Summary

Empregando a extração de água quente sob pressão (PHWE) para explorar a química de produtos naturais no laboratório de graduação

Published: November 07, 2018
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Summary

Aqui, nós empregamos um método de extração (PHWE) de água quente sob pressão, que utiliza uma máquina de espresso domésticas não modificado para introduzir estudantes de química de produtos naturais no laboratório. Dois experimentos são apresentados: PHWE de eugenol e acetyleugenol de cravos e PHWE de seselin e (+)-epoxysuberosin da planta australiana Correa reflexa.

Abstract

Um método de extração (PHWE) recentemente desenvolvidos água quente sob pressão que utiliza uma máquina de espresso doméstica sem modificações para facilitar a pesquisa de produtos naturais também tem encontrado aplicações como instrumento de ensino eficaz. Especificamente, esta técnica tem sido usada para apresentar aspectos da química de produtos naturais no laboratório com estudantes de segundo e terceiro anos. Neste relatório, são apresentados dois experimentos: o PHWE de eugenol e acetyleugenol de dentes e o PHWE de seselin e (+)-epoxysuberosin das espécies de plantas endêmicas de australiano Correa reflexa. Empregando o PHWE nesses experimentos, o extrato bruto de cravo, enriquecido de eugenol e acetyleugenol, obteve-se em 4-9% w/w de cravo por estudantes de segundo ano e seselin e (+)-epoxysuberosin foram isolados em rendimentos de até 1,1% w/w e 0,9% w/w de C. reflexa por alunos do terceiro ano. O exercício anterior foi desenvolvido como um substituto para o experimento de destilação de vapor tradicional fornecendo uma introdução às técnicas de extração e separação, enquanto a última atividade contou com métodos de ensino guiado-inquérito em um esforço para simular Bioprospecção de produtos naturais. Isto principalmente deriva da natureza rápida desta técnica de PHWE em relação a métodos de extração tradicional que muitas vezes são incompatíveis com as restrições de tempo associadas com experimentos de laboratório de graduação. Este método PHWE rápido e prático pode ser usado para isolar eficientemente a várias classes de moléculas orgânicas de uma variedade de espécies de plantas. A natureza complementar desta técnica em relação a métodos mais tradicionais também tem sido demonstrada anteriormente.

Introduction

O isolamento e identificação de produtos naturais são de fundamental importância para a comunidade científica e sociedade em geral. 1 bioprospecção, a busca de valiosas moléculas orgânicas encontradas na natureza, continua a ser um processo indispensável na descoberta de novas drogas de pistas e potenciais agentes terapêuticos. Estima-se que, de 1981-2014, ~ 75% de todos os medicamentos aprovados pequena molécula eram produtos naturais, natural natural ou produto derivado produto inspirado. 1 além disso, produtos naturais possuem enorme diversidade estrutural e química. Por esta razão, eles também representam andaimes químicos valiosos que podem diretamente ser usados em síntese orgânica ou no desenvolvimento de ligantes quirais e catalisadores. 2 , 3

Tradicionalmente, os procedimentos relativamente demorada como destilação a vapor, extração de Soxhlet e maceração são o sustentáculo da investigação centrada-se o isolamento de metabólitos secundários de plantas. 4 mais modernas técnicas de extração, incluindo extração solvente acelerada, concentraram-se na redução de tempos de extração e estabelecer protocolos mais verdes. 4 , 5 em 2015, um método de extração (PHWE) de água quente sob pressão original foi relatado. 6 esta técnica empregada uma máquina de espresso doméstica sem modificações para facilitar a extração particularmente eficiente e rápida de ácido xiquímico de anis estrelado. Máquinas de café expresso foram especificamente concebidas e projetadas para extrair as moléculas orgânicas dos feijões de café chão adequadamente. Para conseguir este, estes instrumentos aquecer a água a temperaturas acima de 96 ° C e a pressões de tipicamente 9 bar. 7 com isto em mente, talvez não é surpreendente que as máquinas de café expresso podem ser utilizadas para extrair eficientemente produtos naturais de uma gama de material vegetal.

Estudos posteriores envolvendo uma variedade de espécies de plantas terrestres têm demonstrado a capacidade desta técnica de PHWE para extrair eficientemente produtos naturais através de uma gama relativamente ampla de polaridade. 6 , 8 , 9 , 10 , 11 , 12 , 13 , 14 , 15 além disso, compostos contendo grupos funcionais um pouco sensíveis, tais como aldeídos, epóxidos, glicosídeos e potencialmente epimerizable estereogênico centros eram normalmente não afetados pelo processo de extração. Também foi demonstrada a natureza complementar desta técnica em relação a métodos mais tradicionais. 12 , 16 método este PHWE também tem sido empregado para isolar quantidades multi gramas de produtos naturais, que têm sido utilizados para preparar derivados de romance produto natural e na síntese da molécula complexa em geral. 8 , 11 , 17

Identificou-se que este novo método PHWE poderia servir como uma ferramenta de ensino úteis que poderia ser incorporada no laboratório de graduação. Isto principalmente deriva da natureza rápida desta técnica em relação os métodos de extração tradicional que muitas vezes são incompatíveis com as restrições de tempo associadas com experimentos de laboratório de graduação. Por conseguinte, esta técnica suplantou o experimento de laboratório de química graduação tradicional focado na extração do eugenol do cravo empregando destilação a vapor para a Universidade da Tasmânia. 9 , 18 desde aquela época, variações desta experiência foram adoptadas por outras universidades e um experimento modificado, focando a PHWE de cravo agora recursos no programa de laboratório de química de graduação na Universidade de Sydney (vide infra ).

Para demonstrar a praticidade e a viabilidade de empregar esta nova abordagem PHWE para fins pedagógicos, dois protocolos são apresentados como parte deste estudo. A primeira parte deste relatório destaca uma experiência sobre a PHWE de eugenol e acetyleugenol de cravo, que faz parte do programa de graduação laboratório segundo ano na Universidade de Sydney (Figura 1). Esta experiência serve para introduzir os alunos à química de produtos naturais durante o desenvolvimento de habilidades práticas fundamentais. A segunda parte apresenta uma experiência sobre a PHWE da espécie endêmica vegetal australiano Correa reflexa , que faz parte do programa de graduação laboratório terceiro ano na Universidade da Tasmânia (Figura 2). Esta experiência é projetada para simular a bioprospecção de produtos naturais e reforçar as técnicas de laboratório do núcleo. 11

Protocol

Nota: É aconselhável que todos os procedimentos são realizados em uma coifa. Os alunos devem usar equipamento de protecção adequado em todos os momentos no laboratório e fichas de dados de segurança (SDS) associadas com cada reagente devem ser consultadas antes do uso. 1. PHWE de cravo: isolamento do eugenol e acetyleugenol Extração de eugenol e acetyleugenol de dentes Lugar grosseira solo cravo (12,5 g) em um copo de 250 mL. …

Representative Results

PHWE de dentes. Ao tentar executar a etapa de extração líquido-líquido, os alunos frequentemente encontraram emulsões (a adição de salmoura normalmente não foi eficaz). Nesta fase, os alunos foram instruídos a deixar a mistura repousar na ampola de decantação, enquanto eles exploraram os efeitos da composição de eluente na separação de eugenol e acetyleugenol do TLC. Note-se que hexano pode ser substituído com heptano ou diclorometano na etapa de extração líquido-líqui…

Discussion

O procedimento clássico para isolar o eugenol do cravo por destilação a vapor tem sido parte do programa de laboratório de química intermediária na Universidade de Sydney há décadas, mas foi modernizado para empregar a metodologia PHWE em 2016 (Figura 1). 9 , 18 isso forneceu um número de benefícios. Em primeiro lugar, utilizar máquinas de café expresso doméstico no ambiente do laboratório imediatamente fascinado e envo…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Os autores reconhecem a escola de ciências naturais – química, Universidade da Tasmânia e a escola de química, Universidade de Sydney, para apoio financeiro. B.J.D. e J.J. agradecem ao governo australiano para bolsas de programa de formação de pesquisa.

Materials

espresso machines Breville/Sunbeam Breville espresso machine model 800ES / Sunbeam EM3820 Café Espresso II
rotary evporators Buchi and Heidolph
cloves (plant material) Dijon Food Pty Ltd Cloves must be ground in a food processor for students.
Correa reflexa (plant material) sample obtained in Tasmania Sample collected from mature shrubs in the Thomas Crawford Reserve at the University of Tasmania
sand Ajax 1199
ethanol Redoc Chemicals E95 F3
hexanes Ajax 251
magnesium sulfate Ajax 1548
diethyl ether Merck 1009215000
silica on aluminium TLC plates Merck 1055540001
eugenol Merck 1069620100
eugenyl acetate Aldrich W246905
acetone Redox Chemicals Aceton13
cyclohexane ChemSupply CA019
silica gel 60 Trajan 5134312 40 – 63um (230-400mesh)
Congo red paper ChemSupply IS070-100S
32% hydrochloric acid Ajax 256

References

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Ho, C. C., Deans, B. J., Just, J., Warr, G. G., Wilkinson, S., Smith, J. A., Bissember, A. C. Employing Pressurized Hot Water Extraction (PHWE) to Explore Natural Products Chemistry in the Undergraduate Laboratory. J. Vis. Exp. (141), e58195, doi:10.3791/58195 (2018).

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