimp eggs | Salt Creek, Inc., USA | Premium Grade | |
In-tank breeders | Aquatic Habitats, USA | ITSTS-A | |
Activated carbon | Penn-Plax Pro-crab, USA | PBC3MF | |
Breeding tanks | Aquatic Habitats, USA | SBTANK (1L) Breeder Tank-2 (2L) |
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Red sea salt | Red sea salt, USA | Local pet store/ www.redseafish.com |
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Filters (Canister, filter pads, and UV) | Aquatic Habitats, USA | aquatichabitats.com | |
Siporax Media | Aquatic Habitats, USA | BF 820 | |
Brine shrimp net | Aquatic Habitats, USA | BSN 1 | |
Brine shrimp hatcher | Aquatic Habitats, USA | BS252 | |
Baffles | Aquatic Habitats, USA | aquatichabitats.com | |
Table 1. Table of specific reagents and equipment used in this protocol. |