الالتقاط بمساعدة الراتنج إلى جانب وضع علامات الكتلة الترادفية متساوية الضغط من أجل القياس الكمي المضاعف لأكسدة ثيول البروتين
Summary
أكسدة ثيول البروتين لها آثار كبيرة في ظل الظروف الفسيولوجية والفيزيولوجية الطبيعية الطبيعية. وصفنا تفاصيل طريقة البروتينات الأكسدة والاختزال الكمية ، والتي تستخدم الالتقاط بمساعدة الراتنج ، ووضع العلامات متساوية الضغط ، وقياس الطيف الكتلي ، مما يتيح التحديد والقياس الكمي لبقايا السيستين المؤكسدة عكسيا من البروتينات.
Abstract
ظهرت مؤخرا تعديلات مؤكسدة عكسية على ثيول البروتين كوسطاء مهمين للوظيفة الخلوية. فيما يلي وصف الإجراء التفصيلي لطريقة البروتينات الكمية للأكسدة والاختزال التي تستخدم الالتقاط بمساعدة الراتنج (RAC) بالاشتراك مع وضع العلامات متساوية الضغط لعلامة الكتلة الترادفية (TMT) وقياس الطيف الكتلي الترادفي اللوني السائل (LC-MS / MS) للسماح بالقياس الكمي العشوائي المتعدد لثيول البروتين المؤكسد على مستوى البروتين. توفر المعلومات الكمية الخاصة بالموقع حول بقايا السيستين المؤكسدة نظرة ثاقبة إضافية للتأثيرات الوظيفية لهذه التعديلات.
سير العمل قابل للتكيف عبر العديد من أنواع العينات ، بما في ذلك الخلايا المستزرعة (على سبيل المثال ، الثدييات ، بدائية النواة) والأنسجة الكاملة (مثل القلب والرئة والعضلات) ، والتي يتم تحللها / تجانسها في البداية ومع ألكيلات الثيول الحرة لمنع الأكسدة الاصطناعية. ثم يتم تقليل ثيول البروتين المؤكسد والتقاطه بواسطة راتنج تقارب الثيول ، والذي يبسط ويبسط خطوات سير العمل من خلال السماح بإجراء إجراءات الهضم ووضع العلامات والغسيل دون نقل إضافي للبروتينات / الببتيدات. أخيرا ، يتم استخلاص الببتيدات الموسومة وتحليلها بواسطة LC-MS / MS للكشف عن التغيرات المتكافئة الشاملة المتعلقة بأكسدة الثيول عبر البروتين بأكمله. تعمل هذه الطريقة على تحسين فهم دور التنظيم المعتمد على الأكسدة والاختزال بشكل كبير في ظل الحالات الفسيولوجية والفيزيولوجية المرضية المتعلقة بأكسدة ثيول البروتين.
Introduction
في ظل ظروف الاستتباب ، تولد الخلايا أنواعا تفاعلية من الأكسجين أو النيتروجين أو الكبريت تساعد على تسهيل العمليات ، مثل التمثيل الغذائي والإشارات1،2،3 ، وتمتد إلى كل من بدائيات النوى وحقيقيات النوى. المستويات الفسيولوجية لهذه الأنواع التفاعلية ضرورية للوظيفة الخلوية المناسبة ، والمعروفة أيضا باسم “eustress”1,4. في المقابل ، يمكن أن تؤدي زيادة المؤكسدات التي تؤدي إلى اختلال التوازن بين المؤكسدات ومضادات الأكسدة إلى الإجهاد التأكسدي ، أو “الضيق”1 ، مما يؤدي إلى تلف الخلايا. تقوم المواد المؤكسدة بتحويل الإشارات إلى مسارات بيولوجية عن طريق تعديل الجزيئات الحيوية المختلفة ، بما في ذلك البروتين والحمض النووي والحمض النووي الريبي والدهون. على وجه الخصوص ، بقايا السيستين من البروتينات هي مواقع شديدة التفاعل عرضة للأكسدة بسبب مجموعة الثيول على السيستين ، والتي تتفاعل مع أنواع مختلفة من المؤكسدات5. وهذا يؤدي إلى مجموعة متنوعة من التعديلات اللاحقة للترجمة القائمة على الأكسدة والاختزال (PTMs) للسيستين ، بما في ذلك النيتروسيل (SNO) ، والغلوتاثيونيل (SSG) ، والسلفنيل (SOH) ، والكبريت (SSH) ، والكبريت (SSnH) ، والأسيلة ، وثاني كبريتيد. تشمل الأشكال التي لا رجعة فيها من أكسدة السيستين الكبريتنيل (SO2H) والسلفونيل (SO3H).
قد تؤدي التعديلات المؤكسدة القابلة للانعكاس لبقايا السيستين أدوارا وقائية تمنع المزيد من الأكسدة التي لا رجعة فيها أو تعمل كجزيئات إشارات للمسارات الخلوية في اتجاه مجرى النهر 6,7. تسمح قابلية انعكاس بعض PTMs الأكسدة والاختزال ثيول لمواقع السيستين بالعمل ك “مفاتيح أكسدة”8,9 ، حيث تؤدي التغييرات في حالة الأكسدة والاختزال لهذه المواقع إلى تغيير وظيفة البروتين لتنظيم دورها في العمليات العابرة. لوحظت التأثيرات التعديلية ل PTMs10 الأكسدة والاختزال في العديد من جوانب وظيفة البروتين11 ، بما في ذلك الحفز 12 ، تفاعلات البروتين والبروتين13 ، تغيير التشكيل14 ، تنسيق أيون المعادن 15 ، أو ربط المثبط الدوائي16. بالإضافة إلى ذلك ، تشارك PTMs الأكسدة والاختزال في مواقع السيستين للبروتينات التي تنظم المسارات مثل النسخ17 أو الترجمة 18 أو التمثيل الغذائي19. بالنظر إلى تأثير الأكسدة والاختزال PTMs على وظيفة البروتين والعمليات البيولوجية ، من المهم تحديد مدى الأكسدة التي يخضع لها موقع السيستين استجابة لاضطراب حالة الأكسدة والاختزال.
يركز تحديد مواقع السيستين ذات حالات الأكسدة والاختزال المتغيرة على مقارنة حالة الأكسدة على المستوى الخاص بالموقع بين الظروف الطبيعية والمضطربة. غالبا ما تستخدم قياسات تغيير الطيات لتحديد المواقع التي تم تغييرها بشكل كبير لأن هذا يساعد المستخدمين على تفسير مواقع السيستين التي قد تكون ذات أهمية فسيولوجية للدراسة. بدلا من ذلك ، تعطي القياسات المتكافئة لأكسدة الثيول القابلة للانعكاس عبر نوع معين من العينة صورة عامة للحالة الفسيولوجية فيما يتعلق بالأكسدة الخلوية ، وهو قياس مهم غالبا ما يتم تجاهله وعدم استخدامه. يعتمد القياس الكيميائي للتعديل على تحديد النسبة المئوية للثيول المعدل كنسبة إلى إجمالي ثيول البروتين (المعدل وغير المعدل)20,21. نتيجة لذلك ، توفر القياسات المتكافئة قياسا أكثر دقة من تغيير الطي ، خاصة عند استخدام مطياف الكتلة. يمكن التحقق من أهمية الزيادة في الأكسدة بسهولة أكبر باستخدام القياس المتكافئ لتحديد إشغال PTM لموقع سيستين معين. على سبيل المثال ، يمكن أن تنتج زيادة 3 أضعاف في أكسدة الثيول عن انتقال أقل من 1٪ إلى 3٪ أو ما يصل إلى 30٪ إلى 90٪. قد يكون لزيادة الأكسدة بمقدار 3 أضعاف لموقع بنسبة إشغال 1٪ فقط تأثير ضئيل على وظيفة البروتين. ومع ذلك ، فإن زيادة 3 أضعاف لموقع مع إشغال 30 ٪ في حالة الراحة قد تتأثر بشكل كبير. يمكن أن تكشف القياسات المتكافئة ، عند إجراؤها بين إجمالي الثيول المؤكسد والتعديلات المؤكسدة المحددة ، بما في ذلك الجلوتاثيونيل البروتيني (SSG) والنيتروسيل (SNO) ، عن النسب والمعلومات الكمية فيما يتعلق بأنواع تعديل محددة.
نظرا لأن أكسدة الثيول العكسية عادة ما تكون تعديلا ما بعد الترجمة منخفض الوفرة ، فقد تم تطوير طرق متعددة لإثراء البروتينات التي تحتوي على هذه التعديلات من العينات البيولوجية. يتضمن النهج المبكر الذي ابتكره جافري وآخرون ، المسمى تقنية تبديل البيوتين (BST)22 ، خطوات متعددة حيث يتم حظر الثيول غير المعدل من خلال الألكلة ، ويتم تقليل الثيول المعدل بشكل عكسي إلى ثيول حر ناشئ ، ويتم تمييز الثيول الحر الناشئ بالبيوتين ، ويتم إثراء البروتينات الموسومة عن طريق سحب تقارب الستربتافيدين إلى أسفل. تم استخدام هذه التقنية لتحديد SNO و SSG في العديد من الدراسات ويمكن تكييفها للتحقيق في أشكال أخرى من أكسدة الثيول القابلة للانعكاس23,24. بينما تم استخدام BST للتحقيق في أشكال مختلفة من أكسدة الثيول القابلة للانعكاس ، فإن أحد المخاوف في هذا النهج هو أن التخصيب يتأثر بالارتباط غير المحدد للبروتينات غير الحيوية بالستربتافيدين. نهج بديل تم تطويره في مختبرنا ، يسمى الالتقاط بمساعدة الراتنج (RAC) 25،26 (الشكل 1) ، يتحايل على مسألة إثراء مجموعات الثيول عبر نظام البيوتين ستربتافيدين.
بعد الحد من الثيول المؤكسد عكسيا ، يتم إثراء البروتينات ذات الثيول الحرة الوليدة بواسطة راتنج تقارب الثيول ، الذي يلتقط تساهميا مجموعات الثيول الحرة ، مما يسمح بتخصيب أكثر تحديدا للبروتينات المحتوية على السيستين من BST. إن اقتران RAC مع قوة تعدد الإرسال للتطورات الحديثة في وضع العلامات متساوية الضغط وقياس الطيف الكتلي يخلق سير عمل قويا وحساسا لإثراء وتحديد وقياس بقايا السيستين المؤكسدة بشكل عكسي على مستوى البروتين. مكنت التطورات الحديثة في قياس الطيف الكتلي من التنميط الأعمق بكثير لبروتين الأكسدة والاختزال الثيول ، مما زاد من فهم كل من سبب وتأثير أكسدة ثيول البروتين27. تسمح المعلومات المكتسبة من البيانات الكمية الخاصة بالموقع بإجراء مزيد من الدراسات للتأثيرات الميكانيكية والآثار النهائية للتعديلات المؤكسدة العكسية28. وقد وفر استخدام سير العمل هذا نظرة ثاقبة للتأثيرات الفسيولوجية لأكسدة السيستين القابلة للانعكاس فيما يتعلق بالأحداث الفسيولوجية الطبيعية مثل الشيخوخة ، حيث اختلفت مستويات SSG فيما يتعلق بالعمر. تم عكس تأثيرات الشيخوخة على SSG جزئيا باستخدام SS-31 (elamipretide) ، وهو ببتيد جديد يعزز وظيفة الميتوكوندريا ويقلل من مستويات SSG في الفئران المسنة ، مما يتسبب في أن يكون لديهم ملف تعريف SSG أكثر تشابها مع الفئران الصغيرة29.
وقد تبين أن الظروف الفيزيولوجية المرضية المنسوبة إلى التعرض للجسيمات النانوية تنطوي على SSG في نموذج البلاعم الفئرانية. باستخدام RAC إلى جانب قياس الطيف الكتلي ، أظهر المؤلفون أن مستويات SSG كانت مرتبطة ارتباطا مباشرا بدرجة الإجهاد التأكسدي وضعف وظيفة البلعمة البلاعمية. كشفت البيانات أيضا عن اختلافات خاصة بالمسار استجابة للمواد النانوية الهندسية المختلفة التي تحفز درجات مختلفة من الإجهاد التأكسدي30. أثبتت الطريقة أيضا فائدتها في الأنواع بدائية النواة ، حيث تم تطبيقها لدراسة تأثيرات الدورات النهارية في البكتيريا الزرقاء الضوئية فيما يتعلق بأكسدة الثيول. لوحظت تغيرات واسعة في أكسدة الثيول عبر العديد من العمليات البيولوجية الرئيسية ، بما في ذلك نقل الإلكترون ، وتثبيت الكربون ، وتحلل السكر. علاوة على ذلك ، من خلال التحقق المتعامد ، تم تأكيد تعديل العديد من المواقع الوظيفية الرئيسية ، مما يشير إلى الأدوار التنظيمية لهذه التعديلات المؤكسدة6.
هنا ، نصف تفاصيل سير العمل الموحد (الشكل 1) ، مما يدل على فائدة نهج RAC لإثراء إجمالي ثيول السيستين المؤكسد للبروتينات ووضع العلامات اللاحقة والقياس الكمي المتكافئ. تم تنفيذ سير العمل هذا في دراسات حالة الأكسدة والاختزال في أنواع مختلفة من العينات ، بما في ذلك مزارع الخلايا27،30 والأنسجة الكاملة (على سبيل المثال ، العضلات الهيكلية والقلب والرئة)29،31،32،33. على الرغم من عدم تضمينه هنا ، إلا أن بروتوكول RAC يمكن تكييفه بسهولة للتحقيق في أشكال محددة من تعديلات الأكسدة والاختزال القابلة للانعكاس ، بما في ذلك SSG و SNO و S-acylation ، كما ذكرنا سابقا25،29،34.
Protocol
Representative Results
Discussion
تم استخدام الالتقاط بمساعدة الراتنج عبر مجموعة متنوعة من أنواع العينات والأنظمة البيولوجية للتحقيق في التعديلات التأكسدية لبقايا السيستين25،29،30. تسمح هذه الطريقة بتقييم العينات على مستويات وقراءات متعددة ، بما في ذلك البروتينات والببت…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
تم دعم أجزاء من العمل من قبل منح المعاهد الوطنية للصحة R01 DK122160 و R01 HL139335 و U24 DK112349
Materials
| 2-(Pyridyldithio)ethylamine hydrochloride | Med Chem Express | HY-101794 | Reagent for in-house resin synthesis |
| 2.0 mL LoBind centrifuge tubes | Eppendorf | 22431048 | |
| 5.0 mL LoBind centrifuge tubes | Eppendorf | 30108310 | |
| 5.0 mL round bottom tubes | Falcon | 352054 | |
| Acetone | Fisher Scientific | A949-1 | |
| Acetonitrile | Sigma Aldrich | 34998 | |
| Activated Thiol–Sepharose 4B | Sigma Aldrich | T8512 | Potential replacement for thiol-affinity resin |
| Amicon Ultra 0.5 mL centrifugal filter | Millipore Sigma | UFC5010BK | |
| Ammonium bicarbonate | Sigma Aldrich | 09830 | |
| Bicinchonicic acid (BCA) | Thermo Scientific | 23227 | Protein Assay Reagent |
| Centrifuge | Eppendorf | 5810R | |
| Centrifuge | Eppendorf | 5415R | |
| Dithiothreitol (DTT) | Thermo Scientific | 20291 | |
| EDTA | Sigma Aldrich | E5134 | |
| HEPES buffer | Sigma Aldrich | H4034 | |
| Homogenizer | BioSpec Products | 985370 | |
| Iodoacetimide (IAA) | Sigma Aldrich | I1149 | |
| N-ethylmaleimide | Sigma Aldrich | 4259 | |
| NHS-Activated Sepharose 4 Fast Flow | Cytiva | 17-0906-01 | Reagent for in-house resin synthesis |
| QIAvac 24 Plus vacuum manifold | Qiagen | 19413 | |
| Sodium chloride | Sigma Aldrich | S3014 | |
| Sodium dodecyl sulfate (SDS) | Sigma Aldrich | L6026 | |
| Sonicator | Branson | 1510R-MT | |
| Spin columns | Thermo Scientific | 69705 | |
| Strata C18-E reverse phase columns | Phenomenex | 8B-S001-DAK | Peptide desalting |
| Thermomixer | Eppendorf | 5355 | |
| Thiopropyl Sepharose 6B | GE Healthcare | 17-0420-01 | Thiol-affinity resin; *Production of Thiopropyl Sepharose 6B resin has been discontinued by the manufacturer (see protocol for details). |
| TMT isobaric labels (16 plex) | Thermo Scientific | A44522 | Peptide labeling reagent; available in multiple formats |
| Triethylammonium bicarbonate buffer (TEAB) | Sigma Aldrich | T7408 | |
| Trifluoroacetic acid (TFA) | Sigma Aldrich | T6508 | |
| Triton X-100 | Sigma Aldrich | T8787 | |
| Trypsin | Promega | V5820 | |
| Urea | Sigma Aldrich | U5378 | |
| Vacufuge Plus speedvac | Eppendorf | 22820001 | vacuum concentrator |
| Vortex mixer | Scientific Industries | SI-0236 |
References
- Sies, H., Jones, D. P. Reactive oxygen species (ROS) as pleiotropic physiological signalling agents. Nature Reviews Molecular Cell Biology. 21 (7), 363-383 (2020).
- Adams, L., Franco, M. C., Estevez, A. G. Reactive nitrogen species in cellular signaling. Experimental Biology and Medicine. 240 (6), 711-717 (2015).
- Olson, K. R. The biological legacy of sulfur: A roadmap to the future. Comparative Biochemistry and Physiology Part A: Molecular & Integrative Physiology. 252, 110824 (2021).
- Sies, H. Oxidative eustress: on constant alert for redox homeostasis. Redox Biology. 41, 101867 (2021).
- Poole, L. B. The basics of thiols and cysteines in redox biology and chemistry. Free Radical Biology & Medicine. 80, 148-157 (2015).
- Guo, J., et al. Proteome-wide light/dark modulation of thiol oxidation in cyanobacteria revealed by quantitative site-specific redox proteomics. Molecular & Cellular Proteomics. 13 (12), 3270-3285 (2014).
- Shi, X., Qiu, H. Post-translational S-nitrosylation of proteins in regulating cardiac oxidative stress. Antioxidants. 9 (11), 1051 (2020).
- Fra, A., Yoboue, E. D., Sitia, R. Cysteines as redox molecular switches and targets of disease. Frontiers in Molecular Neuroscience. 10, 167 (2017).
- Klomsiri, C., Karplus, P. A., Poole, L. B. Cysteine-based redox switches in enzymes. Antioxidants & Redox Signaling. 14 (6), 1065-1077 (2011).
- Go, Y. M., Jones, D. P. The redox proteome. Journal of Biological Chemistry. 288 (37), 26512-26520 (2013).
- Bak, D. W., Bechtel, T. J., Falco, J. A., Weerapana, E. Cysteine reactivity across the subcellular universe. Current Opinion in Chemical Biology. 48, 96-105 (2019).
- Skryhan, K., et al. The role of cysteine residues in redox regulation and protein stability of Arabidopsis thaliana starch synthase 1. PLoS One. 10 (9), 0136997 (2015).
- Su, Z., et al. Global redox proteome and phosphoproteome analysis reveals redox switch in Akt. Nature Communications. 10 (1), 5486 (2019).
- Liebthal, M., Schuetze, J., Dreyer, A., Mock, H. -. P., Dietz, K. -. J. Redox conformation-specific protein-protein interactions of the 2-cysteine peroxiredoxin in Arabidopsis. Antioxidants. 9 (6), 515 (2020).
- Pace, N. J., Weerapana, E. Zinc-binding cysteines: diverse functions and structural motifs. Biomolecules. 4 (2), 419-434 (2014).
- Schwartz, P. A., et al. Covalent EGFR inhibitor analysis reveals importance of reversible interactions to potency and mechanisms of drug resistance. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 111 (1), 173 (2014).
- Sevilla, E., Bes, M. T., González, A., Peleato, M. L., Fillat, M. F. Redox-based transcriptional regulation in prokaryotes: revisiting model mechanisms. Antioxidants & Redox Signaling. 30 (13), 1651-1696 (2018).
- Topf, U., et al. Quantitative proteomics identifies redox switches for global translation modulation by mitochondrially produced reactive oxygen species. Nature Communications. 9 (1), 324 (2018).
- Gao, X. -. H., et al. Discovery of a redox thiol switch: implications for cellular energy metabolism. Molecular & Cellular Proteomics. 19 (5), 852-870 (2020).
- Prus, G., Hoegl, A., Weinert, B. T., Choudhary, C. Analysis and interpretation of protein post-translational modification site stoichiometry. Trends in Biochemical Sciences. 44 (11), 943-960 (2019).
- Zhang, T., Gaffrey, M. J., Li, X., Qian, W. J. Characterization of cellular oxidative stress response by stoichiometric redox proteomics. American Journal of Physiology. Cell Physiology. 320 (2), 182-194 (2021).
- Jaffrey, S. R., Erdjument-Bromage, H., Ferris, C. D., Tempst, P., Snyder, S. H. Protein S-nitrosylation: a physiological signal for neuronal nitric oxide. Nature Cell Biology. 3 (2), 193-197 (2001).
- Alcock, L. J., Perkins, M. V., Chalker, J. M. Chemical methods for mapping cysteine oxidation. Chemical Society Reviews. 47 (1), 231-268 (2018).
- Li, R., Kast, J. Biotin switch assays for quantitation of reversible cysteine oxidation. Methods in Enzymology. 585, 269-284 (2017).
- Guo, J., et al. Resin-assisted enrichment of thiols as a general strategy for proteomic profiling of cysteine-based reversible modifications. Nature Protocols. 9 (1), 64-75 (2014).
- Liu, T., et al. High-throughput comparative proteome analysis using a quantitative cysteinyl-peptide enrichment technology. Analytical Chemistry. 76 (18), 5345-5353 (2004).
- Duan, J., et al. Stochiometric quantification of the thiol redox proteome of macrophages reveals subcellular compartmentalization and susceptibility to oxidative perturbations. Redox Biology. 36, 101649 (2020).
- Mitchell, A. R., et al. Redox regulation of pyruvate kinase M2 by cysteine oxidation and S-nitrosation. Biochemical Journal. 475 (20), 3275-3291 (2018).
- Campbell, M. D., et al. Improving mitochondrial function with SS-31 reverses age-related redox stress and improves exercise tolerance in aged mice. Free Radical Biology & Medicine. 134, 268-281 (2019).
- Duan, J., et al. Quantitative profiling of protein S-glutathionylation reveals redox-dependent regulation of macrophage function during nanoparticle-induced oxidative stress. ACS Nano. 10 (1), 524-538 (2016).
- Wang, J., et al. Protein thiol oxidation in the rat lung following e-cigarette exposure. Redox Biology. 37, 101758 (2020).
- Kramer, P. A., et al. Fatiguing contractions increase protein S-glutathionylation occupancy in mouse skeletal muscle. Redox Biology. 17, 367-376 (2018).
- Chiao, Y. A., et al. Late-life restoration of mitochondrial function reverses cardiac dysfunction in old mice. Elife. 9, 55513 (2020).
- Forrester, M. T., et al. Site-specific analysis of protein S-acylation by resin-assisted capture. Journal of Lipid Research. 52 (2), 393-398 (2011).
- Su, D., et al. Quantitative site-specific reactivity profiling of S-nitrosylation in mouse skeletal muscle using cysteinyl peptide enrichment coupled with mass spectrometry. Free Radical Biology & Medicine. 57, 68-78 (2013).
- Su, D., et al. Proteomic identification and quantification of S-glutathionylation in mouse macrophages using resin-assisted enrichment and isobaric labeling. Free Radical Biology & Medicine. 67, 460-470 (2014).
- Searle, B. C., Yergey, A. L. An efficient solution for resolving iTRAQ and TMT channel cross-talk. Journal of Mass Spectrometry. 55 (8), 4354 (2020).
- Duan, J., Gaffrey, M. J., Qian, W. J. Quantitative proteomic characterization of redox-dependent post-translational modifications on protein cysteines. Molecular BioSystems. 13 (5), 816-829 (2017).
- Behring, J. B., et al. Spatial and temporal alterations in protein structure by EGF regulate cryptic cysteine oxidation. Science Signaling. 13 (615), 7315 (2020).
- Shakir, S., Vinh, J., Chiappetta, G. Quantitative analysis of the cysteine redoxome by iodoacetyl tandem mass tags. Analytical and Bioanalytical Chemistry. 409 (15), 3821-3830 (2017).
- Gorin, G., Martic, P. A., Doughty, G. Kinetics of the reaction of N-ethylmaleimide with cysteine and some congeners. Archives of Biochemistry and Biophysics. 115 (3), 593-597 (1966).
- Hsu, M. -. F., et al. Distinct effects of N-ethylmaleimide on formyl peptide- and cyclopiazonic acid-induced Ca2+ signals through thiol modification in neutrophils. Biochemical Pharmacology. 70 (9), 1320-1329 (2005).
- Li, R., Huang, J., Kast, J. Identification of total reversible cysteine oxidation in an atherosclerosis model using a modified biotin switch assay. Journal of Proteome Research. 14 (5), 2026-2035 (2015).
- Wang, J., et al. Integrated dissection of cysteine oxidative post-translational modification proteome during cardiac hypertrophy. Journal of Proteome Research. 17 (12), 4243-4257 (2018).
- Patra, K. K., Bhattacharya, A., Bhattacharya, S. Molecular dynamics investigation of a redox switch in the anti-HIV protein SAMHD1. Proteins. 87 (9), 748-759 (2019).
