Summary

Accesso al cervello suino tramite craniectomia pneumatica ad alta velocità

Published: July 05, 2024
doi:

Summary

Questo protocollo descrive l’esecuzione di una craniectomia utilizzando un trapano pneumatico ad alta velocità su un maiale Landrace danese di 3 mesi. L’accesso avviene attraverso l’osso frontale e rivela la dura madre ventrale e gli emisferi cerebrali sottostanti. Questa procedura consente l’accesso a gran parte del cervello del maiale.

Abstract

L’uso dei suini come modello animale sperimentale è particolarmente rilevante nella ricerca neuroscientifica, poiché il sistema nervoso centrale (SNC) suino e umano condividono molte importanti proprietà funzionali e architettoniche. Di conseguenza, si prevede che i suini avranno un ruolo sempre più importante nella ricerca futura su varie malattie neurologiche. Qui viene descritto un metodo per eseguire una craniectomia anteriore attraverso l’osso frontale suino. Dopo un’incisione sulla linea mediana e la successiva esposizione dell’osso frontale suino, vengono utilizzati punti di riferimento anatomici per garantire la posizione ottimale della craniectomia. Con un assottigliamento attento e graduale dell’osso frontale con una fresa arrotondata, si ottiene un’apertura rettangolare verso la dura madre e gli emisferi cerebrali sottostanti. Il metodo presentato richiede alcuni materiali chirurgici, tra cui un trapano pneumatico ad alta velocità, e un certo grado di esperienza chirurgica. Le potenziali complicanze includono lesioni involontarie della dura madre o del seno sagittale dorsale. Tuttavia, il metodo è semplice, efficiente in termini di tempo e offre un alto grado di riproducibilità per i ricercatori. Se eseguita correttamente, la tecnica espone un’ampia porzione del cervello di maiale non interessato per vari neuromonitoraggi o analisi.

Introduction

In generale, i modelli animali vengono utilizzati quando limitazioni pratiche e/o etiche vietano l’uso di pazienti umani per esaminare malattie o testare metodi chirurgici. Nuovi modelli animali sono generalmente stabiliti per fornire nuove conoscenze con valore traslazionale alle condizioni umane. I roditori sono spesso utilizzati per considerazioni pratiche e finanziarie, ma hanno un valore traslazionale limitato per l’uomo, soprattutto a causa di sostanziali differenze anatomiche1. I maiali, tuttavia, offrono diversi vantaggi rispetto ai roditori. Non solo i maiali condividono diverse caratteristiche anatomiche, fisiologiche, metaboliche e genetiche chiave con gli esseri umani, ma le dimensioni dei sistemi di organi suini possono essere abbinate al peso per assomigliare agli organi umani 2,3. Ciò conferisce ai suini un ruolo unico tra i modelli animali chirurgici e nell’addestramento procedurale4. Sebbene l’uso di modelli suini richieda determinate capacità pratiche e finanziarie rispetto all’uso di roditori, i suini offrono un’opzione più accettabile sia dal punto di vista finanziario che etico rispetto all’uso di primati non umani.

Il cervello suino è di particolare interesse nella ricerca traslazionale delle neuroscienze. In primo luogo, l’architettura del cervello di maiale è simile a quella del cervello umano, poiché entrambi sono a predominanza della sostanza bianca e girrencefalici 3,5,6. In secondo luogo, le maggiori dimensioni del cervello nei suini rispetto ai roditori consentono l’uso di apparecchiature chirurgiche e varie modalità di imaging equivalenti a quelle utilizzate in ambito clinico 7,8. Di conseguenza, negli ultimi decenni sono stati ampiamente utilizzati vari modelli suini nella ricerca neuroscientifica9. La maggior parte di questi modelli di SNC suino, tuttavia, richiede un’analisi diretta del tessuto cerebrale, che può essere ottenuta in vari modi (ad esempio, impianto di cateteri o elettrodi, biopsie tissutali, ecc.) 10. Poiché la maggior parte di queste modalità richiede un certo grado di strumentalizzazione e l’accesso diretto al cervello, è necessario considerare diversi approcci per l’accesso chirurgico.

Questo metodo prevede l’esecuzione di una craniectomia anteriore attraverso l’osso frontale su una femmina di suino Landrace danese sedata di 3 mesi. Lo scopo generale di questo manoscritto è quello di descrivere un metodo per esporre una grande porzione del cervello suino ventrale attraverso una craniectomia utilizzando un trapano pneumatico ad alta velocità. Il primo passo è posizionare il soggetto in una posizione adeguata con la testa sollevata. Poiché il cranio suino è molto diverso da quello degli esseri umani, il secondo passo prevede la pianificazione del posizionamento della craniectomia utilizzando vari punti di riferimento anatomici. Il terzo passo consiste nell’accedere alla dura madre sottostante che copre entrambi gli emisferi senza danneggiarla.

Protocol

Tutti gli esperimenti sugli animali descritti sono stati eseguiti presso l’ospedale universitario di Aalborg, in Danimarca, in conformità con le leggi vigenti e sotto l’approvazione dell’Ispettorato danese per gli esperimenti sugli animali (licenza n. 2020-15-0201-00401). Per questo studio sono stati utilizzati suini domestici, femmina, di circa 40 kg e 3 mesi di età. I dettagli relativi ai reagenti e alle attrezzature utilizzate sono elencati nella Tabella dei materiali. <str…

Representative Results

La posizione prona della testa del maiale fornisce un accesso ottimale per il chirurgo durante la procedura e l’uso di sacchi di sabbia stabilizzanti riduce il rischio di spostamenti involontari nella posizione della testa del suino durante la perforazione. Durante questa dimostrazione, i punti di riferimento anatomici superficiali del cranio superiore del maiale (sia le creste orbitali superiori che la cresta nucale) (Figura 1 e Figura 3</str…

Discussion

La procedura dimostrata prevede diversi passaggi critici. In primo luogo, la pianificazione accurata della posizione della craniectomia è fondamentale a causa della composizione del cranio suino. Poiché lo spessore dell’osso frontale suino aumenta ai bordi laterali, posizionare l’apertura troppo lateralmente11 può rendere difficile raggiungere la dura madre durante la perforazione. Inoltre, localizzare correttamente l’apertura all’interno della linea mediana è importante per ridurre il rischio…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Gli autori desiderano esprimere la nostra gratitudine per il supporto e l’esperienza tecnica condivisa dal personale del Laboratorio Biomedico dell’Ospedale Universitario di Aalborg, in Danimarca.

Materials

10 mL plastic syrringes Becton, Dickinson and Company 303219
107 Microdialysis pump M Dialysis P000127  107 Microdialysis Pump
2 mL plastic syrringes Becton, Dickinson and Company 300928
25 mm, 18 G needles Becton, Dickinson and Company 304100
Bair Hugger heater 3M B5005241003
Bair Hugger heating blanket 3M B5005241003
Batery for microdialysis pump M Dialysis 8001788 Battery 6V, 106 & MD Pump
Dissector Karl Storz 223535 Flattended 3 mm dissector
Endotracheal tube size 6.5 DVMed DVM-107860 Cuffed endotracheal tube
Euthasol Vet Dechra Veterinary Products A/S 380019 phentobarbital for euthanazia, 400 mg/mL
Farabeuf Rougine Mahr Surgical Flat headed rougine (12 mm)
Foley Catheter 12 F Becton, Dickinson and Company D175812E Catherter with in-built thermosensor
Intravenous sheath Coris Avanti Avanti Cordis Femoral Sheath 6 F
Microdialysis brain catheters M Dialysis P000050 membrane length 10 mm -shaft 100 mm 4/pkg
Microdialysis syringe M Dialysis 8010191  106 Pump Syringe 20/pkg
Microvials for microdialysis sampling M Dialysis P000001 Microvials 250/pkg
Operating table
Pneumatic high-speed drill Medtronic Medtronic Midas Rex 7 drill
Primus respirator Dräger Respirator with in-built vaporiser for supplementary Sevofluran anesthesia
Rounded diamond drill Medtronic 7BA40D-MN
Self-retaining retractor World Precission Instruments 501722 Weitlander retractor, self-retaining, 14 cm blunt
Sterile Saline Fresnius Kabi 805541 1000 mL
Sterile surgical swaps
Surgical scalpel no 24 Swann Morton 5.03396E+12 Swann Morton Sterile Disposable Scalpel No. 24
Zoletil Vet Virbac Medical mixture for induction of anesthesia

References

  1. Mariager, T., Bjarkam, C., Nielsen, H., Bodilsen, J. Experimental animal models for brain abscess: a systematic review. Br J Neurosurg. , (2022).
  2. Bassols, A., et al. The pig as an animal model for human pathologies: A proteomics perspective. Proteomics Clin Appl. 8, 715-731 (2014).
  3. Meurens, F., Summerfield, A., Nauwynck, H., Saif, L., Gerdts, V. The pig: A model for human infectious diseases. Trends Microbiol. 20 (1), 50-57 (2012).
  4. Swindle, M. M., Makin, A., Herron, A. J., Clubb, F. J., Frazier, K. S. Swine as models in biomedical research and toxicology testing. Vet Pathol. 49 (2), 344-356 (2012).
  5. Lind, N. M., et al. The use of pigs in neuroscience: Modeling brain disorders. Neurosci Biobehav Rev. 31 (5), 728-751 (2007).
  6. Hoffe, B., Holahan, M. R. The use of pigs as a translational model for studying neurodegenerative diseases. Front Physiol. 10, 838 (2019).
  7. Ettrup, K. S., et al. Basic surgical techniques in the göttingen minipig: Intubation, bladder catheterization, femoral vessel catheterization, and transcardial perfusion. J Vis Exp. 52, e2652 (2011).
  8. Bjarkam, C. R., Glud, A. N., Orlowski, D., Sørensen, J. C. H., Palomero-Gallagher, N. The telencephalon of the Göttingen minipig, cytoarchitecture and cortical surface anatomy. Brain Struct Funct. 222 (5), 2093-2114 (2017).
  9. Hou, N., Du, X., Wu, S. Advances in pig models of human diseases. Animal Model Exp Med. 5 (2), 141-152 (2022).
  10. Munk, M., Poulsen, F. R., Larsen, L., Nordström, C. H., Nielsen, T. H. Cerebral metabolic changes related to oxidative metabolism in a model of bacterial meningitis induced by lipopolysaccharide. Neurocrit Care. 29 (3), 496-503 (2018).
  11. Kyllar, M., et al. Radiography, computed tomography and magnetic resonance imaging of craniofacial structures in pig. J Vet Med C: Anat Histol Embryol. 43 (6), 435-452 (2014).
  12. Mariager, T., et al. Continuous evaluation of single-dose moxifloxacin concentrations in brain extracellular fluid, cerebrospinal fluid, and plasma: A novel porcine model. J Antimicrobial Chemother. , (2024).
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Mariager, T., Holmen Terkelsen, J., Reidies Bjarkam, C. Accessing the Porcine Brain via High-Speed Pneumatic Drill Craniectomy. J. Vis. Exp. (209), e66788, doi:10.3791/66788 (2024).

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