Мы иллюстрируем методы, связанные с скринингом и идентификацией микробов, продуцирующих биоповерхностные вещества. Также представлены методы хроматографической характеризации и химической идентификации биоповерхностных веществ, определяющие промышленную применимость биоповерхностного вещества в повышении остаточного нефтеотдачи.
Биосурфактанты представляют собой поверхностно-активные соединения, способные снижать поверхностное натяжение между двумя фазами разной полярности. Биозащитные вещества становятся многообещающими альтернативами химическим поверхностно-активным веществам из-за меньшей токсичности, высокой биоразлагаемости, экологической совместимости и устойчивости к экстремальным условиям окружающей среды. Здесь мы иллюстрируем методы, используемые для скрининга микробов, способных производить биоповерхностные вещества. Микробы, производящие биоповерхност, были идентифицированы с использованием анализа капельного коллапса, разбрасывания нефти и индекса эмульсии. Производство биоповерхностного вещества было подтверждено путем определения снижения поверхностного натяжения среды из-за роста микробных членов. Мы также описываем методы, связанные с характеристикой и идентификацией биоповерхностных веществ. Тонкослойную хроматографию экстрагированного биоповерхностного вещества с последующим дифференциальным окрашиванием пластин проводили для определения природы биоповерхностного вещества. LCMS, 1H ЯМР и FT-IR использовались для химической идентификации биоповерхностного вещества. Далее мы иллюстрируем методы оценки применения комбинации полученных биотвердых веществ для повышения остаточного нефтеотдачи в моделируемой колонне пескоструйной пачки.
Биоповерхностные вещества представляют собой амфипатические поверхностно-активные молекулы, продуцируемые микроорганизмами, которые обладают способностью уменьшать поверхность и межфазное натяжение между двумя фазами1. Типичный биотвердовой фактор содержит гидрофильную часть, которая обычно состоит из фрагмента сахара или пептидной цепи или гидрофильной аминокислоты и гидрофобной части, которая состоит из насыщенной или ненасыщенной цепи жирных кислот2. Из-за своей амфипатической природы биоповерхностные вещества собираются на границе раздела между двумя фазами и уменьшают межфазное напряжение на границе, что облегчает диспергирование одной фазы в другую 1,3. Различные типы биозащищенных веществ, о которых сообщалось до настоящего времени, включают гликолипиды, в которых углеводы связаны с длинноцепочечными алифатическими или гидроксиалифатическими кислотами через эфирные связи (например, рамнолипиды, трегалолипиды и софоролипиды), липопептиды, в которых липиды прикреплены к полипептидным цепям (например, сурфактин и лихенизин), и полимерные биозащитные вещества, которые обычно состоят из полисахарид-белковых комплексов (например, эмульсан, липосан, аласан и липоманнан)4. Другие типы биозащищенных веществ, продуцируемых микроорганизмами, включают жирные кислоты, фосфолипиды, нейтральные липиды и биоповерхностные частицы5. Наиболее изученным классом биоповерхностных веществ являются гликолипиды, и среди них большинство исследований было зарегистрировано на рамнолипидах6. Рамнолипиды содержат одну или две молекулы рамнозы (которые образуют гидрофильную часть), связанные с одной или двумя молекулами длинноцепочечной жирной кислоты (обычно гидрокси-декановой кислоты). Рамнолипиды являются первичными гликолипидами, о которых впервые сообщалось из Pseudomonas aeruginosa7.
Биоповерхностные вещества приобретают все большее внимание по сравнению со своими химическими аналогами из-за различных уникальных и отличительных свойств, которые они предлагают8. К ним относятся более высокая специфичность, более низкая токсичность, большее разнообразие, простота приготовления, более высокая биоразлагаемость, лучшее пенообразование, экологическая совместимость и активность в экстремальных условиях9. Структурное разнообразие биоповерхностных веществ (рисунок S1) является еще одним преимуществом, которое дает им преимущество перед химическими аналогами10. Они, как правило, более эффективны и действенны при более низких концентрациях, поскольку их критическая концентрация мицелл (CMC) обычно в несколько раз ниже, чем у химических поверхностно-активных веществ11. Сообщалось, что они обладают высокой термостабильностью (до 100 °C) и могут переносить более высокий рН (до 9) и высокие концентрации соли (до 50 г/л)12 , тем самым обеспечивая ряд преимуществ в промышленных процессах, которые требуют воздействия экстремальных условий13. Биоразлагаемость и более низкая токсичность делают их пригодными для экологических применений, таких как биоремедиация. Из-за преимуществ, которые они предлагают, они получают повышенное внимание в различных отраслях промышленности, таких как пищевая, сельскохозяйственная, моющая, косметическая и нефтяная промышленность11. Биозащищенные вещества также привлекли большое внимание в рекультивации нефти для удаления нефтяных загрязнителей и токсичных загрязнителей14.
Здесь мы сообщаем о производстве, характеристике и применении биоповерхностных веществ, полученных Rhodococcus sp. IITD102, Lysinibacillus sp. IITD104 и Paenibacillus sp. IITD108. Этапы, связанные с скринингом, определением характеристик и применением комбинации биоповерхностных веществ для повышения нефтеотдачи, описаны на рисунке 1.
Рисунок 1: Метод повышения нефтеотдачи пластов с использованием комбинации биоповерхностно-активных веществ. Показан пошаговый рабочий процесс. Работа велась в четыре этапа. Сначала микробные штаммы культивировали и просеивали для производства биоповерхностного вещества различными анализами, которые включали анализ на падение коллапса, анализ разбрасывания масла, анализ индекса эмульсии и измерение поверхностного натяжения. Затем биоповерхностные вещества были извлечены из бесклеточного бульона, и их природа была идентифицирована с помощью тонкослойной хроматографии, и они были дополнительно идентифицированы с использованием LCMS, ЯМР и FT-IR. На следующем этапе извлеченные биоповерхностные вещества смешивали вместе, и потенциал полученной смеси для повышения нефтеотдачи был определен с использованием метода колонной пескоструйной упаковки. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть увеличенную версию этого рисунка.
Скрининг этих микробных штаммов для получения биоповерхностных веществ проводился путем коллапса капель, разбрасывания масла, анализа индекса эмульсии и определения снижения поверхностного натяжения бесклеточной среды за счет роста микробов. Биоповерхностные вещества были извлечены, охарактеризованы и химически идентифицированы С помощью LCMS, 1H ЯМР и FT-IR. Наконец, смесь биоповерхностных веществ, полученных этими микробами, была приготовлена и использована для извлечения остаточной нефти в смоделированной колонне песчаной пачки.
Настоящее исследование лишь иллюстрирует методы, связанные с скринингом, идентификацией, структурной характеристикой и применением комбинации биоповерхностных веществ для повышения остаточного нефтеотдачи. Он не дает подробной функциональной характеристики биоповерхностных веществ, продуцируемых микробными штаммами15,16. Различные эксперименты, такие как определение критических мицелл, термогравиметрический анализ, смачиваемость поверхности и биоразлагаемость, выполняются для детальной функциональной характеристики любого биоповерхностного вещества. Но поскольку этот документ является методологическим документом, основное внимание уделяется скринингу, идентификации, структурной характеристике и применению комбинации биоповерхностных веществ для повышения остаточного нефтеотдачи; эти эксперименты не были включены в данное исследование.
Биоповерхностные вещества являются одной из наиболее универсальных групп биологически активных компонентов, которые становятся привлекательными альтернативами химическим поверхностно-активным веществам. Они имеют широкий спектр применения во многих отраслях промышленности, таки?…
The authors have nothing to disclose.
Авторы хотели бы поблагодарить Департамент биотехнологии правительства Индии за финансовую поддержку.
1 ml pipette | Eppendorf, Germany | G54412G | |
1H NMR | Bruker Avance AV-III type spectrometer,USA | ||
20 ul pipette | Thermo scientific, USA | H69820 | |
Autoclave | JAISBO, India | Ser no 5923 | Jain Scientific |
Blue flame burner | Rocker scientific, Taiwan | dragon 200 | |
Butanol | GLR inovations, India | GLR09.022930 | |
C18 column | Agilent Technologies, USA | 770995-902 | |
Centrifuge | Eppendorf, Germany | 5810R | |
Chloroform | Merck, India | 1.94506.2521 | |
Chloroform-d | SRL, India | 57034 | |
Falcon tubes | Tarsons, India | 546041 | Radiation sterilized polypropylene |
FT-IR | Thermo Fisher Scientific, USA | Nicolet iS50 | |
Fume hood | Khera, India | 47408 | Customied |
glacial acetic acid | Merck, India | 1.93002 | |
Glass beads | Merck, India | 104014 | |
Glass slides | Polar industrial Corporation, USA | Blue Star | 75 mm * 25 mm |
Glass wool | Merk, India | 104086 | |
Hydrochloric acid | Merck, India | 1003170510 | |
Incubator | Thermo Scientific, USA | MaxQ600 | Shaking incubator |
Incubator | Khera, India | Sunbim | |
Iodine resublimed | Merck, India | 231-442-4 | resublimed Granules |
K12 –Kruss tensiometer | Kruss Scientific, Germany | K100 | |
Laminar air flow cabnet | Thermo Scientific, China | 1300 Series A2 | |
LCMS | Agilent Technologies, USA | 1260 Infinity II | |
Luria Broth | HIMEDIA, India | M575-500G | Powder |
Methanol | Merck, India | 107018 | |
Ninhydrin | Titan Biotech Limited, India | 1608 | |
p- anisaldehyde | Sigma, USA | 204-602-6 | |
Petri plate | Tarsons, India | 460090-90 MM | Radiation sterilized polypropylene |
Saponin | Merck, India | 232-462-6 | |
Sodium chloride | Merck, India | 231-598-3 | |
Test tubes | Borosil, India | 9800U06 | Glass tubes |
TLC plates | Merck, India | 1055540007 | |
Vortex | GeNei, India | 2006114318 | |
Water Bath | Julabo, India | SW21C |