Isolement et transfert adoptif de sel élevé traités des cellules dendritiques présentatrices d’antigène

Excès de sel alimentaire est un facteur de risque majeur pour l’hypertension. ^{1 , 2} the American Heart Association recommande un maximum de 2 300 milligrammes (mg) de l’apport en sodium (Na⁺) par jour, cependant ; moins de 10 % de la population américaine observe cette recommandation. ^{3 , 4} réduction modeste apport Na⁺ abaisser la pression artérielle et réduire les nouveaux cas annuels de cardiopathies coronariennes et des accidents vasculaires cérébraux aux Etats-Unis de 20 %. ⁵ un problème majeur avec la consommation excessive de sel est que 50 % de la population hypertendue présente une sensibilité au sel, définie comme une augmentation de 10 mmHg de la tension artérielle après chargement Na⁺ ou une baisse similaire dans la tension artérielle après Na⁺ restriction et la diurèse. ⁶ sensibilité au sel également survient chez 25 % des individus normotendus et est un facteur prédictif indépendant de décès et d’accidents cardiovasculaires. ^{7 , 8} mécanismes de détection de sel dans l’hypertension impliquant le rein ont été abondamment étudiées ; Toutefois, des études récentes suggèrent que les cellules immunitaires peuvent détecter Na⁺. ^{9 , 10}

Récentes indiquent que les changements rénaux Na⁺ de manutention peuvent causer une accumulation de Na⁺ dans l’interstitium et promouvoir l’inflammation. ^{11 , 12} notre laboratoire et autres ont montré que les cellules du système immunitaire inné et adaptatif de contribuent à l’aggravation de l’hypertension. ^{9 , 13 , 14 , 15} divers stimuli hypertensifs, y compris l’angiotensine II, la norépinéphrine et sel cause macrophages, monocytes et lymphocytes T à s’infiltrer dans le rein et le système vasculaire et favorisent la rétention de Na⁺ , vasoconstriction, la pression artérielle élévation et dommages d’extrémité-organe. ^{9 , 16 , 17 , 18 , 19 , 20} dans les études antérieures, nous avons constaté que les contrôleurs de domaine s’accumulent isolevuglandin (IsoLG)-protéines adduits en réponse à divers stimuli hypertensifs, y compris l’angiotensine II et DOCA-sel de l’hypertension. ¹⁴ IsoLGs sont des produits hautement réactives de la peroxydation lipidique qui rapidement et de façon covalente adduit de lysines des protéines et leur accumulation est associée à l’activation de DC. Formation en murin DCs.⁹ entrée Na⁺ dans DCs est médiée par l’amiloride sensible transporteurs d’adduits ¹⁴ nous avons récemment créé qu’élevée Na⁺ est un puissant stimulus pour IsoLG-protéine. Na⁺ est ensuite échangée pour le calcium (Ca^{2 +}) par l’intermédiaire de l’échangeur^{2 +} /nom de Na⁺. Ca^{2 +} active la protéine kinase C (PKC) qui active la NADPH oxydase, conduisant à une augmentation superoxyde (O₂^{· –}) et la formation d’un adduit IsoLG-protéine. ⁹ transfert adoptif de sel-exposés l’hypertension DCs nombres premiers en réponse à une dose sous presseur d’angiotensine II. ⁹

Identification des CD11c⁺ DCs de tissus a été précédemment limité à l’immunohistochimie et la RT-PCR, et isolement des contrôleurs de domaine a été limitée à la cellule tri par cytométrie en flux. Même si écoulement cytometry cellule tri est une méthode puissante pour l’isolement des cellules immunitaires, il est coûteux et fastidieux et conduit à un rendement faible de cellules viables. Par conséquent, nous avons optimisé un protocole étape par étape pour la digestion des tissus, stimulation in vitro et transfert adoptif de CD11c⁺ DCs pour étudier l’hypertension.