Summary

Microalgen teelt en biomassa kwantificering in een Fotobioreactor met een tafel schaal met corrosieve rookgas

Published: December 19, 2019
doi:

Summary

Bench-Scale, Axenische teelt vergemakkelijkt microalgal karakterisering en productiviteit optimalisatie voor verdere proces scale-up. Photobioreactoren zorgen voor de nodige controle voor betrouwbare en reproduceerbaar microalgal experimenten en kunnen worden aangepast om microalgen veilig te cultiveren met de corrosieve gassen (CO2, dus2, No2) van gemeentelijke of industriële verbrandingsemissies.

Abstract

Photobioreactoren zijn verlichte teeltsystemen voor experimenten op fototrofische micro-organismen. Deze systemen bieden een steriele omgeving voor de microalgal teelt met temperatuur, pH, en gassamenstelling en debietregeling. Op tafel schaal zijn fotobioreactoren voordelig voor onderzoekers die microalgal-eigenschappen, productiviteit en groei-optimalisatie bestuderen. Bij industriële weegschalen kunnen photobioreactoren de zuiverheid van het product handhaven en de productie-efficiëntie verbeteren. De video beschrijft de voorbereiding en het gebruik van een tafelweegschaal fotobioreactor voor de microalgen teelt, inclusief het veilige gebruik van corrosieve gasingangen, en Details van relevante biomassa metingen en biomassa productiviteits berekeningen. De video illustreert specifiek de opslag van microalgen cultuur en voorbereiding voor inoculatie, fotobioreactor assemblage en sterilisatie, biomassaconcentratie metingen en een logistiek model voor de biomassa-productiviteit van de microalgen met een snelheid berekeningen inclusief maximale en algemene biomassa productiviteiten. Aangezien er steeds meer belangstelling is voor experimenten om microalgen te cultiveren met behulp van gesimuleerde of echte afvalgas emissies, zal de video de aanpassingen van de bioreactor apparatuur omvatten die nodig zijn om met corrosieve gassen te werken en om veilige bemonstering te bespreken in dergelijke scenario’s.

Introduction

Photobioreactors zijn nuttig voor gecontroleerde experimenten en de teelt van zuiverder microalgal producten dan kan worden bereikt door open vijvers. Microalgal teelt in Bench-Scale photobioreactoren ondersteunt de ontwikkeling van fundamentele kennis die kan worden gebruikt voor het proces scale-up. Kleine veranderingen in de omgevingsomstandigheden kunnen microbiologische experimenten significant veranderen en de resultaten1verstellen. Een steriel proces met temperatuur-, pH-en gassparende controle is voordelig voor het bestuderen van microalgal eigenschappen en prestaties onder gevarieerde omstandigheden. Daarnaast kan de controle over de invoer gasconcentraties, temperatuur, Afschuifkracht van mengen en medium pH verschillende soorten ondersteunen die anders een uitdaging vormen om te cultiveren. Photobioreactors kunnen worden uitgevoerd als een batchproces met continue gastoevoer en sparen, of als een chemostat flow-through-systeem met continue gastoevoer en gefiltreerde plus influent en effluent afvalwater toevoer voedingsstoffen. Hier demonstreren we het batchproces met continue gastoevoer en sparen.

Het gebruik van fotobioreactoren behandelt verschillende microalgal teelt-en productie-uitdagingen. Het veld worstelt in het algemeen met bezorgdheid over verontreiniging door andere micro-organismen, efficiënt substraat gebruik (wat vooral belangrijk is in het geval van CO2 -mitigatie of afvalwaterzuivering)2, pH-controle, verlichtings variabiliteit en biomassa-productiviteit3. Fotobioreactoren stellen onderzoekers in staat om een breed scala aan fototroph’s te bestuderen in nauw gecontroleerde batch systemen, waarbij zelfs langzaam groeiende soorten worden beschermd tegen roofdieren of concurrerende micro-organismen4. Deze batch systemen zijn ook beter in het faciliteren van meer CO2 -bezettingsgraad en biomassa-productiviteit, omdat ze gesloten systemen zijn die waarschijnlijker zijn in evenwicht met geleverde gassen. Photobioreactor technologie biedt ook pH-controle, waarvan het gebrek de hoge biomassa-productiviteit in eerdere studies5heeft belemmerd. Op tafelweegschaal, het niveau van controle aangeboden door fotobioreactoren is voordelig voor onderzoekers. Bij grotere industriële weegschalen kunnen fotobioreactoren worden gebruikt om de zuiverheid van commerciële bioproduct te handhaven en de productie-efficiëntie voor nutraceutische, cosmetische, voedsel-of voeder toepassingen te verbeteren6.

Microalgen zijn van groot belang voor de biosequestration van CO2 omdat ze co2 snel kunnen repareren als biomassa-koolstof. De meeste antropogene bronnen van CO2 zijn echter verontreinigd met andere corrosieve en toxische gassen of verontreinigingen (geenx, dusx, Co, Hg), afhankelijk van de brandstofbron van het verbrandingsproces. Groeiende belangstelling voor duurzame co2 -vastlegging heeft de ontwikkeling van bioreactor-technologieën voor de behandeling van co2-rijke emissies, zoals die van kolen gestookte elektriciteitscentrales (tabel 1), veroorzaakt. Helaas bestaat er een inherent risico op blootstelling van mens en milieu aan de corrosieve en toxische verontreinigingen tijdens onderzoek en opschaling. Als zodanig is het beschrijven van de veilige assemblage en werking van bioreactoren met behulp van corrosieve gassen noodzakelijk en leerzaam.

Deze methode is voor het gebruik van een 2 L tafelweegschaal fotobioreactor voor de groei van microalgen onder zorgvuldig gecontroleerde experimentele omstandigheden. Het protocol beschrijft microalgal opslag, entmateriaal voorbereiding en fotobioreactor Setup en sterilisatie. Naast de basiswerking beschrijft dit werk de microalgen biomassa-metingen en de berekeningen van de biomassa-productiviteit, en de aanpassing van de apparatuur voor de microalgen teelt met corrosieve gassen. Het hieronder beschreven protocol is geschikt voor onderzoekers die meer experimentele controle willen uitoefenen, de groeiomstandigheden van microalgen moeten optimaliseren of een reeks fototrofische microben kunnen omkweken. Bij deze methode worden geen geschikte materialen beschreven voor de teelt van microben die ontvlambare gassen produceren of consumeren (bijvoorbeeld CH4, H2, enz.). 7.

Protocol

1. veilig gebruik en bemonstering van een fotobioreactor met corrosieve gassen Opmerking: deze methode beschrijft niet de juiste procedures voor een veilige bemonstering van microalgen culturen die licht ontvlambare gassen produceren of consumeren. Giftig gas beheren als een risico voor de menselijke gezondheid.Opmerking: volgens het Chemical Hygiene plan van de Universiteit van Iowa werkten de auteurs samen met de University Fire Safety Coordinator en de University Environmental…

Representative Results

Een ijkcurve voor de groene microalgen, S. obliquus, geoogst in de exponentiële fase, werd vastgesteld met od750 en gedroogde biomassa concentraties (Figuur 2). De lineaire regressie had een R2 -waarde van 0,9996. Een S. obliquus cultuur werd gestart in een erlenmeyer kolf van 250 ml uit een op een gekoelde agar plaat opgeslagen cultuur. De microalga werd inocculeerd in 3n-BBM met 10 mm Hepes buffer en sparged met 2,2% Co<s…

Discussion

Batch, Axenische bioreactor experimenten met gereguleerde pH, temperatuur, gasstroom en gasconcentratie bevorderen zinvolle resultaten door het elimineren van verontreiniging door niet-doelwit algen stammen en variabiliteit in cultuuromstandigheden. Nauwkeurige pure cultuur groei kinetiek kan ook worden verkregen in de aanwezigheid van corrosieve gassen (CO2, dus2, No2), die als voedingsstoffen dienen, waardoor afvalgassen worden omgezet in een waardevol product zoals diervoeders.

<p …

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Dit materiaal is gebaseerd op het werk ondersteund door de National Science Foundation Graduate Research Fellowship onder Grant No. 1546595. Alle meningen, bevindingen en conclusies of aanbevelingen in dit materiaal zijn die van de auteurs en weerspiegelen niet noodzakelijkerwijs de standpunten van de National Science Foundation. Het werk werd ook gesteund door een universiteit van Iowa Graduate and Professional Student Government Research Grant, en de University of Iowa Foundation, allen S. Henry Endowment. Onderzoek werd uitgevoerd in het W. M. Keck Phytotechnologies Laboratory. De auteurs willen de medewerkers van de University of Iowa Power plant bedanken, met name Mark Maxwell, voor expertise en financiële ondersteuning voor de gesimuleerde rookgas gassen. De auteurs willen Emily Moore ook graag erkennen voor haar hulp bij sampling en analyse en Emily Greene voor haar hulp en deelname aan de protocol video.

Materials

Biostat A bioreactor Sartorius Stedim 2-liter bioreactor for microbial fermentation; designed to be autoclaved; pH, temperature, gas flow rate control
Bump test NO2 gas Grainger GAS34L-112-5 Calibration gas for MultiRAE gas detector
Bump test O2, CO, LEL gas Grainger GAS44ES-301A Calibration gas for MultiRAE gas detector
Bump test SO2 gas Grainger GAS34L-175-5 Calibration gas for MultiRAE gas detector
Corrosion resistant tubing for NO2 gas Swagelok SS-XT4TA4TA4-6 PTFE Core Hose Smooth Bore X Series—Fiber Braid and 304 SS Braid Reinforcement
Corrosion resistant tubing for SO2 gas QC Supply 120325 Reinforced Braided Natural EVA Tubing – 1/4" ID
cozIR 100% CO2 meter Gas Sensing Solutions Ltd. CM-0121 at CO2meter.com CO2 meter for concentrations up to 100%
cozIR 20% CO2 meter Gas Sensing Solutions Ltd. CM-0123 at CO2meter.com CO2 meter for concentrations up to 20%
Durapore Membrane Filter, 0.45 μm Millipore Sigma HVLP04700 Hydrophilic, plain white, 47 mm diameter, 0.45 μm pore size, PVFD membrane filters
Gas cylinder regulators Praxair PRS 40221331-660 Single-stage stainless steel regulator configured for 0-15 psi outlet assembly diaphragm valve with 1/4" MNPT threads, Stainless steel to resist corrosion from NOx and SOx
Gas cylinders Praxair Ulta-zero air, high purity CO2, or custom gas composition Dependent on study objectives
Gas monitoring and leak detection system RAE Systems by Honeywell MAB3000235E020 Pumped model that detects O2, SO2, NO2, CO, and LEL
GasLab software GasLab v2.0.8.14 Software for CO2 meter measurements and data logging
Hose barb Grainger Item # 3DTN3 Used to adapt regulators to tubing, Stainless steel to resist corrosion from NOx and SOx
K30 1% CO2 meter Senseair CM-0024 at CO2meter.com CO2 meter for concentrations less than 1%
LED grow panels Roleadro HY-MD-D169-S Red & blue LED light panels
Memosens dissolved oxygen probe Endress+ Hauser COS22D-19M6/0 Autoclavable (with precautions) dissolved oxygen probe for bioreactor
Memosens pH probe Endress+ Hauser CPS71D-7TB41 Autoclavable (with precautions) pH probe for bioreactor
Oven, Isotemp 500 Series Fisher Scientific 13246516GAQ Small oven for drying
Prism GraphPad software GraphPad Software Version 7.03 or 8.0.1 Graphing software for data organization, data analysis, and publication-quality graphs
Stem to hose barb fitting Swagelok SS-4-HC-A-6MTA Stainless Steel Hose Connector, 6 mm Tube Adapter, 1/4 in. Hose ID
Tubing, dilute acid/base transfer Allied Electronics and Automation 6678441 Silicone TP Process Tubing; 1.6mm Bore Size; 3000mm Long; Food Grade
Tubing, gas transfer Allied Electronics and Automation 6678444 Silicone TP Process Tubing; 3.2mm Bore Size; 3000mm Long; Food Grade

References

  1. Obom, K. M., Magno, A., Cummings, P. J. Operation of a Benchtop Bioreactor. Journal of Visualized Experiments. (79), e50582 (2013).
  2. Cheah, W. Y., Pau Loke, S., Chang, J. -. S., Ling, T., Juan, J. C. Biosequestration of atmospheric CO2 and flue gas-containing CO2 by microalgae. Bioresource Technology. 184, 190-201 (2014).
  3. Xu, L., Weathers, P. J., Xiong, X. -. R., Liu, C. -. Z. Microalgal bioreactors: Challenges and opportunities. Engineering in Life Sciences. 9 (3), 178-189 (2009).
  4. Tsang, Y. F. . Photobioreactors: Advancements, Applications and Research. , (2017).
  5. Molitor, H. R., Moore, E. J., Schnoor, J. L. Maximum CO2 Utilization by Nutritious Microalgae. ACS Sustainable Chemistry & Engineering. 7 (10), 9474-9479 (2019).
  6. Khan, M. I., Shin, J. H., Kim, J. D. The promising future of microalgae: current status, challenges, and optimization of a sustainable and renewable industry for biofuels, feed, and other products. Microbial Cell Factories. 17 (1), 36 (2018).
  7. Benemann, J. R. Hydrogen production by microalgae. Journal of Applied Phycology. 12 (3), 291-300 (2000).
  8. . IH MOD Available from: https://aiha.org/public-resources/consumer-resources/topics-of-interest/ih-apps-tools (2019)
  9. Centers for Disease Control and Prevention, Immediately Dangerous To Life or Health (IDLH) Values. The National Institute for Occupational Safety and Health Available from: https://www.cdc.gov/niosh/idlh/intridl4.html (2019)
  10. Nakanishi, K., Deuchi, K., Kuwano, K. Cryopreservation of four valuable strains of microalgae, including viability and characteristics during 15 of cryostorage. Journal of Applied Phycology. 24 (6), 1381-1385 (2012).
  11. Bischoff, H. W., Bold, H. C. . Some soil algae from Enchanted Rock and related algal species. , (1963).
  12. Mata, T. M., Martins, A. A., Caetano, N. S. Microalgae for biodiesel production and other applications: A review. Renewable and Sustainable Energy Reviews. 14 (1), 217-232 (2010).
  13. Wood, A. M., Everroad, R. C., Wingard, L. M., Andersen, R. A. Measuring growth rates in microalgal cultures. Algal Culturing Techniques. , 270-272 (2005).

Play Video

Cite This Article
Molitor, H. R., Williard, D. E., Schnoor, J. L. Microalgae Cultivation and Biomass Quantification in a Bench-Scale Photobioreactor with Corrosive Flue Gases. J. Vis. Exp. (154), e60566, doi:10.3791/60566 (2019).

View Video