Summary

腐食性煙道ガスを用いたベンチスケール光バイオリアクターにおける微細藻類栽培とバイオマス定量

Published: December 19, 2019
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Summary

ベンチスケール、軸栽培は、その後のプロセススケールアップの前に、マイクロアルガル特性評価と生産性の最適化を容易にします。光バイオリアクターは、信頼性の高い再現性のある微細藻類実験に必要な制御を提供し、自治体や産業の燃焼放出から腐食性ガス(CO2、SO2、NO2)で微細藻類を安全に栽培できるように適応することができます。

Abstract

光バイオリアクターは、光栄養微生物の実験のための照明栽培システムです。これらのシステムは温度、pHおよびガス組成および流量制御が付いた微細なアルガル栽培のための無菌環境を提供する。ベンチスケールでは、光バイオリアクターは、微小藻系の特性、生産性、および成長の最適化を研究する研究者に有利です。工業規模では、光バイオリアクターは製品の純度を維持し、生産効率を向上させることができます。このビデオでは、腐食性ガス入力の安全な使用を含む、マイクロアルガル栽培のためのベンチスケールの光バイオリアクターの調製と使用について説明し、関連するバイオマス測定とバイオマス生産性の計算について詳しく説明します。具体的には、マイクロアルガル培養貯蔵と接種のための調製、光バイオリアクターの組み立てと滅菌、バイオマス濃度測定、およびマイクロアルガルバイオマス生産性のロジスティックモデルを、速度で示しています。最大および全体的なバイオマス製品を含む計算。さらに、シミュレートされたまたは実際の廃棄物ガスの放出を使用して微細藻類を栽培する実験への関心が高まっているため、ビデオは腐食性ガスを扱うために必要な光バイオリアクター機器の適応をカバーし、安全なサンプリングについて議論します。このようなシナリオ。

Introduction

光バイオリアクターは、開放池では達成できないよりも純粋なマイクロアルガル製品の制御実験や栽培に役立ちます。ベンチスケールフォトバイオリアクターにおける微細藻類栽培は、プロセススケールアップに使用できる基礎知識の開発をサポートします。環境条件のわずかな変化は、微生物学的実験を著しく変化させ、結果1を混同する可能性がある。温度、pH、ガススパージング制御を備えた滅菌プロセスは、様々な条件下で微小藻特性と性能を研究する場合に有利です。さらに、入力ガス濃度、温度、混合によるせん断力、および中型pHの制御は、それ以外の方法で栽培が困難な多様な種をサポートすることができます。光バイオリアクターは、連続ガス供給とスパージングを備えたバッチプロセスとして、または連続ガス供給とスパージングプラス排水および排水排水栄養素入力を備えたケモスタットフロースルーシステムとして実行できます。ここでは、連続ガス供給とスパージングによるバッチ処理をデモンストレーションします。

光バイオリアクターの使用は、いくつかの微細藻類の栽培と生産上の課題に対処します。この分野は、一般に、他の微生物による汚染の懸念、効率的な基板利用(CO2緩和又は廃水処理の場合に特に重要である)2、pH制御、照明変動、及びバイオマス生産性3に苦しむ。光バイオリアクターは、研究者が密接に制御されたバッチシステムで広範囲の光栄養を研究することを可能にし、そこでは、成長の遅い種でさえ捕食者や競合する微生物4から保護されています。これらのバッチシステムは、供給されたガスと均衡する可能性が高い閉鎖システムであるため、CO2使用率とバイオマス生産性の向上にも優れています。光バイオリアクター技術はまた、pH制御を提供し、その欠如は、過去の研究で高いバイオマス生産性を妨げている5.ベンチスケールでは、光バイオリアクターが提供する制御レベルは研究者に有利です。より大きな産業規模では、光バイオリアクターは、商業的な生体製品の純度を維持し、栄養補助的、化粧品、食品、または飼料用途のための生産効率を向上させるために使用することができる 6.

微細藻類は、CO2をバイオマス炭素として迅速に固定できるため、CO2の生体術に大きな関心を寄せる。しかし、CO2のほとんどの人類起源源は、燃焼プロセス燃料源に応じて、他の腐食性および有毒ガスまたは汚染物質(NOx、SOx、CO、Hg)で汚染されています。持続可能なCO2隔離への関心の高まりは、石炭火力発電所などのCO2-リッチな排出量を処理する光バイオリアクター技術の開発を促している(表1)。残念ながら、研究およびスケールアッププロセス中に腐食性および有毒な汚染物質に人的および環境的暴露の固有のリスクがあります。そのため、腐食性ガスを用いたバイオリアクターの安全な組み立てと操作を記述することは必要であり、有益である。

この方法は、慎重に制御された実験条件下で微細藻類の成長のための2Lベンチスケールの光バイオリアクターを使用するためのものである。このプロトコルは、マイクロアルガル貯蔵、接種体調製、および光バイオリアクターのセットアップと滅菌を記述します。本作業では、基本的な運用にとどまって、マイクロアルガルバイオマスの測定やバイオマス生産性の計算、腐食性ガスによる微細藻類栽培装置の適応について説明します。以下に説明するプロトコルは、より大きな実験制御を行い、微小藻の増殖条件を最適化し、または光栄養性微生物の範囲を異性培養しようとする研究者に適しています。この方法は、可燃性ガスを生成または消費する微生物(例えばCH 4、H2など)の栽培に適した材料を記載していない。7.

Protocol

1. 腐食性ガスを含む光バイオリアクターの安全な使用とサンプリング 注:この方法は、高可燃性ガスを生成または消費する微細藻類培養物の安全なサンプリングのための適切な手順を説明していません。 人間の健康へのリスクとして有毒ガスを管理します。注:アイオワ大学の化学衛生計画に従って、著者らは大学火災安全コーディネーターおよび大学環境衛生…

Representative Results

指数相で収穫された緑色微細藻類S.obliquusの較正曲線を、OD750と乾燥バイオマス濃度で確立した(図2)。線形回帰の R2値は 0.9996 です。 冷蔵寒天板に保存された培養物から250mLエルレンマイヤーフラスコでS.オブリクース培養が始まりました。微細藻類を10 mM HEPESバッファで3N-BBMに接種し、1.5L作動量(0.07 vvm)の2Lフォトバイオ?…

Discussion

調整されたpH、温度、ガス流量、ガス濃度を用いたバッチ、軸光バイオリアクター実験は、非標的藻類株による汚染や培養条件の変動を排除することにより、有意義な結果を促進します。栄養として機能する腐食性ガス(CO2、SO2、NO2)が存在する場合でも、正確な純粋培養成長動態を得ることができ、廃ガスを動物飼料などの貴重な製品に変えることができます。

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Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

この資料は、助成金第1546595条に基づく国立科学財団大学院研究フェローシップの支援を受けた作品に基づいています。この資料に記載されている意見、調査結果、結論または勧告は著者のものであり、必ずしも国立科学財団の見解を反映しているわけではありません。この研究は、アイオワ大学大学院・専門学生政府の研究助成金と、アイオワ大学財団のアレン・S・ヘンリー寄付によっても支援されました。W.M.ケック・フィトテクノロジーズ研究所で研究を行いました。著者らは、アイオワ大学の発電所スタッフ、特にマーク・マクスウェルが、シミュレートされた煙道ガスの専門知識と財政的支援に感謝したいと思います。著者はまた、サンプリングと分析に関する彼女の支援と、プロトコルビデオへの彼女の支援と参加のためのエミリー・グリーンを認めたい。

Materials

Biostat A bioreactor Sartorius Stedim 2-liter bioreactor for microbial fermentation; designed to be autoclaved; pH, temperature, gas flow rate control
Bump test NO2 gas Grainger GAS34L-112-5 Calibration gas for MultiRAE gas detector
Bump test O2, CO, LEL gas Grainger GAS44ES-301A Calibration gas for MultiRAE gas detector
Bump test SO2 gas Grainger GAS34L-175-5 Calibration gas for MultiRAE gas detector
Corrosion resistant tubing for NO2 gas Swagelok SS-XT4TA4TA4-6 PTFE Core Hose Smooth Bore X Series—Fiber Braid and 304 SS Braid Reinforcement
Corrosion resistant tubing for SO2 gas QC Supply 120325 Reinforced Braided Natural EVA Tubing – 1/4" ID
cozIR 100% CO2 meter Gas Sensing Solutions Ltd. CM-0121 at CO2meter.com CO2 meter for concentrations up to 100%
cozIR 20% CO2 meter Gas Sensing Solutions Ltd. CM-0123 at CO2meter.com CO2 meter for concentrations up to 20%
Durapore Membrane Filter, 0.45 μm Millipore Sigma HVLP04700 Hydrophilic, plain white, 47 mm diameter, 0.45 μm pore size, PVFD membrane filters
Gas cylinder regulators Praxair PRS 40221331-660 Single-stage stainless steel regulator configured for 0-15 psi outlet assembly diaphragm valve with 1/4" MNPT threads, Stainless steel to resist corrosion from NOx and SOx
Gas cylinders Praxair Ulta-zero air, high purity CO2, or custom gas composition Dependent on study objectives
Gas monitoring and leak detection system RAE Systems by Honeywell MAB3000235E020 Pumped model that detects O2, SO2, NO2, CO, and LEL
GasLab software GasLab v2.0.8.14 Software for CO2 meter measurements and data logging
Hose barb Grainger Item # 3DTN3 Used to adapt regulators to tubing, Stainless steel to resist corrosion from NOx and SOx
K30 1% CO2 meter Senseair CM-0024 at CO2meter.com CO2 meter for concentrations less than 1%
LED grow panels Roleadro HY-MD-D169-S Red & blue LED light panels
Memosens dissolved oxygen probe Endress+ Hauser COS22D-19M6/0 Autoclavable (with precautions) dissolved oxygen probe for bioreactor
Memosens pH probe Endress+ Hauser CPS71D-7TB41 Autoclavable (with precautions) pH probe for bioreactor
Oven, Isotemp 500 Series Fisher Scientific 13246516GAQ Small oven for drying
Prism GraphPad software GraphPad Software Version 7.03 or 8.0.1 Graphing software for data organization, data analysis, and publication-quality graphs
Stem to hose barb fitting Swagelok SS-4-HC-A-6MTA Stainless Steel Hose Connector, 6 mm Tube Adapter, 1/4 in. Hose ID
Tubing, dilute acid/base transfer Allied Electronics and Automation 6678441 Silicone TP Process Tubing; 1.6mm Bore Size; 3000mm Long; Food Grade
Tubing, gas transfer Allied Electronics and Automation 6678444 Silicone TP Process Tubing; 3.2mm Bore Size; 3000mm Long; Food Grade

References

  1. Obom, K. M., Magno, A., Cummings, P. J. Operation of a Benchtop Bioreactor. Journal of Visualized Experiments. (79), e50582 (2013).
  2. Cheah, W. Y., Pau Loke, S., Chang, J. -. S., Ling, T., Juan, J. C. Biosequestration of atmospheric CO2 and flue gas-containing CO2 by microalgae. Bioresource Technology. 184, 190-201 (2014).
  3. Xu, L., Weathers, P. J., Xiong, X. -. R., Liu, C. -. Z. Microalgal bioreactors: Challenges and opportunities. Engineering in Life Sciences. 9 (3), 178-189 (2009).
  4. Tsang, Y. F. . Photobioreactors: Advancements, Applications and Research. , (2017).
  5. Molitor, H. R., Moore, E. J., Schnoor, J. L. Maximum CO2 Utilization by Nutritious Microalgae. ACS Sustainable Chemistry & Engineering. 7 (10), 9474-9479 (2019).
  6. Khan, M. I., Shin, J. H., Kim, J. D. The promising future of microalgae: current status, challenges, and optimization of a sustainable and renewable industry for biofuels, feed, and other products. Microbial Cell Factories. 17 (1), 36 (2018).
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Cite This Article
Molitor, H. R., Williard, D. E., Schnoor, J. L. Microalgae Cultivation and Biomass Quantification in a Bench-Scale Photobioreactor with Corrosive Flue Gases. J. Vis. Exp. (154), e60566, doi:10.3791/60566 (2019).

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