이 원고는 마우스의 frarearenal 복부 대어타에 배치 된 카테터를 통해 단일 신장에 표적 전달방법을 설명합니다.
신장 연구 분야에서 약물 표적의 효율적인 평가를 위해 증가 되고 특정 신장 노출을 가능하게 하기 위하여 지시된 주사를 위한 필요가 있습니다. 특정 장기에 약물의 축적 불리 하 고 원치 않는 효과 발생할 수 있습니다., 주사의 특성에 따라. 본 명세서의 유출 및/또는 축적을 최소화하기 위해, 본 명세서의 방법은 신장 동맥에 카테터를 삽입하여 신장 동맥 혈류로 제형을 지시하고, 신장 동맥으로 분기하는 바로 아래, 신장 동맥 전체에 걸쳐 제제를 배포하는 것으로.
이 원고는 방법에 대한 자세한 설명뿐만 아니라 도전과 어려움을 제공합니다. 그것은 멸균 조건 하에서 정확도를 요구하는 미세 수술의 이 모형으로 숙련되기 위하여 실험자가 지도합니다. 속도는 허혈을 최소화 하 고 절차를 연습 불리 한 효과 없이 성공적인 주사의 기회를 증가 시킬 것 이다 에 대 한 중요 한. 주입및 재퍼퓨전 과 주입된 부피 사이의 시간을 조절함으로써 다른 장기로유출될 위험이 완화됩니다.
이 기술은 단일 투자 전략에 적합합니다.
제약 산업 내의 전임상 연구 분야에서 모델 및 방법 개발은 일상 업무의 일부입니다. 특정 장기에 약물을 직접 하는 능력에 대 한 증가 관심이 있다, 또는 장기의 심지어 별도 구획, 주요 유출/함정 없이, 혈 류를 통해, 다른 조직으로. 이는 다른 질병 부위의 모델에서 약물 표적의 효율적인 평가를 위한 증가 및 특이적 노출을 가능하게 하기 위해 1,2,3,4.
물질을 전달하는 일반적인 방법은 이 원고에 기술된 방법보다 덜 침습적이기 때문에 전신 경로(예를 들어, 꼬리 정맥을 통해)에 의한 것입니다. 그러나, 전신 투여는 폐, 간 및 비장 2,3,5와같은 여과 기관을 통과할 때 의도된 표적 기관보다 다른 조직에서 화합물의 신진 대사 또는 축적위험이 증가한다. 운명적인 조직에 도달하지 않는 것 외에도, 이것은 잠재적으로 주입의 특성에 따라 불리한 및 /또는 원치 않는 효과를 초래할 수 있습니다. 아주 작은 분자만이 여과 기관의 모세혈관을 통과하고 그러므로 표적으로 한 납품은 더 큰 분자 6와함께 일하는 경우에 특히 중요합니다.
주입된 제제의 유출 및/또는 축적을 최소화하기 위해, 본 명세서에서, 본명 술의 방법은 복동맥에 삽입된 카테터를 통해 신장 동맥 혈류로 제형을 지시하여 신장 동맥으로 분기하여 신장동맥에 처음 도달한 신장을 초래한다. 이 유도 투여의 또 다른 장점은 전신 투여 3을통해 달성된 것과 동일한 노출 수준에 도달하기 위해 더 낮은 용량/부피를 사용할 수 있다는 것이다.
투여의 다른 경로는 탐구되었습니다, 예를 들어, 신장 동맥으로 직접 카테터를 통해 주사. 우리의 손에, 이것은 신장에 순환을 복원 하는 실패의 높은 위험을 제시 하기 위해 발견 되었다. 신장 동맥의 매우 작은 직경 (직경약 0.35-0.55 mm)은 절개를 상대적으로 크게 만들고 입구 구멍을 닫을 때 방해 및 / 또는 색전증의 위험을 제기합니다. 신장에 대한 허혈성 관련 손상에 따라 종종 이 방법을 사용할 때 발생하였고, 따라서 신장을 표적으로 하기 위해 더 큰 대어타의 절개를 통해 물질을 주입하여 신장을 성공적으로 표적으로 하는 새로운 방법을 개발했습니다.
또한 신장 동맥에 직접 주사로 작동하는 협착 /혈전증의 도전 그리고 리스크를 명시하는 쥐에서 개발되고 있는 유사한 기술이 있습니다 5. 이것은 마우스에 있는 혈관이 더 작기 때문에 우리의 사실 인정을 지원합니다.
이 원고와 비디오는, 구체적으로, 주사가 부관 대동맥에 삽입 된 카테터를 통해 마우스의 신장 동맥으로 지시 될 수있는 방법을 설명하고, 절차의 일반적인 어려움을 극복하는 방법에 대한 지침뿐만 아니라, 가능한 가장 안전한 방법으로 작동하고 따라서 재현성을 증가.
이 방법은 신장 손상을 일으키지 않고 신장에 제형을 전달하는 데 성공했습니다. 그것은 모든 종류의 제형 (예를 들어, 작은 분자, 줄기 /전구 세포, 또는 마이크로베실)의 전달을 위해 사용될 수 있다. 이 방법은 건강한 동물이나 신장 질환 모델에 적용될 수 있다.
도 2 및 도 3에서,히스토로지가 제시된다. 도 2는 관류 후 180분, 도 3은 주입 후 7일 의 역사를 나타낸다. 그 이유는 신장 동맥실험이 180분밖에 걸리지 않았다는 것입니다. 이 새로운 방법으로 만성 손상이 없었음을 확인하기 위해, 우리는 의도적으로 7 일을 기다렸다. n-번호는 작지만 이것은 단지 예일 뿐입니다.
신장을 표적으로 하는 대르타 투여의 이 새로 개발된 방법은 상대적으로 낮은 처리량을 가진 침습적인 방법이며 단 하나 투약 전략에만 적합합니다. 이 방법으로반복 된 도징은 불가능합니다.
합자 배치의 사소한 조정으로이 방법은 아마도 두 신장을 동시적으로 주입하는 데 사용할 수있습니다 5,7. 대동맥 분지를 통해 유출위험이 증가함에 따라 우리는 폐색 합자를 가능한 한 신장에 가깝게 유지하여 왼쪽 신장에만 주사를 맡기기로 결정했습니다. 또한 유닌절제술이나 심지어 동시 신장 허혈 재관류 손상(IRI)과 같은 다른 모델이나 기술 이외에 사용할 수 있습니다. 우리의 의견으로는, IRI3 수술 후 24 시간 만 주사를하는 것은 너무 가혹하고 동물의 회복에 실질적으로 영향을 미칠 것입니다.
마우스의 새로운 긴장을 사용하는 경우, 방법은 어떤 식으로든 조정할 필요가 없도록 항상 그 변형에서 일부 동물에 파일럿 실험을 수행해야합니다. 예를 들어, 일부 균주에서 대어타로부터의 선박 분진은 약간 다른 위치에 배치될 수 있다. 합자의 위치는 제형이 올바른 위치에서 끝나도록 다소 변경될 수 있다.
탈수
복강을 여는 것은 탈수에 대한 큰 위험을 제기. 따라서 수술 후 회복에 좋은 기초를 보장하기 위해 수술 중 및 수술 후 유체 (약 37 °C)를 추가하는 것이 필수적입니다. 우리는 일반적으로 1 mL / 마우스 s.c. 수술 후.
허 혈
장기간 수술 시간 또는 전체 재순환에 도달하지 못하면 허혈이 발생할 수 있습니다. 실제 허혈 시간을 기록하고 신장 (및 허리 다리)에 혈액 순환이 복원되었는지 확인하는 것이 중요합니다. 끊임없는 훈련과 기술의 상쾌한 것은 언제나 처럼 중요합니다. 절차를 더 빨리 수행하면 신장이 허혈에 노출되는 시간을 줄일 수 있습니다. 허혈 시간(대어타의 결찰)을 약 5분(최대 10분)으로 유지하는 것은 신장에 해를 끼치지 않는 것으로 나타났다.
유출
주입된 제형이 신장 정맥을 통해 순환을 재입력할 때 다른 장기로 의 유출의 위험을 고려할 때, 주입된 부피는 최소한으로 유지되어야 한다. 우리는 50 μL의 최대 볼륨을 권장합니다. 투여량은 또한 다른 사람에 의해, 효율성 에 대한 중요한 요인이 될 발견되었습니다3.
부작용 (혈전증 및 마비)
처음에 모델을 설정할 때 우리는 뒷다리의 마비에 대한 일관되지 않은 문제를 경험했습니다. 항응고제(10IU 의 꼬리 정맥)의 관련 투여 후 수술 전, 이러한 부작용은 현저히 감소하였다. 현장에서 전문가와 상의한 후, 우리는 또한 어떤 조직에꼬집어들고 가능한 한 작은 부위를 만지지 않는다는 것을 의미하는 외상 수술로 일하는 데 더욱 신중하기 시작했습니다. 함께 취한 이 행동은 마비의 주파수를 약 50%에서 사실상 없음으로 감소했습니다.
처음에 방법 개발 중, 우리는 절개 구멍을 닫기 위해 신장 동맥에 항응고조직을 적용했습니다. 이것은 대어타에 주사를 할 때 압력이 대어타에서 훨씬 더 높기 때문에 가능하지 않았습니다. 항응고제는 또한 혈관 루멘에 들어가면 혈전증의 위험을 증가시킵니다.
모험이 매우 혈전성이기 때문에 봉합 할 때 대자의 루멘에 노출 된 모험이없는지 확인하십시오. 또한 허벅지에 봉합하여 반전 상처 모서리또는 대어타를 좁히는 것을 피하십시오.
우리는 지금 신장에 직접 제형을 전달하기 위한 확립된 방법이 있습니다.
The authors have nothing to disclose.
RRSSC의 르네 레미(René Remie)에게 특별한 디자인의 카테터를 제작하는 데 있어 기술을 정교하게 조정하고 Instech 연구소를 개발해 주었습니다. 또한 AstraZeneca R&D의 모든 동료들에게 팁과 트릭뿐만 아니라 사운드로 비디오를 완료하기위한 Xerox와 생산적인 토론을한 것에 대해 큰 감사를 드립니다.
Blunt hook 5mm 8/pack | Cooper surgical | 3316-8G | |
ETHILON Nylon Suture 11/0 | Ethicon | W2881 | For vessel |
Microsurgery forceps curved | Karo Pharma | FRC-15 RM-8 | |
Microsurgery forceps straight | Karo Pharma | FRS-15 RM-8 | |
Mouse renal artery cannula, 3mm 32ga stainless steel, 10cm 2Fr PU, fits 25ga | Instech | C07SS-MRA1813 | |
Vicryl, 6-0, BV-1 needle | Angthos | W9575 | For abdominal cavity |