Dit protocol beschrijft regelmatig onderhoud en zorg aan optimale omstandigheden voor zebravis veeteelt te behouden. De video illustreert het protocol dat voor systeem onderhoud, regelmatige huisvesting, voeding, fokkerij, en het verhogen van de zebravis larven.
Dit protocol beschrijft de reguliere zorg en het onderhoud van een zebravis laboratorium. Zebravis zijn nu aan populariteit wint in de genetica, farmacologische en gedragsonderzoek. Als vertebrate worden zebravis share aanzienlijke genetische sequentie-overeenkomst met mensen en gebruikt als een diermodel voor verschillende menselijke aandoeningen. De voordelen van zebravis in vergelijking met andere veel voorkomende gewervelde modellen zijn voorzien van een hoge vruchtbaarheid, lage onderhoudskosten, transparante embryo's, en snelle ontwikkeling. Als gevolg van de uitloper van belang in de zebravis onderzoek, de noodzaak om vast te stellen en onderhouden van een productieve zebravis behuizing faciliteit neemt toe. Hoewel literatuur beschikbaar voor het behoud van een zebravis laboratorium wordt een beknopte video protocol ontbreekt. Deze video illustreert het protocol dat voor reguliere huisvesting, voeding, fokken en opvoeden van zebravis larven. Dit proces zal onderzoekers helpen bij het natuurlijke gedrag en optimale voorwaarden voor zebrafis begrijpenh veeteelt en dus het oplossen van experimentele problemen die voortkomen uit de vis houderijomstandigheden. Dit protocol zal van grote hulp aan onderzoekers van plan om een zebravis laboratorium op te richten, en ook voor studenten die van plan zijn om zebravis gebruikt als diermodel afstuderen.
Zebravis zijn afkomstig uit de rivier de Ganges in Noord-India en worden steeds populairder in het onderzoek, zowel in hun volwassen en larvale stadia 2, beoordeeld door Spence et al.. 3. Zebravis hebben een aantal voordelen ten opzichte van andere dierlijke modellen zoals een hoge vruchtbaarheid, gemak van onderhoud, optische klaring van embryo's, snelle embryonale ontwikkeling, en lage onderhoudskosten. Ze vatbaar zijn voor genetische manipulatie 6 en geschikt voor high-throughput drug screening 4,5. De bevruchting externe hetgeen voordelig is voor hun gebruik door ontwikkelingsbiologen. Door deze gunstige eigenschappen, zijn zebravis aan populariteit wint in de genetica 7, farmacologische 8 en gedragsonderzoek 9,10. Er zijn een aantal problemen voor het handhaven van een zebravis faciliteit en zebravis embryo veeteelt te verkrijgen. Hierin beschrijven we onze ervaringen en aanbevelingen bij het aanpakken van deze uitdagingen en oVERZICHT een protocol voor onderhoud van het systeem, het voeden, fokken en opvoeden van de larven.
Onderhoud van het systeem
Voor het behoud van de zebravis in een gezonde conditie, is het belangrijk om hen te voorzien van een schoon milieu in een goed functionerend aquarium systeem. Een belangrijk onderdeel hiervan is het wijzigen van de systeeminstellingen filters regelmatig zodat alle tanks juiste waterstroom en schoon water krijgen. Het is essentieel om het falen van de fiets-watervoorziening te vermijden elke tank als gevolg van geblokkeerde systeembuizen. De buizen kunnen worden gereinigd met een hogere dan normale waterdruk en debiet als verstopping optreedt. Idealiter zou ongeveer 10% van het water van het systeem worden vervangen dagelijks om een goede waterkwaliteit te behouden. Als alternatief kan het water worden vervangen terwijl het veranderen van de opvangbeker of Carbon filter. Dit zorgt ervoor dat vuil afgezet in de verbindingspijpen deze filters verwijderd. De kwaliteit van het water moet worden gecontroleerd op een regelmatige basis. Parameters zoals alkaliteit, pH, temperature, hardheid, ammoniak, opgeloste zuurstof, zoutgehalte, en geleidbaarheid moet worden beschouwd als belangrijke factoren in het vertegenwoordigen van de kwaliteit van het systeem water (zie tabel 2 voor details). Op zijn minst nitraat, moet de pH en de temperatuur worden gecontroleerd op een regelmatige basis om een goede waterkwaliteit te waarborgen voor huisvesting zebravis. Ideaal nitraat (NO 3 -) niveaus <50 mg / L 11, als hoog deze kunnen verminderd worden door het vervangen van het water in het circulatiesysteem met het verse water systeem. Af en toe, ik filters niet goed passen en lekken dus het is aan te raden om op lekken te controleren na een filter. Indien de waterstroom van de belangrijkste reservoir ofwel geblokkeerd nadat de waterpomp of wijzigen van een filter, kan de waterstroom worden hersteld door een los of verwijderen van de filter voor een paar seconden om een vacuüm wordt gegenereerd in de leidingen vrij. De tijd nodig om filters kan veranderen afhankelijk van verschillende factoren zoals de totale biologische belasting on het systeem schoon andere filters en vuil afgezet in de pijpen. Daarom moet filters onmiddellijk vervangen worden als ze verschijnen vuil of als alle tanks zijn niet het ontvangen van de juiste watertoevoer. Ook wordt aanbevolen dat de vis net worden gereinigd met 70% ethanol, en gespoeld met water om het te ontsmetten en laten drogen alvorens opnieuw te worden gebruikt. Drogen zorgt voor verdamping van ethanol die anders is giftig voor vissen.
De meeste systemen maken gebruik van de zebravis gechloreerd kraanwater, maar sommige systemen gedeïoniseerd water. Het is belangrijk om de geleidbaarheid van het water te houden systeem van 300 tot 1500 uS ~ Dit vermindert het energie de vis moet blijven lichaamszouten. Daarom kan zebravis niet worden bewaard in gedeïoniseerd water tenzij zouten worden toegevoegd aan de optimale geleiding te handhaven. Er bestaat een risico van mogelijke hoge koperconcentraties in het systeem water als leidingwater wordt gebruikt omdat de koolfilter niet verwijderd koper. Daarom users moet controleren voor koper concentraties en te voorkomen koperen leidingen waar mogelijk.
Feeding
Zebravis mag nooit worden overvoerd, omdat dit kan het nitraatgehalte te verhogen in het water, mogelijk van invloed hun broed-11, of de levensvatbaarheid, zoals sommige vissen kunnen sterven als gevolg van te veel eten. Wij raden het verstrekken van geen voedsel meer gedurende een voeding dan een tank van vis kan afmaken binnen 10 minuten. Het is zeer belangrijk om zout uit het pekelkreeftjes voordat deze aan de zebravis als boven zoutconcentratie dood veroorzaakt. Als meer zebravis eieren nodig kan vissen worden gevoed driemaal daags. Het reinigen van de kweker vis bakken elke dag verbetert ook de niveaus van de productie van eieren.
Bij het voederen van de aquatische habitats systemen die we meestal zet de waterpomp en luchtpomp, zodat de vissen het voedsel gedurende 10 minuten te eten. Dit vermindert de hoeveelheid voedsel die wordt gewassen in de filters. Echter, moeten gebruikers voorzichtig zijn om remEmber aan te zetten deze pompen daarna weer.
Teelt
Zebravissen zijn meestal op een optimale voedingsbodem toestand tussen ~ 3 en 18 maanden oud. Paarsgewijze fokken mag niet worden uitgevoerd gedurende twee opeenvolgende dagen 11, maar in-tank fokkerij kan dagelijks worden uitgevoerd als een tank kan bevatten vele vissen die de kans op hetzelfde paar van vis worden gekweekt voor twee dagen in een rij vermindert. Breeding dient evenwel regelmatig zelfs als de eieren niet vereist. Dit proces zorgt voor de fokseizoen van de vis wordt gehandhaafd. Het verdient aanbeveling dat er meer vrouwen dan mannen in een fokkerij set-up. Man zebravis veranderen hun vrouwelijke partners op een dagelijkse basis 12, die verder onderschrijft deze aanbeveling. Daarnaast worden, in ons laboratorium hebben we in eerste instantie problemen ondervonden met het fokken, echter met meer vrouwen dan mannen in een fokkerij set-up bijgedragen aan het oplossen van het probleem. Bovendien voeden met een hoog proteïnegehalte content dieet en Artemia twee tot drie keer per dag, vis mengen van verschillende tanks (van verschillende ouders), de temperatuur van de kweek set-up tussen 27 en 28 ° C, en knijpen de buik van vrouwen met geblokkeerde eierstok van buizen zachte massage verder verbeterd eiproductie. Wij raden het bijhouden van de vis lijnen / oorsprong te vermijden inteelt tussen broers en zussen. Dit verbetert embryoproductie. Het bijhouden van het aantal embryo's gelegd door vis uit elke tank is ook een aanrader. Dit helpt met het houden van een track van de beste broedende vissen tanks en het nemen van maatregelen om de fokkerij te verbeteren in de vis niet het leggen van eieren.
Verhoging van larven
Het voeden van de larven moeten beginnen vanaf 5 dpf (dagen na de bevruchting). Jonge larven gevoed kan worden met droogvoer van ~ 100 micron in grootte (bijvoorbeeld ZM100) of levend voer zoals paramecium en raderdiertjes (die stimuleert de groei). Het eten grootte kan langzaam worden verhoogdtot 200 micron (bijvoorbeeld ZM200) of 300/400 micron (bijvoorbeeld ZM300). Een populatie van volwassen vis moet rond 6-7 vis per liter water. Deze praktijk wordt aanbevolen voor een betere handhaving van de BZV (Biologisch Zuurstof Verbruik) van de tanks.
The authors have nothing to disclose.
De auteurs willen graag Tammy Esmaili bedanken voor haar hulp bij het beheer van laboratorium verbruiksartikelen. AA is de ontvanger van een PhD beurs van de Centre of Excellence voor de ziekte van Alzheimer Onderzoek en Zorg, School of Medical Sciences, Edith Cowan University. MC ontvangt PhD financiering steun van de Rotary Club, Perth. AM, zijn GV, KT, en RNM gefinancierd door Research van de McCusker Alzheimer stichting.
Name of reagent/equipment | Company | Catalogue number | |
Zebrafish circulating system | Aquatic Habitats, USA | AHAB stand-alone, bench-top systems | |
Sodium Bicarbonate | Sigma Aldrich | S6297 | |
Fish food dispenser/Dry food feeder | Aquatic Habitats, USA | AH19 | |
Microscope | Olympus | SZX12 | |
Dry Food | ZM Fish food, UK | ZM100, ZM200, ZM300 | |
Brine shrimp eggs | Salt Creek, Inc., USA | Premium Grade | |
In-tank breeders | Aquatic Habitats, USA | ITSTS-A | |
Activated carbon | Penn-Plax Pro-crab, USA | PBC3MF | |
Breeding tanks | Aquatic Habitats, USA | SBTANK (1L) Breeder Tank-2 (2L) |
|
Red sea salt | Red sea salt, USA | Local pet store/ www.redseafish.com |
|
Filters (Canister, filter pads, and UV) | Aquatic Habitats, USA | aquatichabitats.com | |
Siporax Media | Aquatic Habitats, USA | BF 820 | |
Brine shrimp net | Aquatic Habitats, USA | BSN 1 | |
Brine shrimp hatcher | Aquatic Habitats, USA | BS252 | |
Baffles | Aquatic Habitats, USA | aquatichabitats.com | |
Table 1. Table of specific reagents and equipment used in this protocol. |