Un metodo delle nanoparticelle d'argento per il miglioramento di sindrome di Atresia biliare nei topi
Summary
Questo articolo viene descritto in dettaglio un metodo basato su nanoparticelle d’argento per il miglioramento di sindrome di atresia biliare in un modello murino di atresia biliare sperimentale. Una solida comprensione del processo di preparazione del reagente e la tecnica di iniezione neonatale del mouse vi aiuterà a familiarizzare i ricercatori con il metodo utilizzato in studi di modello del mouse neonatale.
Abstract
Atresia biliare (BA) è un tipo severo di colangite con alto tasso di mortalità nei bambini di cui l’eziologia ancora completamente non è capita. Le infezioni virali possono essere una causa possibile. Il tipico modello animale utilizzato per lo studio di BA è stabilito inoculando un mouse neonatale con un rotavirus rhesus. Nanoparticelle d’argento sono state indicate per esercitare gli effetti antivirali e antibatterici; la loro funzione nel modello del topo di BA viene valutata in questo studio. Attualmente, negli esperimenti sugli animali BA, i metodi utilizzati per migliorare i sintomi dei topi BA sono generalmente sintomatici trattamenti somministrati tramite cibo o altri farmaci. Lo scopo di questo studio è di dimostrare un nuovo metodo per il miglioramento di sindrome di BA in topi tramite l’iniezione intraperitoneale di nanoparticelle d’argento e di fornire metodi dettagliati per preparare la formulazione in gel di nanoparticelle d’argento. Questo metodo è semplice e ampiamente applicabile e può essere utilizzato per ricercare il meccanismo di BA, così come nei trattamenti clinici. Basato su modello del topo di BA, quando i topi presentano ittero, il gel preparati delle nanoparticelle d’argento è iniettato intraperitonealmente alla superficie del fegato inferiore. Si osserva lo stato di sopravvivenza, e gli indicatori biochimici e l’istopatologia del fegato sono esaminati. Questo metodo consente una comprensione più intuitiva di entrambi l’istituzione del modello BA e trattamenti novelli BA.
Introduction
BA è una forma di colestasi caratterizzata da ittero persistente e ha elevata mortalità in assenza di trapianto del fegato. Le infezioni virali sono strettamente associate con la patogenesi di BA. Il citomegalovirus, reovirus e rotavirus sono stati suggeriti come agenti patogeni in BA1,2,3. Durante il periodo neonatale, la risposta del sistema immunitario immaturo ad un’infezione virale provoca dysregulation immune contro dotti biliari extra – e intraepatiche, che portano all’apoptosi delle cellule epiteliali biliari, infiltrazione infiammatoria delle cellule nel portale zona, ostruzione dei dotti biliari intraepatici ed extrahepatic e infine, fibrosi del fegato4,5,6.
Il modello animale comunemente usato per gli studi di BA coinvolge l’inoculazione di un mouse neonatale con i rotavirus rhesus (RRV). Il mouse si sviluppa tipicamente ittero dopo 5-6 giorni, mostrando un basso peso corporeo e feci acoliche. Il ruolo della risposta immunitaria nel processo di malattia è fondamentale, soprattutto per le cellule natural killer (NK); l’esaurimento di queste cellule con l’anticorpo anti-NKG2D riduce notevolmente i danni indotti su BA7. Inoltre, altre cellule, compreso CD4+ T cellule, CD8+ T cellule, cellule dendritiche e cellule di T regolarici, sono state indicate per svolgere i ruoli nella malattia8,9,10,11. Tutti i dati suggeriscono il carattere indispensabile del sistema immunitario nel corso della BA.
Nanoparticelle d’argento (AgNPs) sono state dimostrate per avere effetti benefici contro alcune malattie infettive, tra cui infezioni batteriche12 e infezioni virali13,14,15. Tuttavia, diverso da quello d’uso dermatologico, pochi studi hanno utilizzato AgNPs in un trattamento clinico, soprattutto a causa della loro potenziale tossicità. Negli esperimenti sugli animali, i ricercatori hanno studiato in generale l’efficacia di AgNPs somministrato via orale16 o endovenosa metodi17. Tuttavia, nessun altri ricercatori hanno studiato l’efficacia di AgNPs somministrato tramite un’iniezione intraperitoneale (i.p.) nel topo neonatale esperimenti, che è un metodo semplice e veloce che conduce ad un effetto più diretto sul fegato e vie biliari mentre riducendo la tossicità di altri sistemi, quali il sistema immunitario. AgNPs hanno dimostrato di influenzare l’ attività delle cellule NK18; di conseguenza, abbiamo testato gli effetti terapeutici di AgNPs somministrato tramite iniezione i.p. nel modello del topo di BA.
Protocol
Representative Results
Discussion
AgNPs Mostre potenti proprietà antibatteriche ad ampio spettro e un forte permeabilità22; Inoltre, essi vengono utilizzati per produrre una gamma di prodotti medicali antibatterico23. Tuttavia, AgNPs può richiedere molto tempo per cancellare una volta che si accumulano negli organi, e questa persistenza può portare a effetti tossici24,25. Un precedente studio ha esaminato la tossicità acuta e la genotossicità …
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Il AgNPs usato qui erano un regalo da C. M. Che il dipartimento di chimica, Università di Hong Kong. Questo lavoro è stato finanziato dal National Natural Science Foundation of China (No. 81600399), la scienza e la tecnologia progetto di Guangzhou (No.201707010014).
Materials
| BALB/c mouse | Guangdong Medical Experimental Animal Center | SYXK2017-0174 | Animal experiment |
| Rhesus rotavirus (RRV) | ATCC | ATCC VR-1739 | Establish biliary atresia mouse model |
| MA104 cells | ATCC | ATCC CRL-2378.1 | For laboratory use only |
| DMEM | Thermo Fisher | 10569010 | Mammalian Cell Culture |
| Fetal Bovine Serum | Thermo Fisher | 10099141 | Mammalian Cell Culture |
| collagen Type I | CORNING | 354236 | For research use only |
| PBS buffer | OXOID | BR0014G | For washing |
| NaOH | Sigma | 1310-73-2 | Adjust the PH value |
| AgNP | Antibacterial Note: The AgNps was a gift from Prof CM Che. in the Department of Chemistry, the University of Hong Kong. |
||
| Insulin syringe with integrated needle | BD | 9161635S | For medical use |
| 15-mL Centrifuge Tube | Corning | 430791 | For laboratory use only |
| 1.5-mL Microcentrifuge Tube | GEB | CT0200-B-N | For laboratory use only |
| Microscope | Nikon | ECLIPSE-Ci | For laboratory use |
| Dissecting/Intravital microscope | Nikon | SMZ 1000 | For laboratory use |
| anti-Mouse NKp46 FITC | eBioscience | 11-3351 | For research use only |
| anti-Mouse CD4 PE-Cyanine5 | eBioscience | 15-0041 | For research use only |
| Monoclonal Mouse Anti-Human CD4 | DAKO | 20001673 | For research use only |
| anti-NKG2D | RD | MAB1547 | For research use only |
| BD FACSCanto Flow Cytometer | BD Biosciences | FACS Canto Plus | For laboratory use only |
References
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