نوضح الطرق التي ينطوي عليها فحص وتحديد الميكروبات المنتجة للفاعل بالسطح الحيوي. كما يتم عرض طرق للتوصيف الكروماتوغرافي والتحديد الكيميائي للخافضات للتوتر السطحي الحيوي ، وتحديد التطبيق الصناعي للفاعل بالسطح الحيوي في تعزيز استخراج النفط المتبقي.
المواد الخافضة للتوتر السطحي الحيوي هي مركبات نشطة على السطح قادرة على تقليل التوتر السطحي بين مرحلتين من الأقطاب المختلفة. وقد ظهرت المواد الخافضة للتوتر السطحي الحيوي كبدائل واعدة للمواد الكيميائية الخافضة للتوتر السطحي بسبب انخفاض السمية وارتفاع قابلية التحلل البيولوجي والتوافق البيئي والتسامح مع الظروف البيئية القاسية. هنا ، نوضح الطرق المستخدمة لفحص الميكروبات القادرة على إنتاج المواد الخافضة للتوتر السطحي الحيوي. تم تحديد الميكروبات المنتجة للفاعل بالسطح الحيوي باستخدام انهيار السقوط ، وانتشار النفط ، واختبارات مؤشر المستحلب. تم التحقق من صحة إنتاج الفاعل بالسطح الحيوي من خلال تحديد انخفاض التوتر السطحي للوسائط بسبب نمو الأعضاء الميكروبية. كما نصف الطرق التي ينطوي عليها توصيف وتحديد المواد الخافضة للتوتر السطحي الحيوي. تم إجراء كروماتوغرافيا الطبقة الرقيقة للفاعل بالسطح الحيوي المستخرج متبوعا بتلطيخ تفاضلي للألواح لتحديد طبيعة الفاعل بالسطح الحيوي. تم استخدام LCMS و 1H NMR و FT-IR لتحديد الفاعل بالسطح الحيوي كيميائيا. كما نوضح طرق تقييم تطبيق مزيج من المواد الخافضة للتوتر السطحي الحيوي المنتجة لتعزيز استخراج النفط المتبقي في عمود حزمة رملية محاكاة.
المواد الخافضة للتوتر السطحي الحيوي هي الجزيئات الأمفيباثية النشطة على السطح التي تنتجها الكائنات الحية الدقيقة التي لديها القدرة على تقليل السطح والتوتر بين الوجوه بين مرحلتين1. يحتوي الفاعل بالسطح الحيوي النموذجي على جزء محب للماء يتكون عادة من مويتي السكر أو سلسلة الببتيد أو الأحماض الأمينية المحبة للماء وجزء مسعور يتكون من سلسلة أحماض دهنية مشبعة أو غير مشبعة2. نظرا لطبيعتها البرمائية ، تتجمع المواد الخافضة للتوتر السطحي الحيوي في الواجهة بين المرحلتين وتقلل من التوتر البيني عند الحدود ، مما يسهل تشتت مرحلة واحدة إلىالمرحلة الأخرى 1,3. تشمل الأنواع المختلفة من المواد الخافضة للتوتر السطحي الحيوي التي تم الإبلاغ عنها حتى الآن الجليكوليبيدات التي ترتبط فيها الكربوهيدرات بالأحماض الأليفاتية طويلة السلسلة أو الهيدروكسي الأليفاتيك عبر روابط الإستر (على سبيل المثال ، rhamnolipids و trehalolipids و sophorolipids) ، lipopeptides التي ترتبط فيها الدهون بسلاسل polypeptide (على سبيل المثال ، surfactin و lichenysin) ، والمواد الخافضة للتوتر السطحي الحيوي البوليمرية التي تتكون عادة من مجمعات بروتين السكريات (على سبيل المثال ، مستحلب ، ليبوسان ، ألاسان وليبومانان)4. أنواع أخرى من المواد الخافضة للتوتر السطحي الحيوي التي تنتجها الكائنات الحية الدقيقة تشمل الأحماض الدهنية والدهون الفوسفاتية والدهون المحايدة والجسيمات السطحية الحيوية5. الفئة الأكثر دراسة من المواد الخافضة للتوتر السطحي الحيوي هي glycolipids ومن بينها تم الإبلاغ عن معظم الدراسات على rhamnolipids6. تحتوي Rhamnolipids على واحد أو جزيئين من الرامنوز (الذي يشكل الجزء المحب للماء) مرتبط بواحد أو جزيئين من الأحماض الدهنية طويلة السلسلة (عادة حمض الهيدروكسي ديكانويك). Rhamnolipids هي جليكوليبيدات أولية تم الإبلاغ عنها أولا من Pseudomonas aeruginosa7.
تكتسب المواد الخافضة للتوتر السطحي الحيوي تركيزا متزايدا مقارنة بنظيراتها الكيميائية بسبب العديد من الخصائص الفريدة والمميزة التي تقدمها8. وتشمل هذه الخصائص أعلى ، وسمية أقل ، وتنوع أكبر ، وسهولة التحضير ، وقابلية أعلى للتحلل البيولوجي ، ورغوة أفضل ، والتوافق البيئي والنشاط في ظل الظروف القاسية9. التنوع الهيكلي للمواد الخافضة للتوتر السطحي الحيوي (الشكل S1) هو ميزة أخرى تمنحها ميزة على نظيراتها الكيميائية10. وهي عموما أكثر فعالية وكفاءة عند تركيزات أقل لأن تركيزها الحرج من الميسيلات (CMC) عادة ما يكون أقل بعدة مرات من المواد الكيميائية الخافضة للتوتر السطحي11. وقد أفيد بأنها مستقرة حراريا للغاية (تصل إلى 100 درجة مئوية) ويمكن أن تتحمل درجة حموضة أعلى (تصل إلى 9) وتركيزات ملح عالية (تصل إلى 50 جم / لتر)12 وبالتالي توفر العديد من المزايا في العمليات الصناعية ، والتي تتطلب التعرض للظروف القاسية13. التحلل البيولوجي وانخفاض السمية تجعلها مناسبة للتطبيقات البيئية مثل المعالجة الحيوية. بسبب المزايا التي تقدمها ، فقد تم الحصول على اهتمام متزايد في مختلف الصناعات مثل الصناعات الغذائية والزراعية والمنظفات ومستحضرات التجميل والبترولالصناعة 11. كما اكتسبت المواد الخافضة للتوتر السطحي الحيوي الكثير من الاهتمام في معالجة النفط لإزالة الملوثات النفطية والملوثات السامة14.
هنا نقوم بالإبلاغ عن إنتاج وتوصيف وتطبيق المواد الخافضة للتوتر السطحي الحيوي التي تنتجها Rhodococcus sp. IITD102 و Lysinibacillus sp. IITD104 و Paenibacillus sp. IITD108. ويوضح الشكل 1 الخطوات التي ينطوي عليها فحص وتوصيف وتطبيق مزيج من المواد الخافضة للتوتر السطحي الحيوي لتعزيز استخراج النفط.
الشكل 1: طريقة لتعزيز استخراج النفط باستخدام مزيج من المواد الخافضة للتوتر السطحي الحيوي. يتم عرض تدفق العمل التدريجي. تم تنفيذ العمل في أربع خطوات. أولا ، تم استزراع السلالات الميكروبية وفحصها لإنتاج الفاعل بالسطح الحيوي بواسطة فحوصات مختلفة ، والتي شملت فحص انهيار السقوط ، وفحص انتشار الزيت ، وفحص مؤشر المستحلب ، وقياس التوتر السطحي. بعد ذلك ، تم استخراج المواد الخافضة للتوتر السطحي الحيوي من المرق الخالي من الخلايا وتم تحديد طبيعتها باستخدام كروماتوغرافيا الطبقة الرقيقة وتم تحديدها بشكل أكبر باستخدام LCMS و NMR و FT-IR. وفي الخطوة التالية، تم خلط المواد الخافضة للتوتر السطحي الحيوي المستخرجة معا وتم تحديد إمكانات الخليط الناتج لتعزيز استخراج الزيت باستخدام تقنية عمود حزمة الرمال. يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
تم فحص هذه السلالات الميكروبية لإنتاج المواد الخافضة للتوتر السطحي الحيوي عن طريق انهيار السقوط ، وانتشار الزيت ، وفحص مؤشر المستحلب وتحديد الحد من التوتر السطحي للوسط الخالي من الخلايا بسبب نمو الميكروبات. تم استخراج المواد الخافضة للتوتر السطحي الحيوي وتمييزها وتحديدها كيميائيا بواسطة LCMS و 1H NMR و FT-IR. وأخيرا ، تم إعداد خليط من المواد الخافضة للتوتر السطحي الحيوي التي تنتجها هذه الميكروبات وتم استخدامه لاستعادة الزيت المتبقي في عمود حزمة رملية محاكاة.
توضح هذه الدراسة فقط الأساليب المستخدمة في فحص وتحديد وتوصيف هيكلي وتطبيق مزيج الفاعل بالسطح الحيوي على تعزيز استخراج النفط المتبقي. وهو لا يوفر توصيفا وظيفيا مفصلا للمواد الخافضة للتوتر السطحي الحيوي التي تنتجها السلالات الميكروبية15,16. يتم إجراء تجارب مختلفة مثل تحديد الميسيل الحرج ، والتحليل الحراري الوزني ، وقابلية البلل السطحي ، والتحلل البيولوجي للتوصيف الوظيفي التفصيلي لأي خافض للتوتر السطحي الحيوي. ولكن بما أن هذه الورقة هي ورقة أساليب، فإن التركيز ينصب على الفحص، والتحديد، والتوصيف الهيكلي، وتطبيق مزيج الفاعل بالسطح الحيوي على تعزيز استخراج النفط المتبقي؛ لم يتم تضمين هذه التجارب في هذه الدراسة.
المواد الخافضة للتوتر السطحي الحيوي هي واحدة من المجموعة الأكثر تنوعا من المكونات النشطة بيولوجيا التي أصبحت بدائل جذابة للخافضات للتوتر السطحي الكيميائية. لديهم مجموعة واسعة من التطبيقات في العديد من الصناعات مثل المنظفات والدهانات ومستحضرات التجميل والمواد الغذائية والمستحضرات الص?…
The authors have nothing to disclose.
ويود المؤلفان أن يشكرا إدارة التكنولوجيا الأحيائية في حكومة الهند على الدعم المالي.
1 ml pipette | Eppendorf, Germany | G54412G | |
1H NMR | Bruker Avance AV-III type spectrometer,USA | ||
20 ul pipette | Thermo scientific, USA | H69820 | |
Autoclave | JAISBO, India | Ser no 5923 | Jain Scientific |
Blue flame burner | Rocker scientific, Taiwan | dragon 200 | |
Butanol | GLR inovations, India | GLR09.022930 | |
C18 column | Agilent Technologies, USA | 770995-902 | |
Centrifuge | Eppendorf, Germany | 5810R | |
Chloroform | Merck, India | 1.94506.2521 | |
Chloroform-d | SRL, India | 57034 | |
Falcon tubes | Tarsons, India | 546041 | Radiation sterilized polypropylene |
FT-IR | Thermo Fisher Scientific, USA | Nicolet iS50 | |
Fume hood | Khera, India | 47408 | Customied |
glacial acetic acid | Merck, India | 1.93002 | |
Glass beads | Merck, India | 104014 | |
Glass slides | Polar industrial Corporation, USA | Blue Star | 75 mm * 25 mm |
Glass wool | Merk, India | 104086 | |
Hydrochloric acid | Merck, India | 1003170510 | |
Incubator | Thermo Scientific, USA | MaxQ600 | Shaking incubator |
Incubator | Khera, India | Sunbim | |
Iodine resublimed | Merck, India | 231-442-4 | resublimed Granules |
K12 –Kruss tensiometer | Kruss Scientific, Germany | K100 | |
Laminar air flow cabnet | Thermo Scientific, China | 1300 Series A2 | |
LCMS | Agilent Technologies, USA | 1260 Infinity II | |
Luria Broth | HIMEDIA, India | M575-500G | Powder |
Methanol | Merck, India | 107018 | |
Ninhydrin | Titan Biotech Limited, India | 1608 | |
p- anisaldehyde | Sigma, USA | 204-602-6 | |
Petri plate | Tarsons, India | 460090-90 MM | Radiation sterilized polypropylene |
Saponin | Merck, India | 232-462-6 | |
Sodium chloride | Merck, India | 231-598-3 | |
Test tubes | Borosil, India | 9800U06 | Glass tubes |
TLC plates | Merck, India | 1055540007 | |
Vortex | GeNei, India | 2006114318 | |
Water Bath | Julabo, India | SW21C |