Uma Técnica Aprimorada para Detecção de Trimetilamina em Medicina Derivada de Animais por Cromatografia Gasosa Headspace-Espectrometria de Massas em Tandem Quadrupolo

O tratamento de doenças humanas utilizando produtos derivados de partes animais e/ou seus subprodutos (aqui referidos como medicamentos derivados de animais) está recebendo atenção crescente. Eles desempenham um papel importante no tratamento de câncer, doenças cardiovasculares, cirrose hepática, mastite e outras doenças, com as vantagens de um forte efeito, pequena dosagem e eficácia clínica significativa e específica. No entanto, medicamentos de origem animal geralmente apresentam odor proeminente de peixe, o que afeta sobremaneira a adesão dos pacientes, sendo especialmente desfavoráveis para crianças ^1,2. O odor de peixe provém principalmente das proteínas, aminoácidos, gorduras e outras substâncias contidas no medicamento, que são decompostas através da oxidação de ácidos graxos, degradação de aminoácidos e outras formas de produzir uma variedade de substâncias com odor de peixe ^2,3,4. Dentre eles, a trimetilamina (TMA) é um gás volátil com odor de peixe que existe amplamente em alimentos de origem animal em decomposição ou apodrecidos⁵.

Até o momento, cromatografia gasosa (CG), cromatografia líquida (CL), cromatografia iônica, espectrofotometria, cromatografia líquida-espectrometria de massas (LC-MS) e métodos sensores têm sido comumente utilizados para detectar TMA no ambiente, alimentos e urina 6,7,8,9. Tendo em vista a baixa contaminação da coluna GC e do sistema de injeção, bem como a alta sensibilidade, reprodutibilidade e baixo limite de detecção (0,1-1 mg/kg), o método de cromatografia gasosa headspace-espectrometria de massas (HS-GC-MS) foi preferido para análise biológica e de alimentos⁸. Atualmente, apenas a China estabeleceu um padrão nacional para TMA em alimentos, e HS-GC-MS é o primeiro método no padrão GB5009.179-2016¹⁰. Portanto, o método HS-GC-MS acima foi selecionado para detectar TMA em medicina derivada de animais. No estágio inicial, nosso grupo de pesquisa descobriu que o padrão de detecção de HS-GC-MS para TMA em alimentos poderia detectar o odor de peixe em vários medicamentos derivados de animais. Combinado com os resultados dos estudos^11,12, pôde-se provar que a MAT é a substância-chave comum do odor de peixe em medicamentos derivados de animais. No entanto, verificou-se que a reprodutibilidade dos resultados experimentais foi pobre, havendo problemas como escape de ATM e baixa estabilidade, o que não pôde ser verificado pela metodologia. Isso pode ser devido ao fato de que a lixívia foi injetada no frasco do headspace e a rápida reação ácido-base levou ao aumento da pressão no frasco, escapando assim da TMA do poro de injeção, impedindo a detecção estável e precisa da MAT. Portanto, este estudo propôs um método aprimorado de detecção por cromatografia gasosa em headspace-espectrometria de massas quadrupolo em tandem (HS-GC-MS/MS) para resolver esses problemas.

O protocolo melhora o pré-tratamento da amostra separando os reagentes ácido-base no pré-tratamento com a ajuda de parafina sólida, um bom material de mudança de fase sólido-líquido. Como a parafina se liquefez lentamente com o aumento da temperatura do forno termostático, a TMA também foi liberada lentamente no frasco do headspace selado, evitando o aumento de pressão causado pela violenta e rápida reação ácido-base e garantindo uma detecção estável e precisa da TMA. Além disso, a injeção de headspace combinada com os modos de monitoramento de reação múltipla (MRM) em GC-MS/MS efetivamente suprimiu a interferência química da matriz e garantiu a confiabilidade dos resultados. Os resultados da validação metodológica comprovaram que a linearidade, o teste de precisão e a taxa de recuperação do método de detecção aprimorado podem atender aos requisitos, com boa reprodutibilidade e alta sensibilidade.