방법은 생쥐에서 인간의 retinoblastoma 종양을 전파하기 위해 설명되어 있습니다. 종양 세포에 직접 면역 결함 생쥐의 눈을에 주입하고 있습니다. 이차 종양이 성공적으로 직접적으로 인간의 종양과 교양 tumorspheres에서 수확을 모두 세포를 사용하여 설립되었습니다.
정의 줄기 세포 미디어에 Culturing의 retinoblastoma 종양 세포는 제한된 시간 동안 성장 유지 수있는 기본 tumorspheres에 상승을 제공합니다. 원래 종양에 비해 이러한 교양 tumorspheres은 현저하게 다른 세포 phenotypes 발생할 수 있습니다. 교양 세포가 새로운 종양을 형성의 기능을 가지고 데모는 교양 세포 모델에게 원래 종양의 생물학을 보장하는 것이 중요합니다.
/ – – 면역 결함 쥐들이 여기 Rag2를 사용하여 생체내 인간의 retinoblastoma의 종양 증식을위한 프로토콜을 제시한다. 낮은 통로 또는 murine 눈 유리체 캐비티에 직접 주입 갓 수확 인간 retinoblastoma의 종양에서 얻은 세포의 교양 인간 retinoblastoma의 tumorspheres는 2~4주 이내에 종양을 형성. 이러한 종양은 수확과 중 추가로 생체내에 murine 눈을 passaged이나 체외에서 tumorspheres로 성장하실 수 있습니다. 전파가 성공적으로 추가되므로 실험에 대한 인간의 retinoblastoma 조직의 지속적인 소스를 수립 최소한 세 구절에 대해 실시되었습니다.
웨슬리 S. 본드와 Lalita Wadhwa는 공동 첫번째 작가입니다.
여기 설명한 기술들은 intraocular, intravitreal 환경에서 전파 retinoblastoma의 종양을 용이하게합니다. intraocular 사출 기술은 retinoblastoma 유도 세포 라인 한뿐 아니라 intraocular 유전자 치료 2,3에 대한 바이러스 벡터를 제공하는에서 종양을 만들기 위해 과거에 사용되고 있습니다. 이 기술은 현재 성공적으로 기본 종양 및 사출 tumorspheres의뿐만 아니라 이종 이식 종양의 일련 전파의 세포를 직접 주입하여 인간 retinoblastoma의 종양을 생산하기 위해 이용되었다. 종양 형성 (보통 leukocoria)의 표시 증거는 대개 먼저 궤도를 둘러싼 세계 및 / 또는 조직의 intraocular 출혈과 팽창이 5-8주 이내에 개발하는 후 4 주 이내에 기록됩니다. 주입된 생쥐의 소수 민족은 눈꺼풀의 영구 폐쇄에 이르는, 주입 눈을 다치게. 이러한 경우에는 팽창은 종양 형성의 유일한 기호이다.
설립 이종 이식 종양의 전파는 매우 성공하지만 murine 이종 이식 종양의 확립, 모든 인간의 retinoblastoma의 종양과 함께 성공되지 않았습니다. 이 관찰은 invasiveness과 차별화 또는 다른 알려지지 않은 요소의 수준으로 기본 종양의 특정 특성, murine 안구 환경에서 계속 이러한 종양의 능력에 영향을 미치는있을 것입니다.
인간 retinoblastoma 종양에서 얻은 수있는 조직의 양은 매우 작은, 그리고 제한된 수명, 고체 종양의 조직학의 손실과 세포 표현형 변화로 체외에서 문화 인간 retinoblastoma 세포 수있는 능력에 상당한 제한이있다. 이 프로토콜은 인간의 종양을 전파하고 인간의 질병의 murine 모델을 수립하는 비교적 간단한 방법을 제공합니다. 이것은 체외에서 retinoblastoma와 환자의 종양 이외의 더 이상 유지 보수의 생물학의 생체내 실험에서 추가하실 수 있습니다.
The authors have nothing to disclose.
이 프로젝트에 대한 자금은 연구 및 망막 연구 재단 클레이튼 재단에 의해 제공됩니다.
Name | Company | Catalog # | Yorumlar |
---|---|---|---|
Phenylephrine HCl 2.5% | Bausch & Lomb | 053-11 | Ophthalmic solution |
30-ga Needle | BD | 305128 | Regular bevel |
10-mL Luer-Lock Syringe | BD | 309604 | |
3/10-cc Insulin Syringe | BD | 328431 | |
Alcohol swabs | BD | 326895 | |
6-Well Plate, Tissue Culture-Treated | BD | 353046 | |
Proparacaine HCl 0.5% | Butler AHS | 017239 | Ophthalmic solution |
Ketamine HCl 100mg/mL | Fort Dodge | 4402A | |
10-μL Hamilton Syringe | Hamilton Company | 7648-01 | |
32-ga Hamilton Needle | Hamilton Company | 7803-04 | Custom length – 0.5″ |
Neurobasal-A Media | Invitrogen | 10888-022 | |
B-27 Supplement Minus Vitamin A, 50X | Invitrogen | 12587-010 | |
RPMI-1640 Media | Mediatech | 10-040-CV | |
Non-essential Amino Acid Solution, 100X | Mediatech | 25-025-CI | |
L-Glutamine, 100X | Mediatech | 25-005-CI | |
Disposable #11 Scalpel | Miltex | 4-411 | |
Rodent Anesthesia Combo | n/a | n/a | In-house pharmacy formulation (ketamine 37.6 mg/mL, xylazine 1.92 mg/mL, acepromazine 0.38 mg/mL) |
Recombinant Human Epidermal Growth Factor (EGF) | STEMCELL Technologies | 02633 | Reconstitute at 10 μg/mL stock solution |
Recombinant Human Basic Fibroblast Growth Factor (bFGF) | STEMCELL Technologies | 02634 | Reconstitute at 10 μg/mL stock solution |
OMS-75 Operation Microscope | Topcon Medical Systems | OMS-75 | This model has been discontinued |
10% Formalin | VWR | 95042-908 |