אנו מתארים מודל של הטרוהנושא השתלת לב הבטן בחולדות, רומז שינויים של אסטרטגיות נוכחיות, אשר להוביל גישה כירורגית פשוטה. בנוסף, אנו מתארים מודל דחייה הרומן על-ידי הזרקה באוזן של תאים חיוניים שרירי הלב, המאפשר ניתוח נוסף השתלת אימונולוגיים בחולדות.
הטרוטופית לב השתלת חולדות כבר מודל נפוץ למחקרים אימונולוגיים שונים עבור יותר מ 50 שנים. מספר שינויים דווחו מאז התיאור הראשון ב 1964. לאחר 30 שנים של ביצוע הטרולפית לב השתלת חולדות, פיתחנו גישה כירורגית פשוטה, אשר ניתן ללמד בקלות ולבצע ללא הכשרה כירורגית נוספת או רקע.
לאחר הניתוח של העורקים העולה ואת עורק הריאות והארכה של זה מעולה ונחותים ורידים ריאתי, הלב התורם הוא נקצרו ולאחר מכן מושם עם תמיסת מלח קר מלוחים בתוספת הפארין. לאחר הלקריש ולצמצם את כלי הבטן של המטופל, התורם עולה העורקים הריאתי ואת עורק הריאות הם מאוהים לאבי העורקים הבטן המטופל והבנה לבנה הנחותה, בהתאמה, באמצעות תפרים ריצה רציפה.
בהתאם שילובים שונים של הנמען התורם, מודל זה מאפשר ניתוח של דחייה חריפה או כרונית של allografts. המשמעות החיסונית של מודל זה משופרת עוד על ידי גישה הרומן של הזרקה באוזן של תאים חיוניים שריר הלב וניתוח הבאים של ניקוז רקמת הלימפה צוואר הרחם.
הטרוטופית לב השתלת הוא מודל ניסיוני נפוץ לחקירות שונות לגבי סובלנות השתלת, דחייה כרונית השתלת, reperfusion פציעה, מחשב זלוף או לב שיפוץ. בין היתר, ניתן לנטר את תפקוד השתל באופן בלתי פולשני על ידי מישוש וכישלון השתל אינו מוביל לפגיעה חיונית של המטופל בניגוד לאיברים אחרים, כגון כליות או כבדים.
ב 1964, אבוט ואח ‘ תיאר בתחילה הטרוסקסואלים השתלת לב הבטן בחולדות1. מאוחר יותר, ב-1966, הטכניקה הסופית של האנסטוסים תוארה על ידי Tomita et al.2. היסודות עבור הדגם המשמש כיום דווחו על ידי אונו ולינדזי ב 19693. במהלך העשורים האחרונים, מספר שינויים פורסמו כדי ליצור סוגים שונים של פרוק, טעון באופן חלקי או טעון שמאלי חדרית הלב המוח4כולל הטרוסקסואליםמשולב לב הטרולפית 4,5,6. עבור מנתח אימונולוגיים השתלת שתל הלב שאינו טעון באמצעי האחסון מבוצע בדרך כלל. במקרה זה, זרימת הדם נכנסת למצב של התורם בעלייה העורקים ולאחר מכן את העורקים הכליליים. ניקוז הורידים מתרחש לאורך הסינוס הכלילי לתוך האטריום הימני והחדר (איור 1A-B). לפיכך, החדר השמאלי אינו נכלל בזרימת הדם, מלבד כמויות שוליים של דם מתוך ורידים של טסיאן. זה גם עושה את זה מודל שימושי עבור לימוד מנגנונים pathפיזילוגיים במהלך שמאל חדרית לסייע לטיפול במכשיר7.
השתלת לב הטרולפית בוצעה במינים שונים, כולל עכברים, ארנבים, חזירים והוא אפילו שימש מכשיר סיוע חד או בדיוני בבני אדם8,9,10,11. החולדה עדיין מייצגת בעל חיים ניסיוני פופולרי עבור דגמי השתלה, במיוחד מאז זמני ההישרדות של השתל עבור שילובים שונים של מאמץ חולדה הוגדרו היטב בעבר ומספר רב של ריאגנטים אימונולוגיים נגישים12,13. בניגוד לעכברים, חולדות גדולות יותר לעשות ניתוח וגישה לרקמת הלימפה לניתוח אימונולוגיים יותר12. יתר על כן, המבוא של טכנולוגיות שיבוט מסחרי בחולדות בשנים האחרונות יהיה כנראה להוביל לעניין חוזר במודלים חולדה ניסיוני14.
באופן כללי, הטרולנושא שתלי לב יכול להיות מחובר כלי המטופל או על ידי ביצוע ההשקה צוואר הרחם או הבטן. עם זאת, מספר מחקרים מראים כי השקה הירך מקלה על ניטור משופר עקב גישה טובה יותר עבור מישוש ידני או העברה הירך ובכך מאפשר זיהוי מדויק יותר של כשל השתל15,16.
הוכח כי אין הבדל לגבי זמן פעולה, שיעור סיבוך, התוצאה ואת זמן הישרדות השתל בין שתי טכניקות ההשקה17. ברור, הזמינות של מספר מספיק של בלוטות הלימפה ניקוז חייב להיות מוזכר כיתרון של ההשקה הצווארי; עם זאת, יש צורך בתקופות אימונים ארוכות יותר. לעומת זאת, החיבור הבטן הוא פחות מסובך וחשוב באותה מידה עבור חקירות אימונולוגיים, במיוחד כאשר בשילוב עם תוצאות מתוך שיטה הרומן של הזרקה באוזן של תאי שריר הלב allogenic וlymphadenectomy צוואר הרחם העוקבים. שילוב של שני הדגמים מציע ספקטרום רחב של ניתוחים אימונולוגיים שלאחר התערבותית.
הפרוטוקול הבא מתייחס לפעול בזוגות של מנתחים כדי להפחית את הזמן של איסכמיה. עם זאת, ניתן לבצע את כל הניסויים על ידי אדם אחד. הכיוונון של כלים וחומרים להסבר לב והשרשה מוצג באיור 2A-B.
השיטה שתוארה קודם לכן השתלת לב הטרופית בחולדות מבוססת בעיקר על התיאור של אונו ולינדזי ב 19693. מאז, הוכנסו מספר שינויים במינים שונים המובילים למגוון רחב של מודל זה. שילוב של כמה שינויים אלה ומציג את הניסיון שלנו כתוצאה מעל 30 שנים של ביצוע של השתלות לב הטרולפית במעבדה, יצרנו גישה כ…
The authors have nothing to disclose.
אנחנו רוצים להודות לברטה טראוטפיאה, קורין לבנברט ואינגריד מיידר על המחויבות שלהם.
Anesthesia device (including isoflurane vaporizer) | Summit Anesthesia Solutions | No Catalog Number available | |
Cannula (27 G) | BD Microlance | 302200 | |
Carprofen | Pfizer | Rimadyl 50 mg/mL | |
Cellstar Tubes (15 mL) | GreinerBioOne | 188271 | |
Cell strainer (40 µm) | BD Falcon | 2271680 | |
Collagenase Type CLSII | Biochrome | C2-22 | |
Compresses 5×5 cm | Fuhrmann | 31501 | |
Compresses 7.5×7.5 cm | Fuhrmann | 31505 | |
Cotton swabs | Heinz Herenz Medizinalbedarf | 1032128 | |
Dexpathenol (5 %) | Bayer | "Bepanthen" | |
DPBS BioWhittaker | Lonza | 17-512F | |
Forceps | B. Braun | Aesculap BD557R | |
Forceps | B. Braun | Aesculap BD313R | |
Forceps | B. Braun | Aesculap BD35 | |
Heating mat | Gaymar Industries | "T/Pump" | |
Hemostatic gauze | Ethicon | Tabotamp | |
Heparin-Natrium 25 000 I.E. | Ratiopharm | No Catalog Number available | |
Isofluran CP | CP-Pharma | No Catalog Number available | |
Large-pored sieve (stainless steel) | Forschungswerkstätten Hannover Medical School | No Catalog Number available | |
Lidocaine | Astra Zeneca | 2 % Xylocain | |
Metamizol-Natrium | Ratiopharma | Novaminsulfon 500 mg/mL | |
Micro forceps | B. Braun | Aesculap BD3361 | |
Micro needle holder | Codman, Johnson & Johnson Medical | Codmann 80-2003 | |
Micro needle holder | B. Braun | Aesculap BD336R | |
Micro needle holder | B. Braun | Aesculap FD241R | |
Micro scissors | B. Braun | Aesculap FD101R | |
Micro scissors | B. Braun | Aesculap FM471R | |
Needle holder | B. Braun | Aesculap BM221R | |
Penicillin/Streptomycin/Glutamine (100x) | PAA | P11-010 | |
Peripheral venous catheter (18 G) | B. Braun | 4268334B | |
Peripheral venous catheter (22 G) | B. Braun | 4268091B | |
Probe pointed scissors | B. Braun | Aesculap BC030R | |
Retractors | Forschungswerkstätten Hannover Medical School | No Catalog Number available | |
RPMI culture medium | Lonza | BE12-702F | |
Saline solution (NaCl 0.9 %) | Baxter | No Catalog Number available | |
Scissors | B. Braun | Aesculap BC414 | |
Surgical microscope | Carl-Zeiss | OPMI-MDM | |
Sutures (anastomoses) | Catgut | Mariderm 8-0 monofil | |
Sutures (ligature) | Resorba | Silk 5-0 polyfil | |
Sutures (skin, fascia) | Ethicon | Mersilene 3-0 | |
Syringe (1 mL) | B. Braun | 9166017V | |
Syringe (10 mL) | B. Braun | 4606108V | |
Syringe (20 mL) | B. Braun | 4606205V | |
Vascular clamp | B. Braun | Aesculap FB708R |