このプロトコルは、ゼブラフィッシュの飼育に最適な条件を維持するために定期的なメンテナンスやケアについて概説します。ビデオでは、システムの保守、定期的な住宅、給餌、繁殖、およびゼブラフィッシュ幼生の引き上げのためのプロトコルを示しています。
このプロトコルは、ゼブラフィッシュの実験室の定期的ケアおよび保守について説明します。ゼブラフィッシュは現在、遺伝学、薬理学と行動研究で人気を集めている。脊椎動物のように、人間とゼブラフィッシュシェアかなりの遺伝子配列類似性および種々のヒト疾患状態の動物モデルとして使用されている。他の一般的な脊椎動物のモデルと比較して、ゼブラフィッシュの利点は、高い繁殖力、低メンテナンスコスト、透明な胚、かつ急速な発展があります。ゼブラフィッシュの研究への関心の拍車のために、生産的なゼブラフィッシュの住宅施設を設置し、及び維持する必要性も高まっている。文学はゼブラフィッシュの実験室のメンテナンスのために利用可能ですが、簡潔なビデオプロトコルが欠けている。このビデオでは、摂食飼育およびゼブラフィッシュ幼生の飼育、定期的な住宅のためのプロトコルを示しています。このプロセスは、研究者がzebrafisの自然な行動と最適な条件を理解するのに役立ちますH畜産それゆえ、魚の飼育条件に由来する実験的な問題のトラブルシューティングを行います。このプロトコルは、ゼブラフィッシュの実験室を確立するために、また、動物モデルとしてゼブラフィッシュを使用しようとしている学生を卒業する予定の研究者にとって非常に助けになるでしょう。
ゼブラフィッシュは、インド北部のガンジス川に由来し、その成人とスペンスらによって審査幼虫2、両方の研究で普及しつつある。3。ゼブラフィッシュは、高い繁殖力、メンテナンスのしやすさ、胚の光学クリアランス、急速な胚発生、低メンテナンスコストなどの他の動物モデルに比べていくつかの利点を有する。彼らは遺伝子操作6に従順で、4,5ハイスループット薬剤スクリーニングに適しています。彼らの受精は、発生生物学者による彼らの使用のために有利である外部にある。これらの有利な特性のために、ゼブラフィッシュは、遺伝学7、薬理8、行動研究9,10で人気を集めている。胚を取得するためにゼブラフィッシュ施設及びゼブラフィッシュの飼育を維持するために多くの課題があります。ここで、我々は、これらの課題とoに対処する私たちの経験と推奨事項について説明します繁殖と幼生の飼育、餌、システムメンテナンスのためのプロトコルをutline。
システム保守
健康な状態でのゼブラフィッシュを維持するためには、適切に機能して水槽システム内の清潔な環境でそれらを提供することが重要です。この重要な部分は、すべてのタンクは、適切な水の流れときれいな水を受けるように、定期的にシステムのフィルタを変更しています。それはブロックされ、システムのパイプに起因する各タンクに循環水供給の失敗を回避することが不可欠である。閉塞が発生した場合、パイプがより高く、通常の水の圧力と流量を用いて洗浄することができます。理想的には、システム上の水の約10%が良好な水質を維持するために毎日交換する必要があります。キャニスターやカーボンフィルターを変化させながら、あるいは、水を交換することができます。これは、これらのフィルタを接続する配管に堆積している汚れが除去されることを保証します。水の水質を定期的にチェックする必要があります。このようなアルカリ度などのパラメータは、pHは、temperatURE、硬度、アンモニア、溶存酸素、塩分濃度、導電率は、システムの水(詳細については表2を参照)の品質を表す重要な要素として考慮されるべきである。せめて硝酸塩、pH、および温度は、ハウジングゼブラフィッシュのための良好な水質を確保するために、定期的に監視する必要があります。理想的な硝酸塩(NO 3 – )濃度は<50 mg / Lで11アール、高い場合は、これらのレベルは、新鮮なシステム水と循環系中の水を交換することによって減らすことができます。時折、フィルタはうまく適合し、それがフィルタ変更時に漏れがないか確認することをお勧めしますので、漏れはありません。メイン貯水池からの水の流れは水ポンプを変更したり、フィルタを変更した後、いずれかのブロックされた場合、水流はパイプに生成されている任意の真空を解放するために数秒間フィルターを緩めたり取り外したりするのいずれかの方法で復元することができます。フィルタを変更するのに必要な時間は、そのような生物学的な総荷重Oなどの様々な要因によって異なる可能性がありますnシステム、他のフィルタの清潔さ、汚れがパイプ内に堆積。彼らは汚れて見える場合、またはすべてのタンクが正しい水の供給を受けていない場合は、したがって、フィルタはすぐに変更してください。また、漁網を70%エタノールで洗浄し、それを除染するために水で洗浄し、再利用される前に乾燥させることをお勧めします。乾燥は、特に魚に有毒であるエタノールの蒸発を確実にします。
ゼブラフィッシュシステムのほとんどは脱塩素水道水を使用していますが、一部のシステムでは、脱イオン水を使用しています。これが魚は体塩を維持するために必要なエネルギーを減少させるので、300〜1,500μSとの間のシステム水の導電率を維持することが重要である。塩が最適な導電率のレベルを維持するために追加されていない限り、したがって、ゼブラフィッシュを脱イオン水に保つことができない。カーボンフィルターは、銅が削除されないため、水道水を使用する場合は、システムの水の可能性が高い銅濃度の危険があります。従って、uSERSは、銅の濃度を確認し、可能であれば銅の配管を避けるべきである。
給餌
いくつかの魚は食べ過ぎが原因で死亡することもあるので、これは、おそらく彼らの繁殖11、または生存率に影響を与え、水の硝酸レベルを増加させることができるようにゼブラフィッシュはoverfedべきではありません。我々は魚のタンクが10分以内に完了することができますよりもいずれか授乳中なしより多くの食糧を提供することをお勧めします。それが過剰な塩分濃度は死を引き起こすとしてゼブラフィッシュにそれらを供給する前にブラインシュリンプから塩を除去することは非常に重要です。もっとゼブラフィッシュの卵が必要な場合には、魚は一日三回を供給することができます。毎日のブリーダー水槽を掃除しても産卵のレベルを向上させます。
水生生息地·システム上で供給する場合、我々は通常、魚は10分間の食品を食べることを許可するようにウォーターポンプと空気ポンプをオフにします。これは、フィルタに洗浄される食品の量を減少させる。ただし、ユーザーはREMに注意する必要がありますその後、再び、これらのポンプをオンにする燃えさし。
繁殖
ゼブラフィッシュは、〜3、生後18カ月の間の最適な飼育条件で通常です。ペアワイズ育種は2日間連続で11のために実行すべきではありません。タンクが2日連続で飼育されている魚の同じ組の可能性を減らすことができ、多くの魚を保持することができますしかし、タンク内の繁殖は、毎日行うことができます。繁殖は卵が必要とされない場合でも、一定の間隔を置いて行われるべきである。このプロセスでは、魚の繁殖サイクルが維持されるようになります。それは繁殖セットアップで男性よりも女性がいることをお勧めします。男性ゼブラフィッシュはさらに、この勧告をサポートして毎日12上の女性パートナーを変更してください。さらに、我々の研究室の中で、我々は最初にセットアップ問題を解決する助け繁殖に男性よりも女性を使用して、しかし、繁殖の問題を経験した。また、高タンパクコンテと供給NTダイエットやブラインシュリンプは、二から三倍の日、別のタンク(別の親)からの混合魚、繁殖の温度は27〜28℃の間のセットアップ、保守、および使用して、ブロックされた卵巣管で女性の腹を絞る穏やかなマッサージさらに改良産卵。私たちは、兄弟間での繁殖を避けるために、魚のライン/起源の記録を保管することをお勧め。これは、さらに胚の生産性が向上します。各タンクから魚によって築かれた胚の数の記録を保存することも推奨します。これは最高の繁殖水槽を追跡し、産卵しない魚で繁殖を改善するための措置をとることを支援します。
幼虫の引き上げ
幼虫の餌は5 DPF(日後に受精)から開始すべきである。若い幼虫は〜100サイズはミクロン( 例えば 、ZM100)、またはそのようなゾウリムシやワムシ(成長を刺激する)など、ライブ食品の乾燥食品を供給することができます。食品の大きさを徐々に増加させることができる200ミクロン( 例えば ZM200)または400分の300ミクロン( 例えば ZM300)へ。成魚の人口は水のリットル当たり6から7の魚の周りでなければなりません。このような行為は、タンクへのBOD(生物学的酸素要求量)のより良いメンテナンスのために推奨されます。
The authors have nothing to disclose.
著者らは、実験室の消耗品の管理に彼女の援助のためにタミーEsmailiに感謝したいと思います。 AAはアルツハイマー病研究とケア、医学、エディス·コーワン大学の学校のための優秀センターから博士課程の奨学金の受賞者です。 MCは、ロータリークラブ、パースから博士の資金支援を受けています。 AM、GV、KTとRNMはマッカスカーアルツハイマー病研究財団によって資金を供給されています。
Name of reagent/equipment | Company | Catalogue number | |
Zebrafish circulating system | Aquatic Habitats, USA | AHAB stand-alone, bench-top systems | |
Sodium Bicarbonate | Sigma Aldrich | S6297 | |
Fish food dispenser/Dry food feeder | Aquatic Habitats, USA | AH19 | |
Microscope | Olympus | SZX12 | |
Dry Food | ZM Fish food, UK | ZM100, ZM200, ZM300 | |
Brine shrimp eggs | Salt Creek, Inc., USA | Premium Grade | |
In-tank breeders | Aquatic Habitats, USA | ITSTS-A | |
Activated carbon | Penn-Plax Pro-crab, USA | PBC3MF | |
Breeding tanks | Aquatic Habitats, USA | SBTANK (1L) Breeder Tank-2 (2L) |
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Red sea salt | Red sea salt, USA | Local pet store/ www.redseafish.com |
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Filters (Canister, filter pads, and UV) | Aquatic Habitats, USA | aquatichabitats.com | |
Siporax Media | Aquatic Habitats, USA | BF 820 | |
Brine shrimp net | Aquatic Habitats, USA | BSN 1 | |
Brine shrimp hatcher | Aquatic Habitats, USA | BS252 | |
Baffles | Aquatic Habitats, USA | aquatichabitats.com | |
Table 1. Table of specific reagents and equipment used in this protocol. |